目的:通過建立硫酸鎳(NiSO₄)體外處理的大鼠睪丸間質(zhì)(Leydig)細(xì)胞類固醇合成障礙模型,篩選顯著性差異表達(dá)的長鏈非編碼RNAs(lncRNAs)、微小RNA(miRNAs)以及mRNAs并驗(yàn)證,構(gòu)建競爭性內(nèi)源性RNA(ceRNA)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)并檢測PI3K/Akt信號通路相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),探討其在鎳致大鼠Leydig細(xì)胞類固醇合成障礙中的作用機(jī)制。方法:(1)摘取大鼠睪丸,采用0.25%IV型膠原酶消化、Percoll密度梯度(5%、30%、58%和70%)離心法和體外差速貼壁培養(yǎng)得到純化的Leydig細(xì)胞。(2)使用不同濃度NiSO₄(0、250、500和1000μmol/L)處理處于對數(shù)生長期的Leydig細(xì)胞24 h,于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的改變。(3)采用MTT法對Leydig細(xì)胞存活率進(jìn)行測定。(4)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)用于檢測在1 IU/mL人絨毛膜促性腺激素(hCG)存在下不同濃度NiSO₄(0、250、500和1000μmol/L)處理24 h的Leydig細(xì)胞培養(yǎng)液中睪酮含量。...

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 鎳的來源與暴露
    1.2 鎳的一般毒性及特殊毒性
    1.3 鎳的生殖毒性
    1.4 鎳對Leydig細(xì)胞類固醇生成的影響
    1.5 非編碼RNAs與鎳的毒性
    1.6 非編碼RNAs對類固醇生成的影響
    1.7 CeRNA機(jī)制
    1.8 PI3K/Akt信號通路對類固醇生成的影響
    1.9 研究目的及意義
    1.10 技術(shù)路線圖
第二章 鎳致大鼠Leydig細(xì)胞類固醇合成障礙研究及相關(guān)ceRNA網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
第三章 PI3K/Akt信號通路在鎳致大鼠Leydig細(xì)胞睪酮生成障礙中的作用研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 不足與展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
在校期間的研究成果
致謝



本文編號：3780306