目的:通過建立硫酸鎳(NiSO₄)體外處理的大鼠睪丸間質(Leydig)細胞類固醇合成障礙模型,篩選顯著性差異表達的長鏈非編碼RNAs(lncRNAs)、微小RNA(miRNAs)以及mRNAs并驗證,構建競爭性內源性RNA(ceRNA)調控網絡并檢測PI3K/Akt信號通路相關基因和蛋白的表達,探討其在鎳致大鼠Leydig細胞類固醇合成障礙中的作用機制。方法:(1)摘取大鼠睪丸,采用0.25%IV型膠原酶消化、Percoll密度梯度(5%、30%、58%和70%)離心法和體外差速貼壁培養(yǎng)得到純化的Leydig細胞。(2)使用不同濃度NiSO₄(0、250、500和1000μmol/L)處理處于對數生長期的Leydig細胞24 h,于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的改變。(3)采用MTT法對Leydig細胞存活率進行測定。(4)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)用于檢測在1 IU/mL人絨毛膜促性腺激素(hCG)存在下不同濃度NiSO₄(0、250、500和1000μmol/L)處理24 h的Leydig細胞培養(yǎng)液中睪酮含量。...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 鎳的來源與暴露
    1.2 鎳的一般毒性及特殊毒性
    1.3 鎳的生殖毒性
    1.4 鎳對Leydig細胞類固醇生成的影響
    1.5 非編碼RNAs與鎳的毒性
    1.6 非編碼RNAs對類固醇生成的影響
    1.7 CeRNA機制
    1.8 PI3K/Akt信號通路對類固醇生成的影響
    1.9 研究目的及意義
    1.10 技術路線圖
第二章 鎳致大鼠Leydig細胞類固醇合成障礙研究及相關ceRNA網絡的構建
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 實驗結果
    2.4 討論
第三章 PI3K/Akt信號通路在鎳致大鼠Leydig細胞睪酮生成障礙中的作用研究
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
    3.3 實驗結果
    3.4 討論
第四章 結論與展望
    4.1 結論
    4.2 不足與展望
參考文獻
縮略詞表
在校期間的研究成果
致謝



本文編號：3780306