本文關(guān)鍵詞：Ac-SDKP對(duì)PKA和ROCK信號(hào)交互作用的調(diào)節(jié)抑制矽肺纖維化的作用及其機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究N-乙�；�-絲氨酸-天門(mén)冬氨酰-賴氨酸-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP)是否能夠通過(guò)活化c AMP依賴性蛋白激酶(protein kinase A,PKA)信號(hào)抑制血管緊張素(angiotensin,Ang)II/ROCK(Rho-associated coiled-coil-forming protien kinase)介導(dǎo)的矽肺肌成纖維細(xì)胞分化,進(jìn)而發(fā)揮抗矽肺纖維化的作用。方法構(gòu)建矽肺大鼠動(dòng)物模型,并予以Ac-SDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療,通過(guò)免疫熒光染色法觀察肺組織內(nèi)PKA蛋白、α-平滑肌激動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達(dá)與分布,western blot法檢測(cè)PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白的表達(dá)。MRC-5人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中采用Ang II誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5),并予以Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632、6-Bnzc AMP預(yù)處理,通過(guò)免疫熒光染色法觀察PKA、α-SMA的表達(dá)與定位,western blot法檢測(cè)PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白的表達(dá)。用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果在矽肺動(dòng)物模型組中,免疫熒光化學(xué)染色可見(jiàn)α-SMA在矽肺組高表達(dá),而PKA則是低表達(dá)。western blot法檢測(cè)矽肺4周、8周組中PKA蛋白表達(dá)下調(diào),分別是對(duì)照4周、8周組的12.50%和10.25%,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療后則能夠顯著上調(diào)PKA蛋白表達(dá),分別是矽肺8周組的3.50倍和4.62倍。而ROCK、P-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白表達(dá)則正好相反。矽肺4周、8周組ROCK蛋白表達(dá)是對(duì)照4周、8周組的3.82倍和3.62倍,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療后ROCK蛋白表達(dá)明顯下調(diào),分別是矽肺8周組的21.83%和22.98%;P-MBS蛋白表達(dá)在矽肺4周、8周組中表達(dá)明顯上調(diào),分別是對(duì)照4周、8周組的3.07倍和2.78倍,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療后p-MBS蛋白表達(dá)明顯下調(diào),分別是矽肺8周組的48.31%和50.56%;α-SMA蛋白在矽肺4周、8周組表達(dá)上調(diào),分別是對(duì)照4周、8周組的6.26倍和4.05倍,給予AcSDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療后,α-SMA蛋白表達(dá)分別是矽肺8周組的43.20%和28.39%;I型膠原蛋白在矽肺4周、8周組明顯上調(diào),分別是對(duì)照4周、8周組的6.88倍和5.53倍,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療后I型膠原表達(dá)明顯下調(diào),分別是矽肺8周組的52.77%和65.27%;差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,給予Ang II誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞,Ang II能夠刺激MRC-5細(xì)胞表達(dá)α-SMA和I型膠原蛋白,并呈現(xiàn)出一定的時(shí)間依賴效應(yīng)。免疫熒光染色顯示,給予Ang II誘導(dǎo)后PKA表達(dá)則較對(duì)照組明顯減弱,而α-SMA蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)。同時(shí)western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:給予Ang II刺激誘導(dǎo)后PKA蛋白表達(dá)明顯下調(diào),是對(duì)照組的21.13%,當(dāng)給予Ac-SDKP、Valsartan或Y-27632預(yù)處理后PKA蛋白顯著增高,分別是Ang II組的5.23倍、5.96倍、3.30倍,予以PKA激活劑6-Bnz-c AMP誘導(dǎo)后,呈現(xiàn)出和Ac-SDKP相同的表達(dá)結(jié)果,是Ang II刺激組的3.88倍。給予Ang II誘導(dǎo)后,ROCK、p-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白表達(dá)均上調(diào),其中,Ang II刺激組中ROCK蛋白表達(dá)是對(duì)照組的2.46倍,當(dāng)給予AcSDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnz-c AMP預(yù)處理后,ROCK蛋白表達(dá)明顯降低,分別是Ang II刺激組的46.87%、52.50%、56.87%、51.87%;Ang II刺激組的p-MBS蛋白是對(duì)照組的3.02倍,當(dāng)給予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnz-c AMP預(yù)處理后,p-MBS蛋白表達(dá)明顯降低,分別是Ang II刺激組的31.12%、24.50%、21.19%、19.86%;Ang II刺激組α-SMA蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯增高,是對(duì)照組的2.67倍,當(dāng)給予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnz-c AMP預(yù)處理后,α-SMA蛋白表達(dá)明顯降低,分別是Ang II刺激組的39.66%、27.37%、44.13%、22.90%;Ang II刺激組I型膠原蛋白表達(dá),是對(duì)照組的4.02倍,當(dāng)給予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnzc AMP預(yù)處理后,I型膠原表達(dá)明顯降低,分別是Ang II刺激組的45.22%、36.94%、43.94%、45.85%;差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。以上結(jié)果表明AcSDKP能夠通過(guò)對(duì)PKA表達(dá)的上調(diào),抑制Ang II介導(dǎo)的ROCK信號(hào)通路,進(jìn)而阻抑肌成纖維細(xì)胞的分化。結(jié)論Ac-SDKP能夠通過(guò)對(duì)PKA和ROCK信號(hào)交互作用的調(diào)節(jié),抑制Ang II誘導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞的分化,從而發(fā)揮抗矽肺纖維化的作用。
【關(guān)鍵詞】：N-乙�；�-絲氨酰-天門(mén)冬酰-賴氨酰-脯氨酸 血管緊張素II 肌成纖維細(xì)胞 肺纖維化
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R135.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-12
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究12-34
• 1.1 材料與方法12-18
• 1.1.1 材料12-14
• 1.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)14-16
• 1.1.3 矽肺大鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)16-17
• 1.1.4 檢測(cè)指標(biāo)17-18
• 1.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理18
• 1.2 結(jié)果18-26
• 1.2.1 大鼠肺組織內(nèi)PKA、α-SMA蛋白的分布與表達(dá)18-21
• 1.2.2 Ang II誘導(dǎo)MRC-5 人胚肺成纖維細(xì)胞PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA和I型膠原蛋白表達(dá)的時(shí)間依賴效應(yīng)21-23
• 1.2.3 Ac-SDKP對(duì)AngII誘導(dǎo)刺激MRC-5 細(xì)胞的PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA和I型膠原蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)23-26
• 1.3 討論26-30
• 1.3.1 血管緊張素II（Ang II）對(duì)肌成纖維細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用26-27
• 1.3.2 cAMP/PKA信號(hào)與ROCK/p-MBS信號(hào)交互作用調(diào)控肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化27-29
• 1.3.3 Ac-SDKP對(duì)Ang II介導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用29-30
• 1.4 小結(jié)30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 第2章 綜述 RAS與器官纖維化34-48
• 2.1 肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化與器官纖維化34-36
• 2.2 腎素血管緊張素系統(tǒng)與器官纖維化36-38
• 2.3 ROCK信號(hào)與器官纖維化38-41
• 2.4 Ac-SDKP與矽肺纖維化41-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 結(jié)論48-49
• 致謝49-50
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介50-51
• 作者簡(jiǎn)介51-53
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 ;Organ fibrosis inhibited by blocking transforming growth factor-β signaling via peroxisome proliferator-activated receptor γ agonists[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2012年05期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 徐洪;Ac-SDKP抗矽肺纖維化作用的新靶向—肌成纖維細(xì)胞分化和差異蛋白的篩選[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉恒;Rho/Rho激酶信號(hào)通路和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在2型糖尿病大鼠腎病中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：Ac-SDKP對(duì)PKA和ROCK信號(hào)交互作用的調(diào)節(jié)抑制矽肺纖維化的作用及其機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：375319