本文關鍵詞：Ac-SDKP對PKA和ROCK信號交互作用的調節(jié)抑制矽肺纖維化的作用及其機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究N-乙�；�-絲氨酸-天門冬氨酰-賴氨酸-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP)是否能夠通過活化c AMP依賴性蛋白激酶(protein kinase A,PKA)信號抑制血管緊張素(angiotensin,Ang)II/ROCK(Rho-associated coiled-coil-forming protien kinase)介導的矽肺肌成纖維細胞分化,進而發(fā)揮抗矽肺纖維化的作用。方法構建矽肺大鼠動物模型,并予以Ac-SDKP抗纖維化治療或預防治療,通過免疫熒光染色法觀察肺組織內PKA蛋白、α-平滑肌激動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達與分布,western blot法檢測PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白的表達。MRC-5人胚肺成纖維細胞培養(yǎng)實驗中采用Ang II誘導人胚肺成纖維細胞(MRC-5),并予以Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632、6-Bnzc AMP預處理,通過免疫熒光染色法觀察PKA、α-SMA的表達與定位,western blot法檢測PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白的表達。用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析,P0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。結果在矽肺動物模型組中,免疫熒光化學染色可見α-SMA在矽肺組高表達,而PKA則是低表達。western blot法檢測矽肺4周、8周組中PKA蛋白表達下調,分別是對照4周、8周組的12.50%和10.25%,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預防治療后則能夠顯著上調PKA蛋白表達,分別是矽肺8周組的3.50倍和4.62倍。而ROCK、P-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白表達則正好相反。矽肺4周、8周組ROCK蛋白表達是對照4周、8周組的3.82倍和3.62倍,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預防治療后ROCK蛋白表達明顯下調,分別是矽肺8周組的21.83%和22.98%;P-MBS蛋白表達在矽肺4周、8周組中表達明顯上調,分別是對照4周、8周組的3.07倍和2.78倍,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預防治療后p-MBS蛋白表達明顯下調,分別是矽肺8周組的48.31%和50.56%;α-SMA蛋白在矽肺4周、8周組表達上調,分別是對照4周、8周組的6.26倍和4.05倍,給予AcSDKP抗纖維化治療或預防治療后,α-SMA蛋白表達分別是矽肺8周組的43.20%和28.39%;I型膠原蛋白在矽肺4周、8周組明顯上調,分別是對照4周、8周組的6.88倍和5.53倍,給予Ac-SDKP抗纖維化治療或預防治療后I型膠原表達明顯下調,分別是矽肺8周組的52.77%和65.27%;差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。體外細胞培養(yǎng)實驗中,給予Ang II誘導MRC-5細胞,Ang II能夠刺激MRC-5細胞表達α-SMA和I型膠原蛋白,并呈現(xiàn)出一定的時間依賴效應。免疫熒光染色顯示,給予Ang II誘導后PKA表達則較對照組明顯減弱,而α-SMA蛋白表達顯著增強。同時western blot檢測結果顯示:給予Ang II刺激誘導后PKA蛋白表達明顯下調,是對照組的21.13%,當給予Ac-SDKP、Valsartan或Y-27632預處理后PKA蛋白顯著增高,分別是Ang II組的5.23倍、5.96倍、3.30倍,予以PKA激活劑6-Bnz-c AMP誘導后,呈現(xiàn)出和Ac-SDKP相同的表達結果,是Ang II刺激組的3.88倍。給予Ang II誘導后,ROCK、p-MBS、α-SMA、I型膠原蛋白表達均上調,其中,Ang II刺激組中ROCK蛋白表達是對照組的2.46倍,當給予AcSDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnz-c AMP預處理后,ROCK蛋白表達明顯降低,分別是Ang II刺激組的46.87%、52.50%、56.87%、51.87%;Ang II刺激組的p-MBS蛋白是對照組的3.02倍,當給予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnz-c AMP預處理后,p-MBS蛋白表達明顯降低,分別是Ang II刺激組的31.12%、24.50%、21.19%、19.86%;Ang II刺激組α-SMA蛋白表達較對照組明顯增高,是對照組的2.67倍,當給予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnz-c AMP預處理后,α-SMA蛋白表達明顯降低,分別是Ang II刺激組的39.66%、27.37%、44.13%、22.90%;Ang II刺激組I型膠原蛋白表達,是對照組的4.02倍,當給予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活劑6-Bnzc AMP預處理后,I型膠原表達明顯降低,分別是Ang II刺激組的45.22%、36.94%、43.94%、45.85%;差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。以上結果表明AcSDKP能夠通過對PKA表達的上調,抑制Ang II介導的ROCK信號通路,進而阻抑肌成纖維細胞的分化。結論Ac-SDKP能夠通過對PKA和ROCK信號交互作用的調節(jié),抑制Ang II誘導的肌成纖維細胞的分化,從而發(fā)揮抗矽肺纖維化的作用。
【關鍵詞】：N-乙�；�-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸 血管緊張素II 肌成纖維細胞 肺纖維化
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R135.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-12
• 第1章 實驗研究12-34
• 1.1 材料與方法12-18
• 1.1.1 材料12-14
• 1.1.2 細胞培養(yǎng)實驗14-16
• 1.1.3 矽肺大鼠動物模型實驗16-17
• 1.1.4 檢測指標17-18
• 1.1.5 統(tǒng)計學處理18
• 1.2 結果18-26
• 1.2.1 大鼠肺組織內PKA、α-SMA蛋白的分布與表達18-21
• 1.2.2 Ang II誘導MRC-5 人胚肺成纖維細胞PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA和I型膠原蛋白表達的時間依賴效應21-23
• 1.2.3 Ac-SDKP對AngII誘導刺激MRC-5 細胞的PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA和I型膠原蛋白表達的調節(jié)23-26
• 1.3 討論26-30
• 1.3.1 血管緊張素II（Ang II）對肌成纖維細胞分化的調節(jié)作用26-27
• 1.3.2 cAMP/PKA信號與ROCK/p-MBS信號交互作用調控肌成纖維細胞的轉化27-29
• 1.3.3 Ac-SDKP對Ang II介導的肌成纖維細胞分化的調節(jié)作用29-30
• 1.4 小結30-31
• 參考文獻31-34
• 第2章 綜述 RAS與器官纖維化34-48
• 2.1 肌成纖維細胞轉化與器官纖維化34-36
• 2.2 腎素血管緊張素系統(tǒng)與器官纖維化36-38
• 2.3 ROCK信號與器官纖維化38-41
• 2.4 Ac-SDKP與矽肺纖維化41-42
• 參考文獻42-48
• 結論48-49
• 致謝49-50
• 導師簡介50-51
• 作者簡介51-53
• 學位論文數(shù)據(jù)集53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Organ fibrosis inhibited by blocking transforming growth factor-β signaling via peroxisome proliferator-activated receptor γ agonists[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2012年05期

2 佟浩;張曼;;RhoA經基質金屬蛋白酶-3、-9通路介導心力衰竭大鼠心肌重塑及心功能惡化[J];解剖學雜志;2008年02期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐洪;Ac-SDKP抗矽肺纖維化作用的新靶向—肌成纖維細胞分化和差異蛋白的篩選[D];河北醫(yī)科大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉恒;Rho/Rho激酶信號通路和肝細胞生長因子在2型糖尿病大鼠腎病中的作用[D];河北醫(yī)科大學;2012年

  本文關鍵詞：Ac-SDKP對PKA和ROCK信號交互作用的調節(jié)抑制矽肺纖維化的作用及其機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：375319