位于腸隱窩底部的干細(xì)胞自我更新和分化形成祖細(xì)胞之間的動態(tài)平衡是維持腸上皮結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的基礎(chǔ),利用譜系追蹤的小鼠實驗表明損傷后腸道干細(xì)胞和祖細(xì)胞在驅(qū)動腸上皮再生方面具有顯著的可塑性。綠原酸（Chlorogenic acid,CGA）作為最有潛力的植物源性的食品功能成分,已受到廣泛關(guān)注。基于細(xì)胞和動物模型的研究結(jié)果表明,綠原酸對機(jī)體腸道（細(xì)胞）損傷具有保護(hù)作用,但其作用機(jī)制尚不明確。本研究以脂多糖（LPS）誘導(dǎo)腸道損傷小鼠及腸道類器官為體內(nèi)和體外研究模型,利用qPCR、Elisa、流式細(xì)胞分析技術(shù)、干細(xì)胞體外3D培養(yǎng)等技術(shù)相結(jié)合,探究了綠原酸在腸道損傷狀態(tài)下,干細(xì)胞在腸上皮再生中的作用,揭示了綠原酸通過調(diào)節(jié)腸道干細(xì)胞功能實現(xiàn)其腸道上皮損傷保護(hù)機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:（1）與對照組小鼠相比,綠原酸可以緩解凋亡階段小鼠體重下降（對照組/綠原酸:小鼠體重分別下降1.0/0.6 g）,小腸長度縮短（33.0±0.9/36.0±0.3 cm）,小腸絨毛高度降低（712±9/737±18μm）;促進(jìn)增殖階段小腸絨毛高度恢復(fù)（對照組/綠原酸組:665±21/864±20μm）。除了小鼠體重和腸道結(jié)構(gòu)外,與對... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 綠原酸
        1.1.1 綠原酸的理化性質(zhì)
        1.1.2 綠原酸的分布
        1.1.3 綠原酸的吸收與代謝
        1.1.4 綠原酸的功能
    1.2 腸道干細(xì)胞
        1.2.1 腸道干細(xì)胞組成
        1.2.2 腸道干細(xì)胞微環(huán)境
        1.2.3 腸道干細(xì)胞與腸道損傷修復(fù)
    1.3 腸道類器官
    1.4 研究意義與內(nèi)容
        1.4.1 研究目的及意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
第2章 綠原酸對LPS誘導(dǎo)的小鼠腸道組織形態(tài)及炎癥反應(yīng)的影響
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要儀器設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 小鼠體重及溶液攝入量測定
        2.3.2 小鼠小腸組織的取材
        2.3.3 冰凍切片的制備
        2.3.4 HE染色
        2.3.5 總RNA提取
        2.3.6 cDNA合成
        2.3.7 實時熒光PCR
        2.3.8 ELISA
        2.3.9 數(shù)據(jù)處理及分析
    2.4 實驗結(jié)果與討論
        2.4.1 綠原酸添加過程中小鼠體重、飲水量的變化
        2.4.2 綠原酸對LPS誘導(dǎo)炎癥小鼠小腸結(jié)構(gòu)的影響
        2.4.3 綠原酸對LPS誘導(dǎo)的腸道炎癥反應(yīng)的影響
        2.4.4 綠原酸對LPS誘導(dǎo)的腸道上皮細(xì)胞凋亡的影響
    2.5 結(jié)論
第3章 綠原酸對腸道干細(xì)胞功能的影響
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 主要儀器設(shè)備
    3.3 實驗設(shè)計與方法
        3.3.1 十二指腸隱窩的分離制備
        3.3.2 腸道干細(xì)胞流式分析
        3.3.3 腸道細(xì)胞增殖能力檢測
        3.3.4 實時熒光PCR
        3.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.4 實驗結(jié)果與分析
        3.4.1 綠原酸對LPS誘導(dǎo)損傷小鼠分泌細(xì)胞和吸收細(xì)胞的影響
        3.4.2 綠原酸對LPS誘導(dǎo)損傷小鼠a ISC和 rISC的影響
        3.4.3 綠原酸對LPS誘導(dǎo)損傷小鼠緊密連接蛋白的影響
        3.4.4 綠原酸對LPS誘導(dǎo)腸道損傷小鼠Lgr5+數(shù)量的影響
        3.4.5 綠原酸對LPS誘導(dǎo)腸道損傷小鼠腸上皮細(xì)胞增殖及遷移功能的影響
    3.5 結(jié)論
第4章 綠原酸對腸上皮損傷保護(hù)機(jī)制通路研究
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗動物
        4.2.2 主要試劑
        4.2.3 主要儀器設(shè)備
    4.3 實驗設(shè)計與方法
        4.3.1 十二指腸隱窩的分離制備
        4.3.2 十二指腸類器官培養(yǎng)
        4.3.3 十二指腸類器官傳代
        4.3.4 綠原酸體外模擬消化
        4.3.5 實時熒光PCR
        4.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    4.4 實驗結(jié)果與分析
        4.4.1 綠原酸胃腸道消化率
        4.4.2 腸道類器官綠原酸及炎癥模型優(yōu)化
        4.4.3 綠原酸對LPS誘導(dǎo)腸道損傷小鼠JAK通路的影響
        4.4.4 Tofacitinib抑制腸道類器官JAK信號通路模型優(yōu)化
        4.4.5 基于腸道類器官研究綠原酸在損傷環(huán)境下對吸收細(xì)胞和分泌細(xì)胞的影響
        4.4.6 綠原酸通過JAK途徑調(diào)節(jié)腸道干細(xì)胞
    4.5 結(jié)論
第5章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 存在問題及展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3714913