鎘作為環(huán)境中常見的重金屬污染物,可引起多種器官和組織的損傷。近年來,隨著鎘生產(chǎn)、使用量的增加及工業(yè)污染加重,使得環(huán)境中鎘含量快速上升,鎘暴露造成的公眾健康危害引起廣泛關注。腎臟是鎘毒性作用最主要靶器官之一,其中,腎小管是鎘毒性損傷主要靶位點,機體長期接觸鎘將會造成腎臟不可逆損傷。葛根素是從植物野葛干燥根中提取的一種異黃酮類化合物,具有抗氧化、降血糖和改善微循環(huán)等藥理活性,且毒性低、代謝快,安全可靠,在臨床上被廣泛用于治療心血管疾病和糖尿病及并發(fā)癥等。線粒體是細胞內(nèi)重要的雙層膜細胞器,除了為細胞正常生命活動提供必需能量外,還參與細胞分化、信號傳遞和細胞凋亡等過程。線粒體自噬被認為是線粒體質(zhì)量和數(shù)量控制的主要途徑。目前,葛根素與線粒體自噬在鎘致腎臟毒性過程中的研究較少。本文以原代大鼠腎小管上皮細胞為模型,研究葛根素如何通過調(diào)控線粒體自噬在鎘致細胞凋亡中發(fā)揮保護效應,為防止鎘對腎臟的毒性作用提供新思路。1.鎘對原代大鼠腎小管上皮細胞凋亡的影響采用機械碾磨結(jié)合膠原酶消化法獲取原代大鼠腎小管上皮（rPT）細胞。在對數(shù)生長期,用不同濃度鎘（0,1.25,2.5μM）處理rPT細胞12h,利用CCK... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略語
第一部分 文獻綜述
    1 鎘的毒性作用研究進展
        1.1 鎘的理化性質(zhì)
        1.2 鎘對環(huán)境的污染狀況
        1.3 鎘在體內(nèi)的代謝
        1.4 鎘的腎臟毒性
        1.5 鎘致腎臟毒性早期診斷指標
    2 細胞凋亡與線粒體自噬研究進展
        2.1 鎘致細胞凋亡及作用機制研究
        2.2 線粒體自噬研究進展
    3 葛根素
        3.1 葛根素簡介
        3.2 葛根素抗氧化研究
    4 本研究目的意義
第二部分 試驗研究
    第一章 鎘對原代大鼠腎小管上皮細胞凋亡的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 主要化學試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管上皮節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管上皮細胞傳代
            2.4 CCK-8法檢測細胞存活率
            2.5 DAPI探針染色
            2.6 免疫印跡法檢測相關蛋白表達量
            2.7 流式細胞術檢測細胞凋亡率
            2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3 實驗結(jié)果
            3.1 鎘對rPT細胞存活率的影響
            3.2 鎘對rPT細胞凋亡的影響
        4 討論
    第二章 鎘對原代大鼠腎小管上皮細胞線粒體自噬的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 主要化學試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管細胞傳代
            2.4 ATP含量檢測
            2.5 流式細胞術檢測MMP
            2.6 流式細胞術檢測ROS含量
            2.7 透射電鏡樣品制備
            2.8 Mito-Tracker Red和Lyso-Tracker Green探針共標記
            2.9 QRT-PCR檢測相關基因表達量
            2.10 免疫印跡法檢測相關蛋白表達量
            2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3 實驗結(jié)果
            3.1 鎘對rPT細胞線粒體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的影響
            3.2 鎘對rPT細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響
            3.3 鎘對rPT細胞MMP、ATP及ROS含量的影響
            3.4 鎘對rPT細胞線粒體自噬的影響
        4 討論
    第三章 鎘致原代大鼠腎小管上皮細胞損傷中線粒體自噬對細胞凋亡的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 主要化學試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管細胞傳代
            2.4 免疫印跡法檢測相關蛋白表達量
            2.5 流式細胞術檢測細胞凋亡率
            2.6 基因沉默
            2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3 實驗結(jié)果
            3.1 鎘與Mdivi共處理對線粒體自噬相關蛋白表達量的影響
            3.2 鎘與Mdivi共處理對rPT細胞凋亡的影響
            3.3 鎘與PINK1 siRNA共處理對線粒體自噬相關蛋白表達量的影響
            3.4 鎘與PINK1 siRNA共處理對Cleaved caspase-3蛋白表達量的影響
        4 討論
    第四章 葛根素對鎘致原代大鼠腎小管上皮細胞線粒體自噬和細胞凋亡的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 主要化學試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管細胞傳代
            2.4 CCK-8檢測細胞存活率
            2.5 ATP檢測
            2.6 流式細胞術檢測MMP
            2.7 流式細胞術檢測ROS含量
            2.8 DAPI探針染色
            2.9 流式細胞術檢測細胞凋亡率
            2.10 Mito-Tracker Red和Lyso-Tracker Green探針共標記
            2.11 透射電鏡樣品制備
            2.12 QRT-PCR檢測相關基因表達量
            2.13 免疫印跡法檢測相關蛋白表達量
            2.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3 實驗結(jié)果
            3.1 葛根素與鎘共處理對細胞存活率的影響
            3.2 葛根素與鎘共處理對MMP、ROS及ATP含量的影響
            3.3 葛根素與鎘共處理對線粒體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的影響
            3.4 葛根素與鎘共處理對細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響
            3.5 葛根素與鎘共處理對線粒體自噬的影響
            3.6 葛根素與鎘共處理對細胞凋亡的影響
        4 討論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]葛根素藥理作用機制探討及臨床應用[J]. 徐兆景.  中國現(xiàn)代藥物應用. 2016(08)
[2]土壤鎘污染現(xiàn)狀及危害研究進展[J]. 冉烈,李會合.  重慶文理學院學報(自然科學版). 2011(04)
[3]錳尾礦、礦渣浸出毒性及Cd、Pb溶出特性研究[J]. 王翔,付川,潘杰,程聰.  環(huán)境科學與管理. 2010(07)
[4]葛根素藥理作用機制探討及臨床應用[J]. 姚丹,丁選勝.  中國臨床藥理學與治療學. 2008(04)
[5]化肥行業(yè)鎘問題的進展與建議[J]. 王江平.  磷肥與復肥. 2004(05)
[6]重金屬鎘對動物及人類的毒性研究進展[J]. 謝黎虹,許梓榮.  浙江農(nóng)業(yè)學報. 2003(06)
[7]鎘毒性研究進展[J]. 任繼平,李德發(fā),張麗英.  動物營養(yǎng)學報. 2003(01)
[8]葛根素對氧自由基的清除和抗氧化性損傷作用[J]. 朱慶磊,何愛霞,呂欣然.  解放軍藥學學報. 2001(01)
[9]葛根素的藥理學和臨床應用研究進展[J]. 朱慶磊,呂欣然.  中草藥. 1997(11)
[10]葛根異黃酮的抗氧化作用[J]. 張光成,方思鳴.  中藥材. 1997(07)

碩士論文
[1]葛根素對鎘致大鼠腎臟損傷的保護效應[D]. 龍夢菲.揚州大學 2018
[2]長期低水平鎘暴露致大鼠腎臟毒效應的研究[D]. 劉靜靜.東南大學 2017
[3]鎘對大鼠腎小管上皮細胞的毒性作用及NAC的保護效應[D]. 曹瑾.揚州大學 2009
[4]氧化應激及Bcl-2在鎘誘導的HEK293細胞凋亡機制中的研究[D]. 田婷.南京師范大學 2007



本文編號：3671243