鎘作為環(huán)境中常見的重金屬污染物,可引起多種器官和組織的損傷。近年來,隨著鎘生產(chǎn)、使用量的增加及工業(yè)污染加重,使得環(huán)境中鎘含量快速上升,鎘暴露造成的公眾健康危害引起廣泛關(guān)注。腎臟是鎘毒性作用最主要靶器官之一,其中,腎小管是鎘毒性損傷主要靶位點(diǎn),機(jī)體長期接觸鎘將會(huì)造成腎臟不可逆損傷。葛根素是從植物野葛干燥根中提取的一種異黃酮類化合物,具有抗氧化、降血糖和改善微循環(huán)等藥理活性,且毒性低、代謝快,安全可靠,在臨床上被廣泛用于治療心血管疾病和糖尿病及并發(fā)癥等。線粒體是細(xì)胞內(nèi)重要的雙層膜細(xì)胞器,除了為細(xì)胞正常生命活動(dòng)提供必需能量外,還參與細(xì)胞分化、信號(hào)傳遞和細(xì)胞凋亡等過程。線粒體自噬被認(rèn)為是線粒體質(zhì)量和數(shù)量控制的主要途徑。目前,葛根素與線粒體自噬在鎘致腎臟毒性過程中的研究較少。本文以原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞為模型,研究葛根素如何通過調(diào)控線粒體自噬在鎘致細(xì)胞凋亡中發(fā)揮保護(hù)效應(yīng),為防止鎘對(duì)腎臟的毒性作用提供新思路。1.鎘對(duì)原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響采用機(jī)械碾磨結(jié)合膠原酶消化法獲取原代大鼠腎小管上皮（rPT）細(xì)胞。在對(duì)數(shù)生長期,用不同濃度鎘（0,1.25,2.5μM）處理rPT細(xì)胞12h,利用CCK... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略語
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 鎘的毒性作用研究進(jìn)展
        1.1 鎘的理化性質(zhì)
        1.2 鎘對(duì)環(huán)境的污染狀況
        1.3 鎘在體內(nèi)的代謝
        1.4 鎘的腎臟毒性
        1.5 鎘致腎臟毒性早期診斷指標(biāo)
    2 細(xì)胞凋亡與線粒體自噬研究進(jìn)展
        2.1 鎘致細(xì)胞凋亡及作用機(jī)制研究
        2.2 線粒體自噬研究進(jìn)展
    3 葛根素
        3.1 葛根素簡介
        3.2 葛根素抗氧化研究
    4 本研究目的意義
第二部分 試驗(yàn)研究
    第一章 鎘對(duì)原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞
            1.2 主要化學(xué)試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管上皮節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞傳代
            2.4 CCK-8法檢測細(xì)胞存活率
            2.5 DAPI探針染色
            2.6 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)量
            2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率
            2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 鎘對(duì)rPT細(xì)胞存活率的影響
            3.2 鎘對(duì)rPT細(xì)胞凋亡的影響
        4 討論
    第二章 鎘對(duì)原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞線粒體自噬的影響
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞
            1.2 主要化學(xué)試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管細(xì)胞傳代
            2.4 ATP含量檢測
            2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測MMP
            2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測ROS含量
            2.7 透射電鏡樣品制備
            2.8 Mito-Tracker Red和Lyso-Tracker Green探針共標(biāo)記
            2.9 QRT-PCR檢測相關(guān)基因表達(dá)量
            2.10 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)量
            2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 鎘對(duì)rPT細(xì)胞線粒體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的影響
            3.2 鎘對(duì)rPT細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響
            3.3 鎘對(duì)rPT細(xì)胞MMP、ATP及ROS含量的影響
            3.4 鎘對(duì)rPT細(xì)胞線粒體自噬的影響
        4 討論
    第三章 鎘致原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞損傷中線粒體自噬對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞
            1.2 主要化學(xué)試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管細(xì)胞傳代
            2.4 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)量
            2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率
            2.6 基因沉默
            2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 鎘與Mdivi共處理對(duì)線粒體自噬相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響
            3.2 鎘與Mdivi共處理對(duì)rPT細(xì)胞凋亡的影響
            3.3 鎘與PINK1 siRNA共處理對(duì)線粒體自噬相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響
            3.4 鎘與PINK1 siRNA共處理對(duì)Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)量的影響
        4 討論
    第四章 葛根素對(duì)鎘致原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞線粒體自噬和細(xì)胞凋亡的影響
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞
            1.2 主要化學(xué)試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠腎小管節(jié)段組織的分離培養(yǎng)
            2.3 原代大鼠腎小管細(xì)胞傳代
            2.4 CCK-8檢測細(xì)胞存活率
            2.5 ATP檢測
            2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測MMP
            2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測ROS含量
            2.8 DAPI探針染色
            2.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率
            2.10 Mito-Tracker Red和Lyso-Tracker Green探針共標(biāo)記
            2.11 透射電鏡樣品制備
            2.12 QRT-PCR檢測相關(guān)基因表達(dá)量
            2.13 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)量
            2.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 葛根素與鎘共處理對(duì)細(xì)胞存活率的影響
            3.2 葛根素與鎘共處理對(duì)MMP、ROS及ATP含量的影響
            3.3 葛根素與鎘共處理對(duì)線粒體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的影響
            3.4 葛根素與鎘共處理對(duì)細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響
            3.5 葛根素與鎘共處理對(duì)線粒體自噬的影響
            3.6 葛根素與鎘共處理對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]葛根素藥理作用機(jī)制探討及臨床應(yīng)用[J]. 徐兆景.  中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用. 2016(08)
[2]土壤鎘污染現(xiàn)狀及危害研究進(jìn)展[J]. 冉烈,李會(huì)合.  重慶文理學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2011(04)
[3]錳尾礦、礦渣浸出毒性及Cd、Pb溶出特性研究[J]. 王翔,付川,潘杰,程聰.  環(huán)境科學(xué)與管理. 2010(07)
[4]葛根素藥理作用機(jī)制探討及臨床應(yīng)用[J]. 姚丹,丁選勝.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2008(04)
[5]化肥行業(yè)鎘問題的進(jìn)展與建議[J]. 王江平.  磷肥與復(fù)肥. 2004(05)
[6]重金屬鎘對(duì)動(dòng)物及人類的毒性研究進(jìn)展[J]. 謝黎虹,許梓榮.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2003(06)
[7]鎘毒性研究進(jìn)展[J]. 任繼平,李德發(fā),張麗英.  動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2003(01)
[8]葛根素對(duì)氧自由基的清除和抗氧化性損傷作用[J]. 朱慶磊,何愛霞,呂欣然.  解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào). 2001(01)
[9]葛根素的藥理學(xué)和臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 朱慶磊,呂欣然.  中草藥. 1997(11)
[10]葛根異黃酮的抗氧化作用[J]. 張光成,方思鳴.  中藥材. 1997(07)

碩士論文
[1]葛根素對(duì)鎘致大鼠腎臟損傷的保護(hù)效應(yīng)[D]. 龍夢菲.揚(yáng)州大學(xué) 2018
[2]長期低水平鎘暴露致大鼠腎臟毒效應(yīng)的研究[D]. 劉靜靜.東南大學(xué) 2017
[3]鎘對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞的毒性作用及NAC的保護(hù)效應(yīng)[D]. 曹瑾.揚(yáng)州大學(xué) 2009
[4]氧化應(yīng)激及Bcl-2在鎘誘導(dǎo)的HEK293細(xì)胞凋亡機(jī)制中的研究[D]. 田婷.南京師范大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3671243