目的:構(gòu)建慢性錳暴露誘導(dǎo)的肝、腦損傷模型,探究細(xì)胞自噬與肝、腦損傷的相互聯(lián)系以及m-TOR信號通路的調(diào)控作用與意義,為錳中毒的防治提供理論依據(jù)。方法:利用C57小鼠建立慢性錳暴露模型,同時(shí)使用自噬抑制劑三甲基腺嘌呤（3-MA）進(jìn)行干預(yù),造模結(jié)束后用行為學(xué)方法檢測小鼠的行為學(xué)改變;原子吸收分光光度計(jì)檢測血錳含量;全自動生化分析儀檢測各組小鼠血清ALT、AST水平的變化;運(yùn)用HE染色法觀察幾組小鼠肝臟形態(tài)學(xué)的改變;透射電子顯微鏡觀察各組小鼠肝細(xì)胞、紋狀體、黑質(zhì)的損傷變化及自噬溶酶體的改變;TUNEL染色技術(shù)評估各組肝細(xì)胞的凋亡水平;Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白LC3-II、Beclin1以及m-TOR信號通路的表達(dá)情況。結(jié)果:1.動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明錳會誘導(dǎo)小鼠肝臟自噬水平升高并且導(dǎo)致肝損傷,而且這一過程伴隨著m-TOR以及其下游蛋白p70S6K的去磷酸化;2.與單獨(dú)錳暴露相比,3-MA干預(yù)后能夠降低肝臟ALT、AST水平（P<0.05）;3.HE染色與TUNEL染色顯示,錳暴露組肝細(xì)胞間隙有較多炎性細(xì)胞浸潤,肝雙核細(xì)胞數(shù)量增多且肝細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著增高。3-MA干預(yù)后,錳暴露... 

【文章來源】：陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
研究背景
    1 錳與錳毒性研究進(jìn)展
        1.1 錳的生理功能
        1.2 國內(nèi)錳中毒事件回顧
        1.3 錳的肝毒性
        1.4 錳的神經(jīng)毒性
        1.5 錳誘導(dǎo)的心血管毒性
        1.6 錳毒性和個(gè)體易感性
        1.7 錳中毒機(jī)制
        1.8 錳中毒的臨床治療
    2 自噬
        2.1 自噬的概念
        2.2 自噬與各類疾病
        2.3 m-TOR通路與自噬
實(shí)驗(yàn)一 錳抑制m-TOR信號通路并誘導(dǎo)肝細(xì)胞自噬
    1 材料
    2 方法
        2.1 Mn中毒小鼠模型的構(gòu)建
        2.2 血液和肝組織的收集
        2.3 肝組織蛋白的提取
        2.4 Western blot
        2.5 電鏡觀察
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 錳暴露后血錳升高
        3.2 錳暴露后ALT、AST增高
        3.3 錳暴露后線粒體出現(xiàn)損傷
        3.4 LC3-II、Beclin1 表達(dá)升高,m-TOR、p70S6K磷酸化表達(dá)下降
    4 討論
實(shí)驗(yàn)二 3-MA對慢性Mn暴露誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的影響
    1 材料
    2 方法
        2.1 Mn中毒小鼠模型構(gòu)建
        2.2 3-MA干預(yù)后血液和肝組織的收集
        2.3 HE染色
        2.4 TUNEL染色
        2.5 小鼠肝組織蛋白提取
        2.6 Western blot
        2.7 電鏡觀察
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 錳暴露后血錳升高
        3.2 抑制自噬后,ALT、AST表達(dá)情況
        3.3 抑制自噬后炎性細(xì)胞表達(dá)
        3.4 抑制自噬后線粒體損傷狀況
        3.5 抑制自噬后細(xì)胞凋亡狀況
        3.6 抑制自噬后m-TOR、P70表達(dá)狀況
    4 討論
實(shí)驗(yàn)三 抑制細(xì)胞自噬對慢性Mn暴露誘導(dǎo)的腦組織損傷的影響
    1 材料
    2 方法
        2.1 構(gòu)建Mn中毒小鼠模型
        2.2 行為學(xué)檢測(Pole Test)
        2.3 Mn暴露與3-MA干預(yù)后小鼠紋狀體和黑質(zhì)的收集
        2.4 小鼠肝組織蛋白提取
        2.5 Western blot
        2.6 電鏡觀察
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 自噬抑制后爬桿時(shí)間延長
        3.2 自噬抑制后線粒體損傷加重
        3.3 LC3-II、Beclin1 表達(dá)水平升高
    4 討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄 縮略語表
致謝
在學(xué)期間主要研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen.  Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[2]錳中毒動物模型研究與應(yīng)用進(jìn)展[J]. 陳曾曾,王鳳,閆永建.  中國職業(yè)醫(yī)學(xué). 2017(02)
[3]216例慢性錳中毒臨床分析[J]. 王廣松.  職業(yè)衛(wèi)生與病傷. 2002(02)

碩士論文
[1]低水平錳暴露對工人血清炎癥因子水平的影響[D]. 梁典胤.廣西醫(yī)科大學(xué) 2019



本文編號：3635852