發(fā)布時間：2022-02-20 21:38

　　目的:構建慢性錳暴露誘導的肝、腦損傷模型,探究細胞自噬與肝、腦損傷的相互聯系以及m-TOR信號通路的調控作用與意義,為錳中毒的防治提供理論依據。方法:利用C57小鼠建立慢性錳暴露模型,同時使用自噬抑制劑三甲基腺嘌呤（3-MA）進行干預,造模結束后用行為學方法檢測小鼠的行為學改變;原子吸收分光光度計檢測血錳含量;全自動生化分析儀檢測各組小鼠血清ALT、AST水平的變化;運用HE染色法觀察幾組小鼠肝臟形態(tài)學的改變;透射電子顯微鏡觀察各組小鼠肝細胞、紋狀體、黑質的損傷變化及自噬溶酶體的改變;TUNEL染色技術評估各組肝細胞的凋亡水平;Western blot檢測自噬相關蛋白LC3-II、Beclin1以及m-TOR信號通路的表達情況。結果:1.動物實驗結果表明錳會誘導小鼠肝臟自噬水平升高并且導致肝損傷,而且這一過程伴隨著m-TOR以及其下游蛋白p70S6K的去磷酸化;2.與單獨錳暴露相比,3-MA干預后能夠降低肝臟ALT、AST水平（P<0.05）;3.HE染色與TUNEL染色顯示,錳暴露組肝細胞間隙有較多炎性細胞浸潤,肝雙核細胞數量增多且肝細胞凋亡數量顯著增高。3-MA干預后,錳暴露... 

【文章來源】：陜西中醫(yī)藥大學陜西省

【文章頁數】：46 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
研究背景
    1 錳與錳毒性研究進展
        1.1 錳的生理功能
        1.2 國內錳中毒事件回顧
        1.3 錳的肝毒性
        1.4 錳的神經毒性
        1.5 錳誘導的心血管毒性
        1.6 錳毒性和個體易感性
        1.7 錳中毒機制
        1.8 錳中毒的臨床治療
    2 自噬
        2.1 自噬的概念
        2.2 自噬與各類疾病
        2.3 m-TOR通路與自噬
實驗一 錳抑制m-TOR信號通路并誘導肝細胞自噬
    1 材料
    2 方法
        2.1 Mn中毒小鼠模型的構建
        2.2 血液和肝組織的收集
        2.3 肝組織蛋白的提取
        2.4 Western blot
        2.5 電鏡觀察
        2.6 統計學分析
    3 結果
        3.1 錳暴露后血錳升高
        3.2 錳暴露后ALT、AST增高
        3.3 錳暴露后線粒體出現損傷
        3.4 LC3-II、Beclin1 表達升高,m-TOR、p70S6K磷酸化表達下降
    4 討論
實驗二 3-MA對慢性Mn暴露誘導的肝細胞損傷的影響
    1 材料
    2 方法
        2.1 Mn中毒小鼠模型構建
        2.2 3-MA干預后血液和肝組織的收集
        2.3 HE染色
        2.4 TUNEL染色
        2.5 小鼠肝組織蛋白提取
        2.6 Western blot
        2.7 電鏡觀察
        2.8 統計學分析
    3 結果
        3.1 錳暴露后血錳升高
        3.2 抑制自噬后,ALT、AST表達情況
        3.3 抑制自噬后炎性細胞表達
        3.4 抑制自噬后線粒體損傷狀況
        3.5 抑制自噬后細胞凋亡狀況
        3.6 抑制自噬后m-TOR、P70表達狀況
    4 討論
實驗三 抑制細胞自噬對慢性Mn暴露誘導的腦組織損傷的影響
    1 材料
    2 方法
        2.1 構建Mn中毒小鼠模型
        2.2 行為學檢測(Pole Test)
        2.3 Mn暴露與3-MA干預后小鼠紋狀體和黑質的收集
        2.4 小鼠肝組織蛋白提取
        2.5 Western blot
        2.6 電鏡觀察
        2.7 統計學分析
    3 結果
        3.1 自噬抑制后爬桿時間延長
        3.2 自噬抑制后線粒體損傷加重
        3.3 LC3-II、Beclin1 表達水平升高
    4 討論
結語
參考文獻
附錄 縮略語表
致謝
在學期間主要研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen.  Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[2]錳中毒動物模型研究與應用進展[J]. 陳曾曾,王鳳,閆永建.  中國職業(yè)醫(yī)學. 2017(02)
[3]216例慢性錳中毒臨床分析[J]. 王廣松.  職業(yè)衛(wèi)生與病傷. 2002(02)

碩士論文
[1]低水平錳暴露對工人血清炎癥因子水平的影響[D]. 梁典胤.廣西醫(yī)科大學 2019



本文編號：3635852