目的觀察大鼠肺泡巨噬細(xì)胞株NR8383細(xì)胞在染塵處理后的自噬情況,以LY294002阻斷磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）途徑,探討PI3K/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路在其自噬中的調(diào)控作用。方法 1常規(guī)培養(yǎng)NR8383細(xì)胞,分為空白組和染塵處理組,分別采用終濃度為0、50 mg/L的矽塵混懸液處理3、6、12、20和24 h后,收集細(xì)胞上清液,采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）水平,選擇最佳染塵時(shí)間。2NR8383細(xì)胞分為對(duì)照組（予等體積不含血清的F-12K培養(yǎng)基處理）、矽塵組（予終濃度為50 mg/L矽塵混懸液處理）和干預(yù)組（予終濃度分別為50 mg/L、20μmol/L的矽塵混懸液和PI3K抑制劑LY294002處理）,孵育后收集樣品。采用ELISA法檢測(cè)孵育后20 h時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞上清液中TNF-α和TGF-β1水平;采用蛋白免疫印跡方法測(cè)定孵育后20 h時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞中Akt和自噬標(biāo)記蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）的水平;采用激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）觀察孵育3、6、12和20 h時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞自噬免疫熒光表達(dá)... 

【文章來源】：中國職業(yè)醫(yī)學(xué). 2016,43(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 細(xì)胞、試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 離體細(xì)胞染塵模型最佳染塵處理時(shí)間點(diǎn)選擇
        1.2.3 細(xì)胞分組與處理
        1.2.4 ELISA法檢測(cè)LY294002干預(yù)后細(xì)胞上清液中TNF-α和TGF-β1水平
        1.2.5 免疫印跡法檢測(cè)LY294002干預(yù)后細(xì)胞中Akt和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表達(dá)
        1.2.6 LSCM觀察LY294002干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)自噬表達(dá)情況
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 NR8383細(xì)胞染矽塵處理最佳時(shí)間點(diǎn)選擇
    2.2 LY294002干預(yù)后各組NR8383細(xì)胞上清液中TNF-α和TGF-β1表達(dá)情況
    2.3 LY294002干預(yù)后各組NR8383細(xì)胞中Akt和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表達(dá)情況
    2.4 LY294002干預(yù)后NR8383細(xì)胞自噬表達(dá)情況
3 討論



本文編號(hào)：3633430