目的:明確DEHP體內(nèi)代謝產(chǎn)物MEHP暴露對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響;探討PGE2在MEHP所致大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制,為預(yù)防DEHP引起的雌性生殖毒性,保護(hù)女性生殖健康提供科學(xué)依據(jù)。方法:使用DMEM-F12培養(yǎng)基+10%胎牛血清原代培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞,采用免疫熒光法對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞進(jìn)行純度檢測(cè),CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率,根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置實(shí)驗(yàn)分組與MEHP染毒劑量為:空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組（0.25‰DMSO）、200μM MEHP染毒組、250μM MEHP染毒組、300μM MEHP染毒組和350μM MEHP染毒組。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;Western Blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白（BAX、BCL-2、Caspase 3、Caspase 7）、PGE2受體（PTGER 2和PTGER 4）和PGE2下游基因（Gαs、cAMP、HAS2、TNFAIP6）的蛋白表達(dá)水平;Real-time PCR法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因（BAX、BCL-2）、PGE2受體基因（PTGER 2和PTGER 4）和PGE2下游基因（Gαs、cAMP、HAS2、TNFAIP6）的mR... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 DEHP與MEHP概述
    1.2 DEHP及MEHP對(duì)卵泡發(fā)育的影響
    1.3 DEHP及MEHP對(duì)排卵的影響
    1.4 DEHP及MEHP對(duì)類(lèi)固醇激素分泌的影響
    1.5 DEHP及MEHP對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的影響
    1.6 PGE2在卵巢顆粒細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制
第2章 材料和方法
    2.1 主要儀器及試劑
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要儀器
    2.2 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞原代培養(yǎng)
        2.2.1 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞提取
        2.2.2 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞傳代培養(yǎng)及種板
        2.2.3 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞鑒定
    2.3 MEHP染毒劑量的確定與分組
    2.4 PGE2劑量的確定與分組
    2.5 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡檢測(cè)
    2.6 Western Blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)水平
        2.6.1 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中總蛋白的提取
        2.6.2 蛋白濃度的測(cè)定
        2.6.3 蛋白表達(dá)水平檢測(cè)
    2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)mRNA表達(dá)
        2.7.1 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞總mRNA提取
        2.7.2 逆轉(zhuǎn)錄
        2.7.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    2.8 ELISA法檢測(cè)PGE2激素水平
    2.9 數(shù)據(jù)處理與分析
第3章 結(jié)果
    3.1 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 原代培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞鑒定
    3.3 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞存活率的影響
    3.4 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響
    3.5 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中PGE2激素水平的影響
    3.6 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因BAX、BCL-2表達(dá)的影響
        3.6.1 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞BAX、BCL-2蛋白表達(dá)水平的影響
        3.6.2 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞BAX、BCL-2 mRNA表達(dá)水平的影響
    3.7 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Cle-Caspase 3、Cle-Caspase 7蛋白表達(dá)的影響
    3.8 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞PGE2受體表達(dá)的影響
        3.8.1 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞PGE2受體蛋白表達(dá)水平的影響
        3.8.2 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞PTGER 2和PTGER 4 mRNA表達(dá)水平的影響
    3.9 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中PGE2下游基因表達(dá)的影響
        3.9.1 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞PGE2下游蛋白表達(dá)水平的影響
        3.9.2 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞PGE2下游基因mRNA表達(dá)水平的影響
    3.10 外源性PGE2對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞存活率的影響
    3.11 PGE2在MEHP影響卵巢顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)中的作用
    3.12 PGE2在MEHP影響卵巢顆粒細(xì)胞PGE2受體基因mRNA表達(dá)中的作用
    3.13 PGE2在MEHP影響卵巢顆粒細(xì)胞PGE2下游基因mRNA表達(dá)中的作用
第4章 討論
    4.1 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞存活及凋亡的影響
    4.2 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的影響
    4.3 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞PGE2及前列腺素受體表達(dá)的影響
    4.4 MEHP對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞PGE2下游基因表達(dá)的影響
    4.5 PGE2在MEHP影響大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡基因表達(dá)中的作用
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3630524