發(fā)布時間：2021-12-21 23:21

　　目的:1.探討CHIP不同表達狀態(tài)在三氯化鋁致N2a細胞tau蛋白異常磷酸化位點中的調(diào)控機制。2.闡明CHIP不同結(jié)構(gòu)域在CHIP調(diào)控三氯化鋁致N2a細胞tau蛋白異常磷酸化中所發(fā)揮的具體機制。方法:1.選擇小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞（N2a）作為實驗材料,選取對數(shù)生長期的細胞進行1mmol/LAlCl₃染毒及CHIP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,實驗分為兩部分:一是觀察CHIP過表達對染鋁細胞tau蛋白的影響,實驗分組為:正常對照組,1mmol/L AlCl₃組,空質(zhì)粒組,CHIP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,CHIP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染+1mmol/L AlCl₃組;二是觀察CHIP干擾對染鋁細胞tau蛋白的影響:正常對照組,1mmol/LAlCl₃組,CHIP shRNA陰性對照組,CHIPshRNA組,CHIPshRNA+1mmol/L AlCl₃組;2.選擇細胞系同上,對細胞進行1mmol/L AlCl₃染毒及CHIP不同結(jié)構(gòu)域質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,實驗分為兩部分:一是觀察CHIP（ΔU-box）在CHIP調(diào)控鋁... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

2a細胞經(jīng)CHIP過表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染12h、24h、36h、48h后，CHIP基因相對表達量（圖

N2a 細胞經(jīng) CHIP 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染并 1mmol/L AlCl3染毒后，細胞中 UPP 通路關(guān)鍵分子蛋白表達情況。WT:0 表示正常對照組未染鋁，1mmol/L 表示染鋁組；NC:0 表示空質(zhì)粒對照組未染CHIP：0 表示 CHIP 過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，1mmol/L 表示 CHIP 過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染+染鋁組。統(tǒng)果均以內(nèi)參蛋白 GAPDH 標準化后表示。*：表示與對照組相比，P<0.05。#：與 1mmol/LAlCl3相比，P<0.05。4 N2a 細胞中 tau 蛋白及各磷酸化位點 tau 蛋白表達的變化Westernblot 結(jié)果顯示：與對照組相比，染鋁可引起 pThr231，pSer262，pSer表達結(jié)果顯著增高（P<0.05），tau-5 和 pThr181 蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義；C達可引起 pThr231，pSer262，pSer 396 蛋白表達均有顯著降低（P<0.05），tahr181 蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異�？召|(zhì)粒組中各蛋白表達與對照組相比均未出現(xiàn)化。經(jīng)析因分析顯示，在 N2a 細胞中 CHIP 過表達與 AlCl3染毒在 pThr23

16圖 3 N2a 細胞 CHIP 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，經(jīng) 1mmol/L AlCl3染毒后，細胞中 tau 蛋白及各磷酸化位點tau 蛋白表達的變化。WT:0 表示正常對照組未染鋁，1mmol/L 表示染鋁組；NC:0 表示空質(zhì)粒對照組未染鋁；CHIP：0 表示 CHIP 過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，1mmol/L 表示 CHIP 過表達 P<0.05。：與 1mmol/L AlCl3相比，P<0.05。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染+染鋁組。統(tǒng)計結(jié)果均以內(nèi)參蛋白 GAPDH 標準化后表示。*：表示與對照組相比，P<0.05。#：與 1mmol/L AlCl3相比，P<0.05。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]泛素—蛋白酶體途徑調(diào)控鋁致tau蛋白異常磷酸化的體外研究[D]. 崔雙杰.山西醫(yī)科大學(xué) 2018
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本文編號：3545365