目的:1.探討CHIP不同表達狀態(tài)在三氯化鋁致N2a細胞tau蛋白異常磷酸化位點中的調控機制。2.闡明CHIP不同結構域在CHIP調控三氯化鋁致N2a細胞tau蛋白異常磷酸化中所發(fā)揮的具體機制。方法:1.選擇小鼠神經母細胞瘤細胞（N2a）作為實驗材料,選取對數(shù)生長期的細胞進行1mmol/LAlCl₃染毒及CHIP質粒轉染,實驗分為兩部分:一是觀察CHIP過表達對染鋁細胞tau蛋白的影響,實驗分組為:正常對照組,1mmol/L AlCl₃組,空質粒組,CHIP質粒轉染組,CHIP質粒轉染+1mmol/L AlCl₃組;二是觀察CHIP干擾對染鋁細胞tau蛋白的影響:正常對照組,1mmol/LAlCl₃組,CHIP shRNA陰性對照組,CHIPshRNA組,CHIPshRNA+1mmol/L AlCl₃組;2.選擇細胞系同上,對細胞進行1mmol/L AlCl₃染毒及CHIP不同結構域質粒轉染,實驗分為兩部分:一是觀察CHIP（ΔU-box）在CHIP調控鋁... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

2a細胞經CHIP過表達質粒分別轉染12h、24h、36h、48h后，CHIP基因相對表達量（圖

N2a 細胞經 CHIP 質粒轉染并 1mmol/L AlCl3染毒后，細胞中 UPP 通路關鍵分子蛋白表達情況。WT:0 表示正常對照組未染鋁，1mmol/L 表示染鋁組；NC:0 表示空質粒對照組未染CHIP：0 表示 CHIP 過表達質粒轉染組，1mmol/L 表示 CHIP 過表達質粒轉染+染鋁組。統(tǒng)果均以內參蛋白 GAPDH 標準化后表示。*：表示與對照組相比，P<0.05。#：與 1mmol/LAlCl3相比，P<0.05。4 N2a 細胞中 tau 蛋白及各磷酸化位點 tau 蛋白表達的變化Westernblot 結果顯示：與對照組相比，染鋁可引起 pThr231，pSer262，pSer表達結果顯著增高（P<0.05），tau-5 和 pThr181 蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義；C達可引起 pThr231，pSer262，pSer 396 蛋白表達均有顯著降低（P<0.05），tahr181 蛋白表達無統(tǒng)計學差異�？召|粒組中各蛋白表達與對照組相比均未出現(xiàn)化。經析因分析顯示，在 N2a 細胞中 CHIP 過表達與 AlCl3染毒在 pThr23

16圖 3 N2a 細胞 CHIP 質粒轉染，經 1mmol/L AlCl3染毒后，細胞中 tau 蛋白及各磷酸化位點tau 蛋白表達的變化。WT:0 表示正常對照組未染鋁，1mmol/L 表示染鋁組；NC:0 表示空質粒對照組未染鋁；CHIP：0 表示 CHIP 過表達質粒轉染組，1mmol/L 表示 CHIP 過表達 P<0.05。：與 1mmol/L AlCl3相比，P<0.05。質粒轉染+染鋁組。統(tǒng)計結果均以內參蛋白 GAPDH 標準化后表示。*：表示與對照組相比，P<0.05。#：與 1mmol/L AlCl3相比，P<0.05。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Tau蛋白及其異常磷酸化在肌萎縮側索硬化癥中的研究進展[J]. 吳虹辰,胡俊.  局解手術學雜志. 2019(02)
[2]鋁神經毒性作用機制研究進展[J]. 夏佳蕊,劉佳琪,李宗高,洪帆,喬喬,劉芳華,趙鑫榮,張立豐.  中國老年學雜志. 2018(13)
[3]CHIP和Hsp70在三氯化鋁致N2a細胞tau蛋白異常磷酸化中的作用[J]. 崔雙杰,巨曉芬,潘寶龍,張玲,路小婷.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學. 2018(04)
[4]泛素——蛋白酶體通路與疾病發(fā)生的研究進展[J]. 唐珍,羅蓉.  蘭州大學學報(醫(yī)學版). 2014(03)
[5]慢性鋁暴露對小鼠學習記憶及tau蛋白磷酸化的影響[J]. 賈志建,路小婷,潘寶龍,王昊,劉瑩,牛僑.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學. 2012(04)
[6]Aβ25～35和人參皂苷Rb1對鼠神經干細胞分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A表達的影響[J]. 趙慶霞,鄢文海,韓雪飛,許燕,邢瑩.  中國應用生理學雜志. 2010(02)
[7]阿爾茨海默病中tau蛋白和鋁的變化及二者的關系[J]. 趙長安,魏健,王建偉.  新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報. 2003(03)
[8]神經退行性疾病神經細胞死亡機理[J]. 王建枝,劉世杰.  國外醫(yī)學(分子生物學分冊). 2003(01)

碩士論文
[1]泛素—蛋白酶體途徑調控鋁致tau蛋白異常磷酸化的體外研究[D]. 崔雙杰.山西醫(yī)科大學 2018
[2]職業(yè)鋁接觸對作業(yè)工人tau蛋白磷酸化的影響及作用[D]. 李瑞.山西醫(yī)科大學 2016



本文編號：3545365