發(fā)布時(shí)間：2017-05-09 23:10

  本文關(guān)鍵詞：基于適配體-熒光共振能量轉(zhuǎn)移的微生物檢測(cè)方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近幾十年來(lái),食品安全問(wèn)題在世界范圍內(nèi)頻頻發(fā)生,如“德國(guó)毒黃瓜事件”、“美國(guó)單核細(xì)胞李斯特菌事件”等等,微生物污染造成的食品安全問(wèn)題越來(lái)越來(lái)受到人們的關(guān)注�；谑称钒踩珕�(wèn)題的嚴(yán)峻性和危害性,解決這一問(wèn)題迫在眉睫。因此,需要快速、準(zhǔn)確、高效的微生物檢測(cè)技術(shù),以便快速檢測(cè)出食品中的致病微生物,從而有效地控制食源性疾病。光學(xué)檢測(cè)方法作為一種通用的檢測(cè)方法,它的儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便,具有極高的靈敏度。熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是一種光學(xué)現(xiàn)象,它描述了兩個(gè)熒光分子之間的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。當(dāng)供體熒光分子的發(fā)射光譜與受體熒光分子的吸收光譜重疊,并且兩個(gè)分子的距離在10nm范圍內(nèi)時(shí),就會(huì)發(fā)生一種非放射性的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象,即FRET。目前,FRET已經(jīng)在生物科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域中得到應(yīng)用,例如研究蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象以及結(jié)構(gòu)布局、免疫測(cè)定、細(xì)胞內(nèi)離子濃度及動(dòng)力學(xué)特征描述、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等。而基于FRET的光學(xué)傳感器近年來(lái)已經(jīng)成為一個(gè)非常活躍的研究領(lǐng)域。但是利用石墨烯和適配體的FRET檢測(cè)微生物的報(bào)道非常有限。本課題基于FRET效應(yīng),分別采用單適配體與多適配體構(gòu)建了FRET傳感器,對(duì)微生物的光學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行了研究。論文的研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)部分:(1)采用熒光基團(tuán)標(biāo)記的核酸適配體作為熒光供體分子,氧化石墨烯(GO)作為熒光受體分子,并且通過(guò)對(duì)核酸適配體濃度、GO濃度的優(yōu)化,確定了三種常見(jiàn)的食源性致病菌大腸桿菌,坂琪桿菌,副溶血桿菌的相關(guān)檢測(cè)條件。(2)通過(guò)使用與微生物有專(zhuān)一性結(jié)合特性的核酸適配體,利用FRET效應(yīng),通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化,對(duì)大腸桿菌O157:H7、副溶血性弧菌和阪崎腸桿菌三種微生物進(jìn)行了檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中分別使用了單適配體和多適配體對(duì)微生物進(jìn)行檢測(cè),比較了單適配體和多適配體的檢測(cè)效果。結(jié)果表明,多適配體的檢測(cè)靈敏度優(yōu)于單適配體。
【關(guān)鍵詞】：熒光共振能量轉(zhuǎn)移 核酸適配體 大腸桿菌 O157:H7 副溶血性弧菌 阪崎腸桿菌 微生物光學(xué)檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R155.5
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-25
• 1.1 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)11
• 1.2 氧化石墨烯簡(jiǎn)要介紹11-12
• 1.3 基于氧化石墨烯的熒光共振能量轉(zhuǎn)移光學(xué)傳感器12-18
• 1.3.1 以GO作為淬滅劑12-13
• 1.3.2 以GO作為能量供體13
• 1.3.3 基于GO的FRET光學(xué)傳感器的應(yīng)用13-18
• 1.4 核酸適配體簡(jiǎn)介18-20
• 1.4.1 核酸適配體的性質(zhì)18
• 1.4.2 核酸適配體的篩選方法18-19
• 1.4.3 單適配體和多適配體的比較19-20
• 1.5 微生物常用檢測(cè)方法20-23
• 1.5.1 微生物檢測(cè)法20
• 1.5.2 儀器分析法20-21
• 1.5.3 免疫學(xué)方法21
• 1.5.4 分子生物學(xué)方法21-22
• 1.5.5 基因芯片技術(shù)22-23
• 1.6 本論文的主要研究?jī)?nèi)容及意義23-25
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分25-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑25-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器25-26
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑26-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 2.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)基配制28
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑配制28-29
• 2.3 基于GO的FRET光學(xué)傳感器檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的方法建立29-32
• 2.3.1 大腸桿菌O157：H7的培養(yǎng)及菌密度測(cè)定29
• 2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢驗(yàn)大腸桿菌O157:H7與其適配體親和性29-30
• 2.3.3 GO與大腸桿菌適配體的比例條件優(yōu)化30-31
• 2.3.4 基于GO的FRET熒光傳感器檢測(cè)大腸桿菌O157:H731-32
• 2.4 基于GO的FRET光學(xué)傳感器檢測(cè)副溶血性弧菌的方法建立32-34
• 2.4.1 副溶血性弧菌的培養(yǎng)及菌密度測(cè)定32
• 2.4.2 GO與副溶血性弧菌適配體的混合比例條件優(yōu)化32-33
• 2.4.3 基于GO的FRET光學(xué)傳感器檢測(cè)副溶血性弧菌33-34
• 2.5 基于GO的FRET光學(xué)傳感器檢測(cè)阪崎腸桿菌的方法建立34-37
• 2.5.1 阪崎腸桿菌的培養(yǎng)及菌密度測(cè)定34
• 2.5.2 GO與阪崎腸桿菌適配體的最適比例探究34-35
• 2.5.3 基于GO的FRET光學(xué)傳感器檢測(cè)阪崎腸桿菌35-37
• 第三章 結(jié)果與討論37-50
• 3.1 基于GO的FRET光學(xué)傳感器對(duì)大腸桿菌O157:H7的檢測(cè)37-43
• 3.1.1 大腸桿菌O157:H7的生長(zhǎng)曲線測(cè)定37-38
• 3.1.2 大腸桿菌O157:H7適配體與菌種的親和性測(cè)定38
• 3.1.3 GO淬滅濃度的優(yōu)化38-39
• 3.1.4 大腸桿菌O157:H7適配體濃度的優(yōu)化39-40
• 3.1.5 基于GO的FRET光學(xué)傳感器檢測(cè)大腸桿菌O157:H740-41
• 3.1.6 基于GO的FRET光學(xué)傳感器檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的靈敏度41-42
• 3.1.7 單適配體與多適配體傳感器檢測(cè)大腸桿菌O157:H742-43
• 3.2 基于GO的FRET光學(xué)傳感器對(duì)副溶血性弧菌的檢測(cè)43-46
• 3.2.1 副溶血性弧菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定43-44
• 3.2.2 GO與副溶血性弧菌適配體之間的比例優(yōu)化44-45
• 3.2.3 單適配體與多適配體傳感器檢測(cè)副溶血性弧菌45-46
• 3.3 基于GO的FRET光學(xué)傳感器對(duì)阪崎腸桿菌的檢測(cè)46-50
• 3.3.1 阪崎腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定及其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的確定46-47
• 3.3.2 GO與阪崎腸桿菌適配體之間的比例優(yōu)化47-48
• 3.3.3 單適配體與多適配體傳感器檢測(cè)阪崎腸桿菌48-50
• 結(jié)論與展望50-51
• 致謝51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁紅茹;楊松濤;張濤;胡桂秋;夏咸柱;;核酸適配體及其在病原微生物學(xué)中的應(yīng)用[J];生物工程學(xué)報(bào);2011年05期

2 姚遠(yuǎn);張波;;核酸適配體及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2014年08期

3 甘龍杰;蘭小鵬;;適配體芯片技術(shù)及其應(yīng)用[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2009年06期

4 蘭小鵬;;適配體技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究中的作用[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2012年10期

5 李曉佩;楊良嶸;黃昆;李文松;孫西同;劉會(huì)洲;;核酸適配體在生化分離及檢測(cè)領(lǐng)域中的研究進(jìn)展[J];化工學(xué)報(bào);2013年01期

6 劉婷先;張娜;;適配體在腫瘤治療方面的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2013年05期

7 唐德平;張宇潔;毛愛(ài)紅;;適配體在體外細(xì)胞檢測(cè)中的應(yīng)用[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年13期

8 李紅玉;閻輝;;適配體與病毒性感染診斷及治療[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2013年05期

9 滿燕;呂雪飛;彭廣;宋達(dá);慶宏;;雙適配體夾心微陣列芯片在凝血酶檢測(cè)中的應(yīng)用[J];生命科學(xué)儀器;2014年Z1期

10 胡燕;楊先達(dá);;核酸適配體在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡圣;劉彩云;盧建忠;;基于核酸適配體和酶循環(huán)放大的腺苷化學(xué)發(fā)光檢測(cè)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)發(fā)光分析學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

2 陳巍;趙新穎;屈鋒;;毛細(xì)管電泳法篩選蛋白質(zhì)的核酸適配體的初步研究[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

3 楊曉娟;邴濤;梅宏成;上官棣華;;核酸適配體用于手性拆分L型和D型色氨酸[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

4 鄭冬梅;婁新徽;;一種基于結(jié)構(gòu)開(kāi)關(guān)型適配體的無(wú)標(biāo)記熒光傳感法[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第9分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

5 薛利云;周小明;邢達(dá);;基于核酸適配體探針和酶輔助熒光信號(hào)擴(kuò)增的等溫高靈敏度蛋白檢測(cè)方法[A];中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2011年

6 馬文韜;古力;屈鋒;;毛細(xì)管電泳篩選大腸桿菌適配體的初步研究[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

7 梁好均;徐華國(guó);鄧偉;;核酸適配體鏈構(gòu)象轉(zhuǎn)變的研究[A];2014年兩岸三地高分子液晶態(tài)與超分子有序結(jié)構(gòu)學(xué)術(shù)研討會(huì)摘要集[C];2014年

8 王曉芳;程琳;耿霞;趙強(qiáng);;基于適配體修飾的磁珠和量子點(diǎn)熒光法檢測(cè)凝血酶[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第9分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

9 汪海林;章大鵬;;單核苷水平核酸適配體與蛋白質(zhì)相互作用分析[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第9分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

10 溫桂清;范燕燕;梁愛(ài)惠;蔣治良;;核酸適配體納米金共振散射光譜檢測(cè)血清中鉀離子[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十五屆全國(guó)有機(jī)分析及生物分析學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 潘文;核酸適配體在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

2 于洋　田野;蛋白質(zhì)檢測(cè)有了新方法[N];吉林日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃玉坤;基于核酸適配體識(shí)別-時(shí)間分辨熒光納米探針的生物毒素檢測(cè)方法研究[D];江南大學(xué);2015年

2 陳霞;功能核酸的篩選及在分析檢測(cè)中的應(yīng)用[D];武漢大學(xué);2012年

3 林雪霞;微流控芯片與可控適配體技術(shù)用于細(xì)胞代謝物分析及其相互作用的研究[D];北京化工大學(xué);2015年

4 周慶同;生物相空間中的適配體和藥物虛擬篩選[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

5 郭業(yè)民;基于適配體傳感器的牛奶中抗生素殘留快速檢測(cè)技術(shù)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 李菁菁;適配體功能化的熒光納米探針用于蛋白和細(xì)胞傳感研究[D];南京大學(xué);2012年

7 于鴿;乙丙肝病毒相互干擾及適配體在肝癌診斷及靶向治療中的作用[D];吉林大學(xué);2016年

8 王成全;基于磁控適配體傳感體系的農(nóng)產(chǎn)品中典型霉菌毒素檢測(cè)研究[D];江蘇大學(xué);2016年

9 嚴(yán)喜鸞;基于核酸適配體化學(xué)發(fā)光檢測(cè)新技術(shù)的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

10 胡獻(xiàn)剛;新興適配體在高效凈化/診斷環(huán)境與生物體內(nèi)污染物的特點(diǎn)及其機(jī)理[D];南開(kāi)大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張?jiān)聜b;蛋白質(zhì)寡核苷酸適配體的篩選與應(yīng)用研究[D];山東師范大學(xué);2009年

2 李慧玲;BHL DNA適配體對(duì)銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)抑制作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉金釧;適配體納米金比色法靈敏度影響因素研究及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 于連元;核酸適配體修飾的納米顆粒在腫瘤靶向免疫治療及靶向熱療中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

5 趙變軍;基于適配體特異性作用的乳腺癌細(xì)胞表面多種腫瘤標(biāo)記物同時(shí)檢測(cè)的新方法研究[D];南京師范大學(xué);2015年

6 喬醴峰;基于核酸適配體的β-葡萄糖醛酸苷酶一步純化固定化研究及其應(yīng)用[D];石河子大學(xué);2015年

7 呂莉;基于適配體的酶聯(lián)吸光度法檢測(cè)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB[D];山西大學(xué);2015年

8 陳艷霞;核酸適配體/小檗堿熒光體系的構(gòu)筑及分析應(yīng)用[D];山西大學(xué);2015年

9 呂琴;基于熒光標(biāo)記適配體的熒光各向異性法檢測(cè)小分子[D];山西大學(xué);2015年

10 朱志玲;基于核酸適配體的赭曲霉毒素A SPR檢測(cè)技術(shù)研究[D];北京化工大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：基于適配體-熒光共振能量轉(zhuǎn)移的微生物檢測(cè)方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：353504