目的:探討長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA,lnc RNA）H19與S-腺苷高半胱氨酸水解酶（S-adenosylhomocysteine hydrolase,SAHH）相互作用調(diào)控8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶1（8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1）甲基化水平在苯并[a]芘（Benzo[a]pyrene,Ba P）致人肺源性細胞（16HBE、BEAS-2B、VA13）DNA氧化損傷過程中的作用,以期為揭示Ba P暴露致DNA損傷的表觀遺傳調(diào)控機制提供相應線索。方法:通過si RNA技術降低人肺源性細胞中H19及SAHH的表達水平,構(gòu)建H19低表達、SAHH低表達和H19及SAHH雙低表達細胞模型,同時設置轉(zhuǎn)染陰性序列對照組;通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術（載體p CMV-GV141）過表達人肺源性細胞中SAHH的表達水平,構(gòu)建SAHH過表達細胞模型（wild type（WT）-SAHH、M1-SAHH,M2-SAHH,M3-SAHH）,同時設置轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對照組。用不同濃度Ba P（0、1、2、4、8、16、32μmol/L）染毒24h,以16... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

腺苷標準曲線

圖 2 OGG1 甲基化檢測位點及序列將 110mL 70%乙醇、110mL 1×Wash Buffer、90mL Denaturation Buffer、10純水倒入相應的 5 個清洗槽；打開并設置 80℃金屬浴，將 Plate Holder 放；輕柔混勻 Sepharose Beads，配置 Sepharose Beads 和 Binding Buffer 的 M孔反應尖底板 80μL 體系（常溫 1400rpm 水平振蕩混勻 20min）：Sephads 3μL，DNA 擴增樣品 15μL，Binding Buffer 40μL，Water 20μL。96 孔底板 40μL 體系：annealing Buffer 38.4μL，10μM 測序引物 1.6μL。PyroM6 軟件設置好運行程序，按照程序要求在試劑艙加入相應試劑，并把試劑PyroMark Q96 中；打開 vacuum prep workstation 的泵，將 vacuum prep to純水中清洗 3 次（最后一次抽干）；vacuum prep tool 移到 96 孔反應尖底Sepharose Beads，然后依次放入 70%乙醇 5s、Denaturation Buffer 5s、1×Wffer 10s（注意需待液體順暢通過后進行計時）；取出并豎直 vacuum prep

板中染毒結(jié)束后，D-hanks 平衡鹽溶液清至 1.5mL 離心管中，使用 8-OHdG樣，重復 3 次。DNA 20min，使用 1M Tris 將 pH 值調(diào)整為磷酸酶，37°C 孵育 30min；沸水煮 10min，按照表 3 配制標準曲線 8 個梯度樣品（倍為標準曲線稀釋標品 H 的 OD 值，根據(jù)標型標準曲線（見圖 3）。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3502085