目的探討ERCC2/XPD基因多態(tài)與短波紫外線（UVC）所致細(xì)胞DNA損傷與修復(fù)的關(guān)聯(lián)。方法構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)ERCC2/XPD rs13181 AA（Lys751）和ERCC2/XPD rs13181 CC（Gln751）2種基因型的質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞缺陷型UV5,獲得穩(wěn)定表達(dá)ERCC2轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。應(yīng)用MTT法比較2種不同基因型轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)不同照射強(qiáng)度UVC處理后細(xì)胞抑制率的差別;應(yīng)用改良彗星試驗(yàn)檢測各轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)UVC處理后1、3、6、24 h DNA損傷修復(fù)能力的差異。結(jié)果與UV5ERCC2（AA）相比,突變型細(xì)胞UV5^{ERCC2（CC）}對UVC所致DNA損傷更加敏感,細(xì)胞存活率降低（P<0.05）。改良彗星試驗(yàn)結(jié)果顯示,UV5^{ERCC2（CC）}細(xì)胞DNA損傷程度較UV5ERCC2（AA）嚴(yán)重,且修復(fù)UVC所致DNA損傷的能力降低,在20 J/m2UVC處理3、6 h時點(diǎn)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ERCC2/XPD rs13181多態(tài)C等位基因與UVC所致DNA損傷修復(fù)能力下降相關(guān),提示ERCC2/XPD rs... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016,45(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞:
        1.1.2 主要試劑:
        1.1.3主要儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理:
        1.2.2 ERCC2/XPD 751位點(diǎn)不同基因型轉(zhuǎn)染細(xì)胞的建立:
        1.2.3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的鑒定:
            1.2.3. 1 鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率
            1.2.3. 2 Western blotting檢測ERCC2/XPD蛋白表達(dá)
            1.2.3. 3 Taq Man#real-time PCR法檢測ERCC2/位點(diǎn)
        1.2.4 DNA損傷修復(fù)能力的檢測:
            1.2.4. 1 細(xì)胞抑制率試驗(yàn)
            1.2.4. 2 改良彗星試驗(yàn)
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 ERCC2/XPD在各轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中的表達(dá)(圖1)
    2.2 Western blotting驗(yàn)證ERCC2/XPD在各細(xì)胞中的表達(dá)
    2.3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞ERCC2/XPD rs13181基因型的確定
    2.4 UVC對UV5ERCC2(AA)和UV5ERCC2(CC)細(xì)胞存活率的影響
    2.5 UVC所致UV5ERCC2(AA)和UV5ERCC2(CC)細(xì)胞的DNA損傷與修復(fù)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]核苷酸切除修復(fù)基因多態(tài)性與肺癌發(fā)生風(fēng)險的研究進(jìn)展[J]. 金珊珊,陳小嵐,劉惠,王興友.  醫(yī)學(xué)綜述. 2016(11)
[2]紫外線對皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞DNA的損傷效應(yīng)以及白藜蘆醇的保護(hù)作用[J]. 劉紅霞,周良,丁振華.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2015(23)
[3]ERCC2/XPD基因缺失對短波紫外線所致CHO細(xì)胞DNA損傷修復(fù)的影響[J]. 關(guān)陽陽,肖莎,李丹丹,薛萍,張國培,劉秋芳,靳翠紅,楊敬華,巫生文,逯曉波.  衛(wèi)生研究. 2014(01)



本文編號：3498090