本文關(guān)鍵詞：酶法制備乳清蛋白肽及其對衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乳清是工業(yè)生產(chǎn)干酪及干酪素的副產(chǎn)品,其主要成分為乳清蛋白。利用酶解技術(shù)水解乳清蛋白可得到的低分子量的乳清蛋白肽,這些肽段具有多種生理功能,對于疾病預(yù)防和天然保健品的開發(fā)和利用具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)利用酶法制備乳清蛋白肽,并對其進(jìn)行分離純化鑒定,篩選出抗氧化活性最高的組分進(jìn)行動物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)生理生化指標(biāo)測定,探究乳清蛋白抗氧化肽對衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。 本實(shí)驗(yàn)以濃縮乳清蛋白(WPC80)為原料,選擇堿性蛋白酶為實(shí)驗(yàn)酶,以水解度和DPPH自由基清除率為指標(biāo),對水解條件進(jìn)行優(yōu)化,考察各種因素對水解效果的影響,得到最佳的水解工藝為：加酶量5000U/g, pH8.5,溫度60℃,底物濃度5%,水解時(shí)間2h,在此條件下水解,水解度為19.32%,水解物的DPPH自由基清除率為53.57%。 采用DA201-C大孔樹脂對乳清蛋白肽進(jìn)行脫鹽處理,以達(dá)到初步分離純化的目的。首先考察解吸劑、上樣流速和上樣濃度對脫鹽效果的影響,結(jié)果表明,70%乙醇為解吸劑,最佳上樣流速為1.5mL/min,最佳上樣濃度為30mg/mL,在此條件下進(jìn)行動態(tài)脫鹽效果最好,脫鹽后,脫鹽率為96.81%,回收率為90.37%,且DPPH自由基清除率明顯增大,抗氧化活性增強(qiáng)。 利用截留分子量不同的超濾膜將乳清蛋白肽分離成三個組分,Tricine-SDS-PAGE電泳鑒定各個組分乳清蛋白肽的分子量,結(jié)果發(fā)現(xiàn),超濾分離效果良好,且分子量小于3KDa的多肽抗氧化活性最強(qiáng)。 利用行為學(xué)方法研究乳清蛋白肽對衰老小鼠被動回避和空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響。以自然衰老小鼠為衰老模型,青年小鼠為空白對照,腦復(fù)康為陽性對照,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用乳清蛋白肽灌胃之后,衰老小鼠的跳臺潛伏期增加,跳臺錯誤次數(shù)減少,在避暗箱中的電擊時(shí)間和電擊次數(shù)減少,在水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中的逃避潛伏期、游泳路程、游泳速度和朝向角減小,空間探索實(shí)驗(yàn)中的目標(biāo)象限停留時(shí)間、目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比、目標(biāo)象限停留路程百分比、經(jīng)過平臺次數(shù)增加,初次穿越平臺的時(shí)間減小,同時(shí)游泳軌跡也向趨向型和直線型發(fā)展�？梢娙榍宓鞍纂哪軌蛟鰪�(qiáng)衰老小鼠的行為學(xué)能力。 在體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)中,以血清、肝臟和腦中SOD、MDA、GSH-Px、蛋白質(zhì)羰基和AChE為指標(biāo),考察乳清蛋白抗氧化肽對衰老小鼠的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,乳清蛋白肽灌胃之后,衰老小鼠的SOD和GSH-Px活性明顯增加,MDA和蛋白質(zhì)羰基含量明顯降低,高劑量組與腦復(fù)康對照組結(jié)果相近；同時(shí)AChE的活性也有所降低。由此可見,乳清蛋白肽能夠延緩機(jī)體衰老,調(diào)節(jié)中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的活動,從而改善衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
【關(guān)鍵詞】：乳清蛋白肽 酶解 分離鑒定 抗衰老 學(xué)習(xí)記憶能力
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：TS252.9;R151
【目錄】：

• 摘要10-11
• Abstract11-13
• 1 前言13-22
• 1.1 乳清蛋白概述13
• 1.2 乳源生物活性肽的研究13-17
• 1.2.1 乳清蛋白生物活性肽的序列及功能13-15
• 1.2.2 乳清蛋白肽的制備方法15
• 1.2.3 乳清蛋白肽的分離純化方法15-16
• 1.2.4 乳清蛋白源抗氧化肽的發(fā)展16
• 1.2.5 抗氧化活性的評價(jià)方法16-17
• 1.3 衰老與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系17-20
• 1.3.1 衰老對學(xué)習(xí)記憶能力的影響17-18
• 1.3.2 衰老模型的選擇18
• 1.3.3 學(xué)習(xí)記憶能力的行為學(xué)評價(jià)方法18-19
• 1.3.4 通過抗氧化改善學(xué)習(xí)記憶力的天然活性物質(zhì)19-20
• 1.4 課題研究目的意義及主要研究內(nèi)容20-22
• 1.4.1 課題的研究目的意義20-21
• 1.4.2 課題的研究內(nèi)容21-22
• 2 材料與方法22-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)原料22
• 2.1.2 主要試劑22-23
• 2.2 主要儀器23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-36
• 2.3.1 原料成分的含量測定23-24
• 2.3.2 蛋白酶的篩選24
• 2.3.3 水解度(DH)的測定24-25
• 2.3.4 乳清蛋白水解物DPPH自由基清除能力的測定25
• 2.3.5 乳清蛋白的酶解工藝流程25
• 2.3.6 乳清蛋白的酶解工藝條件優(yōu)化25-26
• 2.3.7 乳清蛋白肽的脫鹽26-27
• 2.3.8 超濾法分離乳清蛋白肽27
• 2.3.9 Tricine-SDS-PAGE凝膠電泳27-28
• 2.3.10 動物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)研究28-29
• 2.3.11 乳清蛋白肽體內(nèi)作用實(shí)驗(yàn)29-35
• 2.3.12 統(tǒng)計(jì)分析35-36
• 3 結(jié)果與分析36-54
• 3.1 原料主要成分含量的測定36
• 3.2 水解酶的篩選36-37
• 3.2.1 蛋白酶活力的測定36-37
• 3.2.2 不同酶水解效果的比較37
• 3.3 水解度測定中標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定37-38
• 3.4 乳清蛋白的酶解工藝條件優(yōu)化38-41
• 3.4.1 加酶量和pH對乳清蛋白水解度的影響38
• 3.4.2 加酶量和pH對乳清蛋白酶解物DPPH自由基清除能力影響38-39
• 3.4.3 底物濃度和溫度對乳清蛋白水解度的影響39
• 3.4.4 底物濃度和溫度對乳清蛋白酶解物DPPH自由基清除能力的39-40
• 3.4.5 水解時(shí)間對水解度和DPPH自由基清除率的影響40-41
• 3.5 乳清蛋白肽的脫鹽效果41-44
• 3.5.1 DA201-C大孔樹脂對乳清蛋白肽的靜態(tài)吸附及解吸41-42
• 3.5.2 最佳上樣流速和上樣濃度的選擇42
• 3.5.3 DA201-C大孔樹脂對乳清蛋白肽動態(tài)吸附及解吸42-43
• 3.5.4 DA201-C大孔樹脂對乳清蛋白肽的脫鹽效果分析43-44
• 3.6 超濾法分離抗氧化肽44
• 3.7 Tricine-SDS-PAGE凝膠電泳44-45
• 3.8 乳清蛋白肽對動物行為學(xué)能力的影響45-49
• 3.8.1 跳臺實(shí)驗(yàn)測試結(jié)果45
• 3.8.2 避暗實(shí)驗(yàn)測試結(jié)果45-46
• 3.8.3 水迷宮實(shí)驗(yàn)測試結(jié)果46-49
• 3.9 乳清蛋白肽對衰老小鼠體內(nèi)SOD、MDA、GSH-Px、蛋白質(zhì)羰基和AChE影響49-54
• 3.9.1 乳清蛋白肽對小鼠臟體比的影響49
• 3.9.2 乳清蛋白肽對小鼠血清、肝臟和腦內(nèi)SOD活性的影響49-50
• 3.9.3 乳清蛋白肽對小鼠血清、肝臟和腦內(nèi)MDA含量的影響50-51
• 3.9.4 乳清蛋白肽對小鼠血清、肝臟和腦內(nèi)GSH-PX活性的影響51-52
• 3.9.5 乳清蛋白肽對小鼠血清、肝臟和腦內(nèi)蛋白羰基含量的影響52
• 3.9.6 乳清蛋白肽對小鼠腦內(nèi)AChE的影響52-54
• 4 討論54-57
• 4.1 DA201-C大孔樹脂對乳清蛋白肽脫鹽的影響54
• 4.2 Tricine-SDS-PAGE電泳對小分子肽分離鑒定的影響54-55
• 4.3 乳清蛋白肽對小鼠行為學(xué)能力的影響55
• 4.4 乳清蛋白肽對小鼠體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的影響55-56
• 4.5 乳清蛋白肽對小鼠膽堿能系統(tǒng)的影響56-57
• 5 結(jié)論57-58
• 致謝58-59
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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2 王磊;成雪;毛學(xué)英;;乳清蛋白及其活性多肽的生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J];中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào);2010年05期

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  本文關(guān)鍵詞：酶法制備乳清蛋白肽及其對衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：344649