發(fā)布時間：2021-09-03 22:48

　　鎘是一種有毒的重金屬元素,對人類健康具有嚴(yán)重的損害作用。鎘暴露與人類精子質(zhì)量下降及男性不育有關(guān)。鎘能引起睪丸生殖細(xì)胞凋亡、干擾睪酮合成與分泌可能是鎘雄性生殖毒性的主要原因。課題組前期體內(nèi)外研究均發(fā)現(xiàn),鎘能抑制小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮的合成和分泌,然而目前對鎘抑制其睪酮合成和分泌的分子機(jī)制尚不清楚。本課題主要以小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞TM3細(xì)胞為研究對象,探討氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在鎘抑制TM3細(xì)胞睪酮合成中的分子機(jī)制。目的分別采用抗氧化劑NAC和小分子化學(xué)伴侶4-PBA抑制鎘誘導(dǎo)TM3細(xì)胞發(fā)生的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,研究氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在鎘抑制TM3細(xì)胞睪酮合成中的作用。方法（1）為闡明氧化應(yīng)激對鎘抑制TM3細(xì)胞睪酮合成的影響,將TM3細(xì)胞分為陰性對照組、NAC組、CdCl₂組、NAC+CdCl₂組四種處理方式。提取各處理組上清液,用ELISA法測定各組睪酮的水平;提取各組細(xì)胞的mRNA和蛋白,RT-PCR法和western blot法檢測睪酮合成關(guān)鍵酶的表達(dá)情況及氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化。（2）為闡明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對鎘抑制TM3細(xì)胞睪酮合成的影響,將TM3細(xì)胞... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在CdCl2抑制TM3細(xì)胞睪酮合成中的作用技術(shù)路線圖

圖2. NAC抑制鎘誘導(dǎo)的睪丸生殖細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激技術(shù)路線圖 2. Roadmap for Cadmium -inhibited testicular germ cell endoplasmic reticulum stress by 細(xì)胞培養(yǎng)與處理(1) 細(xì)胞培養(yǎng)：新購買的TM3細(xì)胞放在37℃、5% CO2無菌培養(yǎng)箱中穩(wěn)定。待TM3細(xì)胞生長狀態(tài)良好并長至培養(yǎng)瓶底面積的80%-90%時，按照細(xì)明書進(jìn)行細(xì)胞傳代。傳代的具體步驟為：倒去培養(yǎng)瓶內(nèi)的舊培養(yǎng)基，使用移液管吸取4ml 磷酸鹽緩沖液即DPBS溶液（將200mg氯化鉀、1150mg磷、200mg磷酸二氫鉀、8000mg氯化鈉溶于с蒸水中并定容至1L后進(jìn)行高菌處理）清洗細(xì)胞瓶內(nèi)貼壁生長處2次，之后使用0.25%胰酶消化液消化左右（細(xì)胞間出現(xiàn)微小間隙并有小部分細(xì)胞松動），吸取6mL培養(yǎng)基將吹打н來，使用無菌移液管多次輕輕吹打多次以使細(xì)胞分散開來，將吹的細(xì)胞懸液分成с份用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或吸棄剩余的4ml，更換新的無菌移液

激在 CdCl2抑制 TM3 細(xì)胞睪酮合成中的作用鎘誘導(dǎo)的 TM3 細(xì)胞增殖毒性的影響究鎘誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對 TM3 細(xì)胞睪酮分泌的影響，先探討氧化殖的影響。結(jié)果顯示：CdCl2組細(xì)胞活力明顯低于陰性對照組，義(圖 3) (p < 0.01)，提示 20μM CdCl2處理明顯抑制 TM3 細(xì)胞活力у陰性對照組相比沒有明顯差異。然而同樣條件н，у 預(yù)處理后卻能夠明顯提高細(xì)胞的存活率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義示 NAC 對 CdCl2誘導(dǎo)的 TM3 細(xì)胞增殖毒性有保護(hù)作用；


本文編號：3382018