研究目的:金黃色葡萄球菌是一種常見(jiàn)的食源性致病菌,其本身殺傷性不大,但在食品中大量繁殖之后可產(chǎn)生金黃色葡萄球菌腸毒素。金黃色葡萄球菌腸毒素對(duì)腸道破壞性大,常引起金黃色葡萄球菌腸炎,該病起病急,中毒癥狀嚴(yán)重,臨床癥狀主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹痛、腹瀉和休克等,嚴(yán)重可導(dǎo)致循環(huán)衰竭。目前,針對(duì)金黃色葡萄菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法,主要有傳統(tǒng)分離培養(yǎng)生化鑒定法、免疫學(xué)檢測(cè)方法和分子生物學(xué)檢測(cè)方法。但這些方法存在著操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、靈敏性低、特異性差、對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和操作人員要求較高等缺點(diǎn)。因此,建立一種操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏且準(zhǔn)確的金黃色葡萄球菌的檢測(cè)方法對(duì)預(yù)防和控制由金黃色葡萄球菌引發(fā)的食品安全問(wèn)題十分必要。本課題旨在通過(guò)卵黃抗體技術(shù)、免疫磁分離技術(shù)、TMB（3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺）-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）-H₂O₂（過(guò)氧化氫）顯色體系,建立一種金黃色葡萄球菌快速可視化檢測(cè)方法,并對(duì)所建立的檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)價(jià),為食品安全監(jiān)督防控提供一定的技術(shù)支撐。研究方法:1.金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體的制備與鑒定以金黃色葡萄球菌滅活菌液作為抗原,與弗氏完全佐劑/弗氏不完... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 金黃色葡萄球菌概述
        1.1.1 金黃色葡萄球菌微生物學(xué)特性
        1.1.2 金黃色葡萄球菌流行病學(xué)特性
        1.1.3 金黃色葡萄球菌的致病性及致病機(jī)理
    1.2 金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法現(xiàn)狀
        1.2.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)法
        1.2.2 免疫學(xué)方法
        1.2.3 分子生物學(xué)方法
    1.3 免疫磁分離技術(shù)
    1.4 卵黃抗體技術(shù)
    1.5 本實(shí)驗(yàn)的研究目的、意義和創(chuàng)新點(diǎn)
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 相關(guān)試劑與耗材
        2.1.2 相關(guān)試劑的配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)菌株
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體的制備與鑒定
        2.2.2 免疫磁珠的制備與表征
        2.2.3 金黃色葡萄球菌可視化檢測(cè)方法的建立
        2.2.4 金黃色葡萄球菌可視化檢測(cè)方法效果評(píng)價(jià)
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 金黃色葡萄球菌雞卵黃抗體的制備與鑒定
        3.1.1 雞卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.1.2 雞卵黃抗體純度的鑒定
        3.1.3 雞卵黃抗體蛋白含量的鑒定
        3.1.4 雞卵黃抗體特異性的評(píng)價(jià)
    3.2 功能化羧基磁珠和免疫磁珠的表征
        3.2.1 透射電子顯微鏡表征結(jié)果
        3.2.2 紅外光譜表征結(jié)果
        3.2.3 磁力表征結(jié)果
    3.3 金黃色葡萄球菌可視化檢測(cè)方法的建立
        3.3.1 免疫磁珠用量和富集時(shí)間的優(yōu)化
        3.3.2 H_2O_2 用量的優(yōu)化
        3.3.3 H_2O_2 分解反應(yīng)時(shí)間的優(yōu)化
        3.3.4 顯色液pH值的優(yōu)化
        3.3.5 TMB溶液濃度的優(yōu)化
        3.3.6 HRP溶液濃度的優(yōu)化
    3.4 金黃色葡萄球菌可視化檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)
        3.4.1 檢測(cè)限的確定
        3.4.2 準(zhǔn)確度的確定
        3.4.3 特異性的評(píng)價(jià)
        3.4.4 重復(fù)性的評(píng)價(jià)
        3.4.5 模擬樣的檢測(cè)以及加標(biāo)回收率的測(cè)定
第4章 討論
    4.1 雞卵黃抗體的制備與鑒定
    4.2 免疫磁珠的制備和表征
    4.3 TMB-HRP-H_2O_2 顯色體系
    4.4 檢測(cè)體系反應(yīng)條件的優(yōu)化
    4.5 模擬樣品的檢測(cè)
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金黃色葡萄球菌壁磷壁酸結(jié)構(gòu)、功能及其糖基化修飾概述[J]. 熊夢(mèng)園,李一榮.  武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020(03)
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[3]一起由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒檢測(cè)分析[J]. 黃彬紅,蔡津霖,莊一鳴.  按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué). 2019(22)
[4]聯(lián)合環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和橫向流動(dòng)試紙條檢測(cè)金黃色葡萄球菌[J]. 陳歡,余蓓蓓,黃世旺,徐昌平,毛爭(zhēng)爭(zhēng).  預(yù)防醫(yī)學(xué). 2019(04)
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[7]環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增微流控檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 殷宏,湯小玉,薛強(qiáng),鄒明強(qiáng).  檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊. 2018(03)
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[10]副溶血性弧菌高免卵黃抗體的制備和不同提純方法效果的比較[J]. 翟玥,曲笑鋒,龐博,李麗,徐坤,王夢(mèng)涵,高孜博,宋佳音,宋秀玲,金明華.  吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(02)

博士論文
[1]三種人獸共患病病原菌同步快速檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 李麗.吉林大學(xué) 2017

碩士論文
[1]食品中布魯氏菌快速檢測(cè)方法的建立及效果評(píng)價(jià)[D]. 宋丹丹.吉林大學(xué) 2017
[2]金黃色葡萄球菌生物被膜相關(guān)基因型及其分子進(jìn)化規(guī)律的研究[D]. 劉曉晨.華南理工大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3367394