單核細(xì)胞增生性李斯特菌簡(jiǎn)稱單增李斯特菌,是一種常見的食源性致病菌,具有污染范圍廣、環(huán)境耐受性強(qiáng)、致死率高等特點(diǎn)。人們攝食被單增李斯特菌污染的食物后,可引起腦膜炎、敗血癥、膿腫及孕婦流產(chǎn)等一系列疾病。近年來(lái),世界各國(guó)多次爆發(fā)單增李斯特菌的感染事件,造成了巨大的財(cái)產(chǎn)損失和人員傷亡,引起人們的高度重視。因此,建立食品中單增李斯特菌快速、準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)方法具有十分重要的意義。傳統(tǒng)的單增李斯特菌分離鑒定方法具有費(fèi)時(shí)耗力等缺點(diǎn),不能滿足快速檢測(cè)的需要,而免疫學(xué)方法與分子生物學(xué)方法以其檢測(cè)時(shí)間短、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用到致病菌快速檢測(cè)領(lǐng)域,并取得了良好的效果。本研究將免疫磁珠與雙重PCR聯(lián)用建立了單增李斯特菌的快速檢測(cè)的方法。此外,本研究還制備了單增李斯特菌膜蛋白p60對(duì)應(yīng)的單鏈抗體。主要研究結(jié)果如下:（1）PCR擴(kuò)增單增李斯特菌iap基因,將其插入pET-28a（+）質(zhì)粒中,轉(zhuǎn)化E.coli BL21（DE3）成功構(gòu)建p60蛋白表達(dá)菌株,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)獲得單增李斯特菌p60蛋白,并經(jīng)鎳柱純化后獲得純化的p60蛋白。（2）以p60蛋白為免疫原免疫新西蘭大白兔,四次免疫后收集血清,經(jīng)Prote... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

膠體金免疫層析試紙條的構(gòu)造Fig.1-1Theconstructionofcolloidalgoldimmunochromatographicstrip

33圖 3-1 iap 基因瓊脂糖凝膠電泳圖M：DNA 標(biāo)準(zhǔn)；泳道 1，2：iap 基因序列擴(kuò)增。Fig. 3-1Agarose gel electrophoresis of iap geneM: DNAMarker, Lane 1, 2: iap gene.0 蛋白表達(dá)菌的構(gòu)建重組質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化入 E. coli BL21（DE3），單菌落以 iap 基因擴(kuò)增引物進(jìn)行菌落 PCR 擴(kuò) 3-2 所示，結(jié)果表明所挑選的 6 個(gè)單菌落均被來(lái)的誘導(dǎo)表達(dá)實(shí)驗(yàn)。

圖 3-2 轉(zhuǎn)化后菌落 PCR 驗(yàn)證Fig. 3-2 PCR verification of bacterial colonies after transformation白的誘導(dǎo)表達(dá)及可溶性分析成功的菌株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，加入 0.1M 的 IPTG，并于 25℃，200rpm p60 蛋白表達(dá)，結(jié)果經(jīng) SDS-PAGE 分析表明在 65KDa 左右有目的條一致，說明目的蛋白表達(dá)成功。而且在破碎菌體的沉淀以及上清中均知重組蛋白是部分可溶性表達(dá)。根據(jù) Bubert 等人的研究（Bubert et al白末端易降解，所以推測(cè)純化產(chǎn)物出現(xiàn)兩條帶的情況是由于末端降解

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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