發(fā)布時(shí)間：2021-08-24 03:57

　　目的:微囊藻毒素-LR（Microcystin-LR,MCLR）是一種單環(huán)七肽肝毒素,長期低劑量攝入MCLR與肝癌等消化道腫瘤的高發(fā)有關(guān),但其致癌作用機(jī)制不明。人谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞基（Glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC）主要調(diào)節(jié)谷胱甘肽的從頭合成,在細(xì)胞抗氧化防御系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用,大量證據(jù)表明GCLC表達(dá)與癌癥發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),MCLR誘導(dǎo)WRL68細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化過程中,伴隨著GCLC蛋白表達(dá)水平持續(xù)降低,推測GCLC的下調(diào)可能參與了MCLR誘導(dǎo)的肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。為此,本研究采用低劑量MCLR對正常的人肝WRL68細(xì)胞株和課題組前期構(gòu)建的穩(wěn)定過表達(dá)GCLC基因的WRL68細(xì)胞株進(jìn)行慢性染毒,誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,觀察GCLC過表達(dá)對MCLR惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平及惡性表型的影響,探討GCLC在MCLR所致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用。方法:1.誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。采用正常的人肝WRL68細(xì)胞株和穩(wěn)定過表達(dá)GCLC基因的WRL68細(xì)胞株,設(shè)正常對照組、MCLR染毒組、空載組、空載染毒組、GCLC過表達(dá)組... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MCLR染毒至第25代，各組細(xì)胞GCLC蛋白的Westernblot結(jié)果

圖 2 GCLC 對 MCLR 誘導(dǎo)的細(xì)胞的集落形成能力的影響（A）集落形成實(shí)驗(yàn)的代表性圖像（×200）；（B）集落形成的相對定量。注：與正常對照組比較，aP<0.05；與空載組比較，bP<0.05；與空載染毒組比較，cP<0.05。Figure 2 Roles of GCLC in MCLR-induced cell colony formation.(A) Representative images of soft agar assay (Original magnification×200). (B) Quantification ofcolony formation in soft agar.aP<0.05 compared with control cells.bP<0.05 compared with vector control

圖 3 GCLC 對 MCLR 誘導(dǎo)的細(xì)胞體外遷移能力的影響（A）Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)的代表性圖片（×100）；（B）遷移細(xì)胞數(shù)的相對定量。注：與正常對照組比較，aP<0.05；與空載組比較，bP<0.05；與空載染毒組比較，cP<0.05。Figure 3 Roles of GCLC in MCLR-induced cell migration.(A) Representative images of migration capacity for MCLR-induced WRL68 cells passing through aTranswell barrier for 72 h (Original magnification ×100). (B) Quantification of relative migrating cell


本文編號(hào)：3359230