發(fā)布時間：2017-04-28 22:13

  本文關(guān)鍵詞：荔枝水溶性提取蛋白及柑橘Citsh1蛋白促炎效果評價研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：荔枝和柑橘都是營養(yǎng)豐富,功能成分含量高的園藝果品,具有很好的保健作用,深受消費者的喜愛。但是在生活中我們經(jīng)常會發(fā)現(xiàn),過多的食用荔枝或部分寬皮柑橘會出現(xiàn)上火的癥狀,表現(xiàn)為喉嚨瘙癢或疼痛、牙齦腫脹、口腔潰瘍、甚至是發(fā)燒和炎癥,這顯著地影響著人們的生活質(zhì)量。本文在本實驗室前期工作的基礎(chǔ)上,選用荔枝和溫州蜜柑這兩種水果,利用巨噬細胞和小鼠模型,評價了荔枝粗提物和Citsh1蛋白的促炎效果。荔枝中促炎有效成分的提取、功能驗證及鑒定:1.初步建立了荔枝促炎有效成分的提取工藝,從荔枝中分離出純度較高的水溶性蛋白。具體方法:將荔枝果肉榨汁、過濾、離心并冷凍干燥得到荔枝水溶性提取物(LWE),LWE經(jīng)透析、冷凍干燥后得到高分子水溶性提取物(HLWE),最后從HLWE中提取蛋白。2.利用巨噬細胞系RAW264.7對蛋白組分(LWP)進行促炎效果評價。發(fā)現(xiàn)LWP處理后,細胞中促炎因子IL-1β,i NOS,COX-2和抗炎因子HO-1在轉(zhuǎn)錄水平上的表達都顯著性上升。3.對LWP進行質(zhì)譜鑒定,并利用SMART和混合序列比對進行分析,結(jié)果顯示14-3-3樣蛋白GF14λ,14-3-3樣蛋白GF14ω和14-3-3樣蛋白GF14υ是最可能具有促炎功效的蛋白。重組蛋白r Citsh1.3-3促炎效果的體內(nèi)評價研究:1.小鼠給藥一定周期后,進行血常規(guī)檢測,結(jié)果顯示處理組小鼠NE%(嗜中性粒細胞比率)、BA%(嗜堿性粒細胞百分率)比率均有所上升,而LY%(淋巴細胞比率)、PLT(血小板計數(shù))和PCT%(血小板壓積)基本成下降趨勢。2.對小鼠的結(jié)腸和肺部做病理組織切片,結(jié)果顯示處理組小鼠的結(jié)腸以及肺部組織表現(xiàn)出炎癥變化。3.對小鼠血清進行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理組小鼠血清中的炎癥因子IL-1α、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α表達幾乎都有所升高。
【關(guān)鍵詞】：柑橘 荔枝 “上火” 巨噬細胞 小鼠 炎癥因子
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R151
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表（Abbreviations）10-11
• 第一章 前言11-20
• 1 課題的提出11-13
• 2 上火與炎癥的關(guān)系13-15
• 3 炎癥與炎癥因子15-16
• 4 炎癥研究模型16-18
• 4.1 巨噬細胞系RAW264.7 炎癥模型的建立17-18
• 4.2 C57BL/6 小鼠炎癥模型的建立18
• 5 本課題研究內(nèi)容、目的和意義18-20
• 第二章 荔枝中促炎有效成分的提取、功能驗證以及鑒定20-39
• 1 引言20
• 2 材料與方法20-26
• 2.1 實驗藥品及試劑20-21
• 2.2 荔枝樣品的前期處理21
• 2.3 蛋白質(zhì)的提取與定量21-22
• 2.4 SDS-PAGE電泳22
• 2.5 細胞培養(yǎng)實驗22-23
• 2.6 MTT法測定細胞生存能力23-24
• 2.7 細胞總RNA的提取以及反轉(zhuǎn)錄24-25
• 2.8 半定量PCR和實時熒光定量PCR分析25
• 2.9 質(zhì)譜分析25-26
• 2.10 數(shù)據(jù)分析26
• 3 結(jié)果與分析26-36
• 3.1 荔枝中促炎蛋白的提取以及SDS-PAGE分析26-28
• 3.2 體外LWP蛋白的毒理實驗28-29
• 3.3 LWP蛋白對炎癥介質(zhì)mRNA表達水平的影響29-32
• 3.4 LWP蛋白質(zhì)譜鑒定結(jié)果32-36
• 4 討論36-39
• 4.1 荔枝的“上火”、過敏以及炎癥探討36-37
• 4.2 荔枝中促炎物質(zhì)的提取以及促炎功能研究37
• 4.3 荔枝中“上火”候選蛋白的功能分析37-39
• 第三章 溫州蜜柑上火成分的功能驗證39-57
• 1 引言39
• 2 材料與方法39-43
• 2.1 實驗材料及試劑39
• 2.2 實驗材料處理39-40
• 2.3 實驗動物分組與給藥40
• 2.4 小鼠血常規(guī)測定40
• 2.5 小鼠肺和腸道病理組織切片制作40-42
• 2.6 小鼠血清中炎癥因子含量測定42-43
• 2.6.1 血清樣本的收集與儲藏42
• 2.6.2 實驗前試劑準備42
• 2.6.3 實驗過程42-43
• 2.7 數(shù)據(jù)分析43
• 3 結(jié)果與分析43-54
• 3.1 溫州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白對小鼠外觀的影響43-44
• 3.2 溫州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白的處理對小鼠血常規(guī)的影響44-50
• 3.2.1 小鼠血常規(guī)中嗜中性粒細胞的變化46-47
• 3.2.2 小鼠血常規(guī)中淋巴細胞的變化47
• 3.2.3 小鼠血常規(guī)中血小板計數(shù)的變化47-49
• 3.2.4 小鼠血常規(guī)中血小板壓積的變化49
• 3.2.5 小鼠血常規(guī)中嗜堿性粒細胞的變化49-50
• 3.3 溫州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白對小鼠結(jié)腸和肺組織的影響50-52
• 3.3.1 小鼠結(jié)腸組織的病理學(xué)變化50-51
• 3.3.2 小鼠肺組織的病理學(xué)變化51-52
• 3.4 溫州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白對小鼠血清中炎癥因子的影響52-54
• 4 討論54-57
• 4.1 柑橘“上火”在人體內(nèi)的反應(yīng)54-55
• 4.2 柑橘“上火”在小鼠體內(nèi)的反應(yīng)55-57
• 參考文獻57-65
• 附錄 科研成果65-66
• 致謝66

【引證文獻】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 季群;鐘波;閆慧清;楊曉慶;陳逗逗;彭抒昂;程運江;余學(xué)峰;童慶偉;馬兆成;鄧秀新;;溫州蜜柑誘導(dǎo)人體免疫炎癥反應(yīng):一項基于雙盲的口腔食物激發(fā)試驗研究[A];中國園藝學(xué)會2014年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2014年

  本文關(guān)鍵詞：荔枝水溶性提取蛋白及柑橘Citsh1蛋白促炎效果評價研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：333682