本文關(guān)鍵詞：四種類型化學(xué)致敏物對細胞因子表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討不同類型化學(xué)致敏物作用于THP-1源性巨噬細胞后產(chǎn)生的多種細胞因子，，從而建立致敏反應(yīng)的細胞因子譜；以特異性細胞因子表達改變?yōu)闄z測指標，進行動物實驗的研究驗證，尋找最靈敏的標記物來檢測化學(xué)物對皮膚的潛在致敏性，為皮膚致敏體外方法的建立及其科學(xué)性和有效性驗證提供實驗數(shù)據(jù)和參考依據(jù)。 方法1將人單核細胞株THP-1細胞用佛波酯（PMA，0.1μg/ml）誘導(dǎo)72小時，使之轉(zhuǎn)化為具有貼壁能力的THP-1巨噬細胞。選擇4種不同類型的化學(xué)致敏物硫酸鎳（NiSO4）、重鉻酸鉀（K2Cr2O7）、2,4-二硝基氯代苯（DNCB）、苯二胺（PPDA）、異氰酸酯（TDI）和2種非化學(xué)致敏物十二烷基磺酸鈉（SDS）、異丙醇（IPA）作用轉(zhuǎn)化的THP-1不同時間后，應(yīng)用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-6、TNF-α的表達水平，流式液相多重蛋白定量技術(shù)（CBA）檢測細胞培養(yǎng)上清中細胞因子IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10、INF-γ的表達水平。2BALB/C小鼠30只，隨機分為3組，即對照組、0.5%NiSO4和2%NiSO4組。其中NiSO4組的小鼠應(yīng)用閉塞補丁的染毒方式染毒3天，而對照組小鼠染毒相同劑量的DMSO。流式液相多重蛋白定量技術(shù)（CBA）分別檢測血清和脾細胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表達水平，用EDU方法檢測T細胞增殖情況。 結(jié)果1NiSO4、DNCB、K2Cr2O7作用THP-1細胞6h，PPDA和TDI作12h時，細胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8的表達量最高。2化學(xué)致敏物NiSO4、DNCB、K2Cr2O7、PPDA、TDI在最適時間點最適濃度刺激細胞分泌IL-6的水平分別為對照組的40、25、20、50、50倍，TNF-α水平為對照組的20、12、20、8、5倍，IL-1β水平為對照組的30、60、25、30、45倍，IL-8水平為對照組的15、12、15、12、7倍。3非致敏物SDS與IPA處理組IL-6水平均有升高，其中SDS組升高最明顯，約為空白對照組的20倍，TNF-α、IL-1β、IL-8表達水平無明顯變化。4IL-4、IL-10、INF-γ等3種細胞因子未檢測出變化。5小鼠染毒NiSO43天后，結(jié)果顯示：0.5%NiSO4染毒組和2%NiSO4染毒組小鼠血清中TNF-α水平分別為7.88pg/ml，18.66pg/ml，高于對照組的2.98pg/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；同時0.5%NiSO4染毒組和2%NiSO4染毒組小鼠血清中IL-6水平分別為10.94pg/ml，22.55pg/ml，高于對照組的4.79pg/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；而染毒組與對照組小鼠血清中IL-1β水平無顯著差異。NiSO4染毒組脾細胞培養(yǎng)上清中IL-6、TNF-α、IL-1β水平均顯著高于未染毒組（P0.05），且隨著染毒劑量的升高，細胞上清中IL-6和TNF-α、IL-1β表達量也逐漸增加。6小鼠連續(xù)體內(nèi)染毒3天后，體內(nèi)EDU檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：2%NiSO4染毒組T細胞增殖量明顯高于對照組，兩組間存在顯著性差異（P0.05）。0.5%NiSO4染毒組T細胞增殖量與對照組相比增高不明顯。 結(jié)論四種類型化學(xué)致敏物均能夠引起TNF-α、IL-1β、IL-8等細胞因子的表達量升高，動物實驗的驗證金屬類致敏物引起的細胞因子的變化與細胞實驗相一致，提示金屬類致敏物可應(yīng)用THP-1巨噬細胞為模型，并選擇6h作為細胞因子分泌的最佳時間點分泌的TNF-α、IL-1β、IL-8來檢測其致敏性。
【關(guān)鍵詞】：化學(xué)致敏物 THP-1細胞 細胞因子 細胞增殖 ELISA 流式液相多重 蛋白定量技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞10-11
• 引言11-13
• 第1章 四種類型化學(xué)致敏物對細胞因子表達的影響13-49
• 1.1 材料與方法14-28
• 1.1.1 儀器與試劑14-17
• 1.1.2 實驗方法17-28
• 1.2 結(jié)果28-38
• 1.2.1 THP-1 懸浮細胞轉(zhuǎn)化成為貼壁的巨噬細胞28-29
• 1.2.2 五種化學(xué)物刺激 THP-1 細胞后，細胞相對存活率29-30
• 1.2.3 四種不同類型的化學(xué)致敏物作用于轉(zhuǎn)化的 THP-1 細胞不同時間后，其上清中細胞因子表達水平的變化30-33
• 1.2.4 不同濃度致敏物作用轉(zhuǎn)化的 THP-1 細胞后，各組細胞上清中細胞因子表達水平的變化33-34
• 1.2.5 NiSO_4染毒對實驗小鼠脾細胞增殖的影響34-37
• 1.2.6 NiSO_4染毒對實驗小鼠血清中細胞因子表達的變化37-38
• 1.2.7 小鼠脾細胞上清中細胞因子表達水平38
• 1.3 討論38-43
• 1.3.1 化學(xué)致敏物作用于 THP-1 巨噬細胞對細胞因子表達的影響39-41
• 1.3.2 化學(xué)致敏物作用 THP-1 巨噬細胞不同時間后對細胞因子的影響41
• 1.3.3 NiSO_4染毒后對小鼠血清和脾細胞上清中細胞因子的影響41-42
• 1.3.4 NiSO_4染毒后對小鼠脾細胞增殖情況的影響42-43
• 1.4 結(jié)論43
• 參考文獻43-49
• 第2章 綜述 鎳毒性及生物標志物研究進展49-56
• 2.1 鎳的理化性質(zhì)及檢測方法49-50
• 2.2 鎳的主要健康危害效應(yīng)50-53
• 2.2.1 致敏性50-51
• 2.2.2 心血管毒性51-52
• 2.2.3 致癌性52
• 2.2.4 生殖毒性和肝臟毒性52-53
• 參考文獻53-56
• 致謝56-57
• 導(dǎo)師簡介57-58
• 作者簡介58-59
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王敏,吳中亮,陳家X;鎳化合物誘發(fā)惡性轉(zhuǎn)化細胞的端粒酶活性表達[J];癌變.畸變.突變;2003年04期

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本文編號：332210