發(fā)布時間：2021-06-25 08:17

　　四氯苯醌（TCBQ）過去常被用作防腐劑和農(nóng)藥產(chǎn)品,它可通過食物鏈進(jìn)入生物體而損害機(jī)體健康。本課題組之前報(bào)道指出TCBQ能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞產(chǎn)生活性氧和細(xì)胞遺傳毒性,但其是否具有神經(jīng)毒性尚未有研究,所以明確其毒性及機(jī)制為尋找新的減毒措施,指導(dǎo)臨床合理用藥具有重要意義。醌類結(jié)構(gòu)的物質(zhì)在體內(nèi)的氧化還原過程會產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）,進(jìn)而發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng),引起酶、氨基酸、蛋白質(zhì)的氧化破壞,從而引起機(jī)體疾病如衰老、腫瘤、突變及炎癥等。ROS影響著細(xì)胞的生化過程,是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的一個重要因子。細(xì)胞凋亡是一種主動的過程,是細(xì)胞對環(huán)境的生理性病理性刺激信號,環(huán)境條件的變化或緩和性損傷產(chǎn)生的應(yīng)答有序變化的死亡過程。其與多細(xì)胞生物的發(fā)育、分化、穩(wěn)態(tài)維持及某些疾病發(fā)生等多種生命活動都密切相關(guān)。細(xì)胞凋亡主要包括三條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路：死亡受體途徑、線粒體依賴途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑。大鼠腎上腺嗜鉻骨髓瘤細(xì)胞（PC12細(xì)胞）被廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)和神經(jīng)毒理學(xué)的研究,因此本文選用PC12細(xì)胞作為研究對象。首先采用AO/EB染色鑒別凋亡壞死,DAPI, Hoechst染色鑒別不同濃度的TCBQ對于細(xì)胞形態(tài)的影響。用JC-1熒光探... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫符號對照表
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 四氯苯醌
        1.2.1 四氯苯醌的性質(zhì)
        1.2.2 四氯苯醌的應(yīng)用
    1.3 活性氧簡介
    1.4 細(xì)胞凋亡
        1.4.1 受體依賴的細(xì)胞凋亡的信號傳導(dǎo)通路(外部通路)
        1.4.2 線粒體依賴的細(xì)胞凋亡的信號傳導(dǎo)通路(內(nèi)部通路)
        1.4.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡通路
    1.5 Caspase 8/t-Bid通路
        1.5.1 Caspase 8
        1.5.2 Bid
    1.6 立題依據(jù)和意義
第二章 四氯苯醌激活Caspase 8/t-Bid誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器和設(shè)備
        2.2.3 主要溶劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
        2.3.2 細(xì)胞存活率
        2.3.3 乳酸脫氫酶活性的檢測
        2.3.4 細(xì)胞形態(tài)觀察
        2.3.5 線粒體膜電位(MMP)檢測
        2.3.6 Annexin V-FITC/PI方法檢測細(xì)胞凋亡
        2.3.7 免疫熒光雙染實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 細(xì)胞蛋白提取
        2.3.9 Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 TCBQ對于PC12細(xì)胞存活率的影響
        2.4.2 TCBQ對PC12細(xì)胞乳酸脫氫酶的影響
        2.4.3 TCBQ誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡
        2.4.4 TCBQ通過激活線粒體通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        2.4.5 TCBQ通過激活死亡受體通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        2.4.6 TCBQ通過t-Bid表達(dá)而激活內(nèi)外凋亡通路
        2.4.7 Caspase 8抑制劑對TCBQ誘導(dǎo)凋亡的影響
    2.5 討論
第三章 ROS在caspase 8/t-Bid通路中的作用及機(jī)制研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 溶劑與試劑
        3.2.2 主要儀器和設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 ROS的檢測
        3.3.2 GSH含量的測定
        3.3.3 MDA含量的測定
        3.3.4 蛋白質(zhì)羰基含量的測定
        3.3.5 抗氧化劑NAC對死亡受體通路的影響
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 TCBQ誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生
        3.4.2 TCBQ對細(xì)胞中GSH含量的影響
        3.4.3 TCBQ對細(xì)胞中MDA含量的影響
        3.4.4 TCBQ對細(xì)胞中蛋白質(zhì)羰基含量的影響
        3.4.5 抗氧化劑NAC抑制死亡受體通路的激活
    3.5 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表的科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛋白質(zhì)羰基化與衰老[J]. 李國林,印大中.  中國老年學(xué)雜志. 2008(20)
[2]三丁基錫（TBT）對羅非魚兩組織SOD和GSH的影響[J]. 馬曉燕,范立民,甘居利,胡庚東,瞿建宏,陳家長.  安全與環(huán)境學(xué)報(bào). 2007(04)
[3]細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 王德成,高洪.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2003(06)
[4]四氯苯醌的綜合利用[J]. 陳光雨.  染料工業(yè). 1982(06)



本文編號：3248856