本文關(guān)鍵詞：硫丹誘導(dǎo)miR-22表達(dá)變化與HUVEC-C細(xì)胞損傷的關(guān)聯(lián)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：硫丹,是一種有機(jī)氯農(nóng)藥,被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè),并在2011年被斯德哥爾摩公約列入禁用的持久性有機(jī)污染物,具有持久性、高毒性和生物富集特征,與人類疾病尤其是心血管疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān),對人類的健康構(gòu)成了潛在的威脅。其生物毒性考慮與硫丹對細(xì)胞的直接損傷和對細(xì)胞功能的影響密不可分。已有研究顯示硫丹具有多種細(xì)胞毒性,但其對內(nèi)皮細(xì)胞的毒性研究尚未見報(bào)道。本研究著重探討了不同劑量硫丹對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-C)的毒性劑量效應(yīng)關(guān)系；從分子水平和蛋白質(zhì)水平分析了參與調(diào)控細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡的通路,炎癥因子的變化及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子miR-22的作用機(jī)制。結(jié)果表明,硫丹能夠引起血管內(nèi)皮細(xì)胞毒性,表現(xiàn)為細(xì)胞存活率降低,從20μM開始出現(xiàn)極顯著的細(xì)胞增殖抑制作用(P0.01),并具有劑量依賴性。硫丹在高劑量下(60μM)通過CDK6/pRb通路誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在G1期,在較高劑量下(40μM和60μM)通過線粒體凋亡通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并且促發(fā)炎癥因子IL-6的分泌及上調(diào)IL-6,IL-8的基因表達(dá),提示硫丹暴露能夠造成血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)。此外,硫丹特異性地誘導(dǎo)miR-22的表達(dá)上調(diào),具有時(shí)間和劑量依賴性關(guān)系。通過轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-22過表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡并使得炎癥因子IL-8的相對mRNA表達(dá)水平升高,但與細(xì)胞周期的阻滯無關(guān),提示miR-22可能參與調(diào)控硫丹誘導(dǎo)的HUVEC-C細(xì)胞的凋亡和炎癥反應(yīng)過程。本研究明確了硫丹具有內(nèi)皮細(xì)胞毒性,能夠?qū)е聝?nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào),闡明了硫丹引起人內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)的分子機(jī)制。通過對miR-22表達(dá)變化和miR-22的內(nèi)皮細(xì)胞功能研究,揭示了miR-22變化與硫丹所誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷的關(guān)聯(lián),這為將來研究硫丹暴露引起人類疾病尤其是心血管疾病的診斷和預(yù)防提供了科學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：硫丹 HUVEC-C細(xì)胞 內(nèi)皮細(xì)胞損傷 miR-22 心血管疾病
【學(xué)位授予單位】：大連海事大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 緒論10-21
• 1.1 硫丹的研究背景10-15
• 1.1.1 硫丹的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)10-11
• 1.1.2 硫丹的毒理學(xué)特點(diǎn)11
• 1.1.3 硫丹對人類健康的危害11-13
• 1.1.4 硫丹的細(xì)胞毒性研究現(xiàn)狀13-15
• 1.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究意義15-17
• 1.2.1 血管內(nèi)皮細(xì)胞的特點(diǎn)15-16
• 1.2.2 血管內(nèi)皮損傷與功能失調(diào)16-17
• 1.2.3 血管內(nèi)皮損傷與人類疾病關(guān)聯(lián)17
• 1.3 miRNA的研究進(jìn)展17-20
• 1.3.1 miRNA簡介17-18
• 1.3.2 miRNA在心血管疾病中的作用18-19
• 1.3.3 miR-22的研究進(jìn)展19-20
• 1.4 本研究的目的及意義20-21
• 第2章 材料與方法21-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及試劑21-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備21-22
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)耗材及試劑22-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法25-39
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)25
• 2.3.2 細(xì)胞復(fù)蘇25-26
• 2.3.3 細(xì)胞凍存26
• 2.3.4 細(xì)胞傳代26-27
• 2.3.5 細(xì)胞同步化處理27
• 2.3.6 硫丹暴露處理27
• 2.3.7 細(xì)胞毒性測定27-28
• 2.3.8 細(xì)胞增殖測定28
• 2.3.9 細(xì)胞周期檢測28-29
• 2.3.10 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)29-31
• 2.3.11 細(xì)胞凋亡檢測31-32
• 2.3.12 分光光度法檢測caspase-3相對活化程度32
• 2.3.13 線粒體膜電位檢測32-33
• 2.3.14 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.3.15 miRNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測34-36
• 2.3.16 mRNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測36-38
• 2.3.17 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)38
• 2.3.18 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法38-39
• 第3章 結(jié)果與討論39-59
• 3.1 硫丹暴露對HUVEC-C細(xì)胞功能的影響39-52
• 3.1.1 硫丹暴露對HUVEC-C細(xì)胞毒性的影響39-40
• 3.1.2 硫丹暴露對HUVEC-C細(xì)胞周期的影響及其分子機(jī)制研究40-44
• 3.1.3 硫丹暴露對HUVEC-C細(xì)胞凋亡的影響及其分子機(jī)制研究44-49
• 3.1.4 硫丹暴露對HUVEC-C細(xì)胞炎癥因子IL-6和IL-8分泌及表達(dá)的影響49-52
• 3.2 miR-22表達(dá)變化及功能研究52-59
• 3.2.1 硫丹暴露對miR-22表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)和劑量效應(yīng)影響52-54
• 3.2.2 miR-22在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的功能研究54-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文69-70
• 致謝70-71
• 作者簡介71

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本文編號：324838