本文關(guān)鍵詞：硫丹誘導miR-22表達變化與HUVEC-C細胞損傷的關(guān)聯(lián)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：硫丹,是一種有機氯農(nóng)藥,被廣泛應用于農(nóng)業(yè),并在2011年被斯德哥爾摩公約列入禁用的持久性有機污染物,具有持久性、高毒性和生物富集特征,與人類疾病尤其是心血管疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān),對人類的健康構(gòu)成了潛在的威脅。其生物毒性考慮與硫丹對細胞的直接損傷和對細胞功能的影響密不可分。已有研究顯示硫丹具有多種細胞毒性,但其對內(nèi)皮細胞的毒性研究尚未見報道。本研究著重探討了不同劑量硫丹對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC-C)的毒性劑量效應關(guān)系；從分子水平和蛋白質(zhì)水平分析了參與調(diào)控細胞周期阻滯和細胞凋亡的通路,炎癥因子的變化及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子miR-22的作用機制。結(jié)果表明,硫丹能夠引起血管內(nèi)皮細胞毒性,表現(xiàn)為細胞存活率降低,從20μM開始出現(xiàn)極顯著的細胞增殖抑制作用(P0.01),并具有劑量依賴性。硫丹在高劑量下(60μM)通過CDK6/pRb通路誘導細胞周期阻滯在G1期,在較高劑量下(40μM和60μM)通過線粒體凋亡通路誘導細胞凋亡,并且促發(fā)炎癥因子IL-6的分泌及上調(diào)IL-6,IL-8的基因表達,提示硫丹暴露能夠造成血管內(nèi)皮細胞功能失調(diào)。此外,硫丹特異性地誘導miR-22的表達上調(diào),具有時間和劑量依賴性關(guān)系。通過轉(zhuǎn)染實驗證實miR-22過表達導致細胞凋亡并使得炎癥因子IL-8的相對mRNA表達水平升高,但與細胞周期的阻滯無關(guān),提示miR-22可能參與調(diào)控硫丹誘導的HUVEC-C細胞的凋亡和炎癥反應過程。本研究明確了硫丹具有內(nèi)皮細胞毒性,能夠?qū)е聝?nèi)皮細胞功能失調(diào),闡明了硫丹引起人內(nèi)皮細胞功能失調(diào)的分子機制。通過對miR-22表達變化和miR-22的內(nèi)皮細胞功能研究,揭示了miR-22變化與硫丹所誘導的內(nèi)皮細胞損傷的關(guān)聯(lián),這為將來研究硫丹暴露引起人類疾病尤其是心血管疾病的診斷和預防提供了科學依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：硫丹 HUVEC-C細胞 內(nèi)皮細胞損傷 miR-22 心血管疾病
【學位授予單位】：大連海事大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 緒論10-21
• 1.1 硫丹的研究背景10-15
• 1.1.1 硫丹的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)10-11
• 1.1.2 硫丹的毒理學特點11
• 1.1.3 硫丹對人類健康的危害11-13
• 1.1.4 硫丹的細胞毒性研究現(xiàn)狀13-15
• 1.2 血管內(nèi)皮細胞的研究意義15-17
• 1.2.1 血管內(nèi)皮細胞的特點15-16
• 1.2.2 血管內(nèi)皮損傷與功能失調(diào)16-17
• 1.2.3 血管內(nèi)皮損傷與人類疾病關(guān)聯(lián)17
• 1.3 miRNA的研究進展17-20
• 1.3.1 miRNA簡介17-18
• 1.3.2 miRNA在心血管疾病中的作用18-19
• 1.3.3 miR-22的研究進展19-20
• 1.4 本研究的目的及意義20-21
• 第2章 材料與方法21-39
• 2.1 實驗材料21
• 2.2 實驗設備及試劑21-25
• 2.2.1 實驗設備21-22
• 2.2.2 實驗耗材及試劑22-25
• 2.3 實驗方法25-39
• 2.3.1 細胞培養(yǎng)25
• 2.3.2 細胞復蘇25-26
• 2.3.3 細胞凍存26
• 2.3.4 細胞傳代26-27
• 2.3.5 細胞同步化處理27
• 2.3.6 硫丹暴露處理27
• 2.3.7 細胞毒性測定27-28
• 2.3.8 細胞增殖測定28
• 2.3.9 細胞周期檢測28-29
• 2.3.10 蛋白質(zhì)免疫印跡實驗29-31
• 2.3.11 細胞凋亡檢測31-32
• 2.3.12 分光光度法檢測caspase-3相對活化程度32
• 2.3.13 線粒體膜電位檢測32-33
• 2.3.14 轉(zhuǎn)染實驗33-34
• 2.3.15 miRNA的實時熒光定量PCR檢測34-36
• 2.3.16 mRNA的實時熒光定量PCR檢測36-38
• 2.3.17 酶聯(lián)免疫吸附實驗38
• 2.3.18 統(tǒng)計學分析方法38-39
• 第3章 結(jié)果與討論39-59
• 3.1 硫丹暴露對HUVEC-C細胞功能的影響39-52
• 3.1.1 硫丹暴露對HUVEC-C細胞毒性的影響39-40
• 3.1.2 硫丹暴露對HUVEC-C細胞周期的影響及其分子機制研究40-44
• 3.1.3 硫丹暴露對HUVEC-C細胞凋亡的影響及其分子機制研究44-49
• 3.1.4 硫丹暴露對HUVEC-C細胞炎癥因子IL-6和IL-8分泌及表達的影響49-52
• 3.2 miR-22表達變化及功能研究52-59
• 3.2.1 硫丹暴露對miR-22表達的時間效應和劑量效應影響52-54
• 3.2.2 miR-22在血管內(nèi)皮細胞中的功能研究54-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻60-69
• 攻讀學位期間公開發(fā)表論文69-70
• 致謝70-71
• 作者簡介71

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