本文關鍵詞：寧波市八種常見重金屬污染物聯(lián)合毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：采用小鼠上皮細胞株（JB6細胞），通過體外實驗探索八種常見重金屬混合污染物對細胞產(chǎn)生的毒性作用及機制，同時選用抗氧化劑茶多酚（-Epigallocatechin gallate，EGCG）探討其對多種重金屬體外聯(lián)合毒性是否具有拮抗作用，為多種重金屬的聯(lián)合毒性的研究和防治提供科學依據(jù)。 方法：檢索相關文獻，配置與寧波養(yǎng)殖水體中八種常見重金屬污染物的混合濃度比例相似的毒物；由MTT試驗檢測不同濃度的重金屬混合污染物對細胞生存率的影響，并確定后續(xù)試驗的濃度；通過流式細胞儀檢測染毒后細胞的周期和凋亡情況；熒光染料處理染毒后的JB6細胞，借助激光共聚焦顯微鏡觀察其氧化應激產(chǎn)生情況；熒光素酶試驗檢測細胞中轉錄因子AP-1和NF-kB的表達情況；運用蛋白免疫印跡法檢測細胞中蛋白的表達情況；在重金屬混合污染物暴露細胞的基礎上加或者不加10μM抗氧化劑EGCG，檢測抗氧化劑組與未加抗氧化劑組細胞毒性、細胞周期、細胞內氧化應激的情況、Nrf2和HO-1蛋白的表達情況。 結果：不同濃度的重金屬混合污染物染毒細胞24h后，隨染毒濃度的增加細胞毒性增大，處理組2-9與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，細胞周期出現(xiàn)S期阻滯，細胞凋亡率增加；在H2DCFDA、DHA和Hoechst共同染色下經(jīng)共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)細胞內ROS產(chǎn)生量增多，并且隨濃度增高，ROS逐漸增多；不同濃度的重金屬混合污染物暴露細胞12h后，經(jīng)熒光素酶檢測發(fā)現(xiàn)能夠上調JB6細胞中轉錄因子AP-1和NF-kB的表達水平。染毒24h后提取細胞蛋白，經(jīng)蛋白免疫印跡實驗檢測發(fā)現(xiàn)C-jun蛋白和p65蛋白表達量隨濃度的增大而逐漸升高。 加入10μM抗氧化劑EGCG后，與未加抗氧化劑組相比，抗氧化劑組的細胞毒性得到一定抑制，細胞內ROS的產(chǎn)生量減少，S期的阻滯作用有所下降，蛋白檢測發(fā)現(xiàn)Nrf2和HO-1蛋白的表達減弱，這些結果證實了EGCG對重金屬混合污染物的毒性有一定的拮抗作用。 結論：重金屬混合物可以阻滯細胞周期，誘導細胞凋亡，誘導細胞發(fā)生氧化應激，增加ROS的產(chǎn)生量，使JB6細胞轉錄因子AP-1和NF-kB表達水平增加，蛋白免疫印跡試驗檢測C-jun和p65蛋白的表達增加，由此可能促使細胞發(fā)生癌變。EGCG可以對重金屬混合物引起的細胞毒性起到一定保護作用，，減輕細胞周期的阻滯，對細胞內ROS的產(chǎn)生起到一定的拮抗作用，并能下調Nrf2和HO-1蛋白的表達。
【關鍵詞】：重金屬混合污染物 JB6細胞 毒性 EGCG 氧化應激
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-14
• 1 研究內容14-15
• 1.1 重金屬混合污染物對 JB6 細胞的毒性作用14
• 1.2 抗氧化劑 EGCG 對重金屬混合污染物毒性的預防和拮抗作用14-15
• 2 實驗材料和方法15-28
• 2.1 實驗材料15-17
• 2.1.1 八種常見重金屬15
• 2.1.2 實驗用細胞株15
• 2.1.3 實驗用主要儀器15-16
• 2.1.4 主要試劑16-17
• 2.2 實驗方法17-21
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)及處理用液17-18
• 2.2.2 EGCG 的配置18
• 2.2.3 MTT 試驗用試劑18-19
• 2.2.4 蛋白免疫印跡實驗相關試劑及配置19-21
• 2.3 研究方法21-28
• 2.3.1 八種常見重金屬混合污染物的比例的選定及合理配置21-22
• 2.3.2 細胞培養(yǎng)及處理22-23
• 2.3.3 MTT 實驗23-24
• 2.3.4 細胞周期實驗24
• 2.3.5 細胞凋亡實驗24
• 2.3.6 細胞自由基（ROS）生成狀況觀察實驗24-25
• 2.3.7 熒光素酶檢測基因（Luciferase 法）表達實驗25
• 2.3.8 蛋白免疫印跡（West-bloting 法）實驗25-27
• 2.3.9 數(shù)據(jù)的處理27-28
• 3 實驗結果28-39
• 3.1 八種常見重金屬混合污染物對 JB6 細胞毒性的影響28-35
• 3.1.1 重金屬混合物對 JB6 細胞生存率的影響28
• 3.1.2 重金屬混合物對 JB6 細胞形態(tài)的影響28-29
• 3.1.3 重金屬混合物對 JB6 細胞周期及細胞凋亡的影響29-32
• 3.1.4 重金屬混合物對 JB6 細胞自由基產(chǎn)生的影響32-33
• 3.1.5 重金屬混合物對細胞熒光素酶表達情況的影響33-34
• 3.1.6 重金屬混合物對細胞相關信號蛋白表達的影響34-35
• 3.2 抗氧化劑茶多酚對重金屬混合物產(chǎn)生的細胞毒性的拮抗與抑制作用35-39
• 3.2.1 抗氧化劑茶多酚對重金屬混合物細胞生存率的影響35-36
• 3.2.2 抗氧化劑茶多酚對重金屬混合物引起的細胞周期的影響36-37
• 3.2.3 抗氧化劑茶多酚對重金屬混合物引起的細胞氧化應激損傷的影響37-39
• 3.2.4 抗氧化劑茶多酚對重金屬混合物引起的細胞通路蛋白表達的影響39
• 4 討論39-43
• 4.1 重金屬混合物對 JB6 細胞生存率的影響40
• 4.2 重金屬混合物對細胞的形態(tài)學影響40
• 4.3 重金屬混合物對細胞周期及凋亡的影響40-41
• 4.4 細胞氧化應激情況41
• 4.5 細胞內轉錄因子 AP-1 和 NF-kB 的表達情況41-42
• 4.6 細胞內相關信號蛋白表達的情況42
• 4.7 EGCG 對重金屬混合污染物產(chǎn)生的細胞毒性的拮抗作用42-43
• 5 全文小結43-45
• 參考文獻45-52
• 附錄A 縮略詞52-54
• 附錄B 綜述54-67
• 參考文獻62-67
• 在學研究成果67-69
• 致謝69

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 肖碧玉,姚華,買買提·沙;三氧化二砷和氟化鈉對小鼠的聯(lián)合毒性及蓄積性的實驗研究[J];衛(wèi)生毒理學雜志;1991年02期

2 黃星培;吳先福;周瓊芳;;甲基-1605和甲胺磷的急性聯(lián)合毒性[J];職業(yè)衛(wèi)生與病傷;1991年01期

3 高錦伍;虞秀珍;龔建新;;二氯甲烷與苯的急性聯(lián)合毒性作用[J];南京鐵道醫(yī)學院學報;1985年01期

4 肖云;鎘-鎳對細菌、絲狀真菌和哺乳動物細胞的聯(lián)合毒性[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);1987年06期

5 殷若元;擬除蟲菊酯與多種化合物的聯(lián)合毒性[J];職業(yè)醫(yī)學;1989年01期

6 鐘賽賢,蔡承鏗,趙振新,陳成章;應用大型n灦遠疚锪隙拘緣難芯縖J];環(huán)境與健康雜志;1990年04期

7 鐘賽賢;蔡承鏗;趙振新;陳成章;;應用大型n灦遠疚锪隙拘緣難芯縖J];預防醫(yī)學情報雜志;1990年02期

8 朱心強,黃幸紓,錢軍程,方瑩;兩種農(nóng)藥聯(lián)合毒性評價方法的比較[J];衛(wèi)生毒理學雜志;1993年01期

9 錢海雷,金泰^

本文編號：322663