本文關(guān)鍵詞：寧波市八種常見重金屬污染物聯(lián)合毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：采用小鼠上皮細(xì)胞株（JB6細(xì)胞），通過體外實(shí)驗(yàn)探索八種常見重金屬混合污染物對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的毒性作用及機(jī)制，同時(shí)選用抗氧化劑茶多酚（-Epigallocatechin gallate，EGCG）探討其對(duì)多種重金屬體外聯(lián)合毒性是否具有拮抗作用，為多種重金屬的聯(lián)合毒性的研究和防治提供科學(xué)依據(jù)。 方法：檢索相關(guān)文獻(xiàn)，配置與寧波養(yǎng)殖水體中八種常見重金屬污染物的混合濃度比例相似的毒物；由MTT試驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的重金屬混合污染物對(duì)細(xì)胞生存率的影響，并確定后續(xù)試驗(yàn)的濃度；通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)染毒后細(xì)胞的周期和凋亡情況；熒光染料處理染毒后的JB6細(xì)胞，借助激光共聚焦顯微鏡觀察其氧化應(yīng)激產(chǎn)生情況；熒光素酶試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-kB的表達(dá)情況；運(yùn)用蛋白免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞中蛋白的表達(dá)情況；在重金屬混合污染物暴露細(xì)胞的基礎(chǔ)上加或者不加10μM抗氧化劑EGCG，檢測(cè)抗氧化劑組與未加抗氧化劑組細(xì)胞毒性、細(xì)胞周期、細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的情況、Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果：不同濃度的重金屬混合污染物染毒細(xì)胞24h后，隨染毒濃度的增加細(xì)胞毒性增大，處理組2-9與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞周期出現(xiàn)S期阻滯，細(xì)胞凋亡率增加；在H2DCFDA、DHA和Hoechst共同染色下經(jīng)共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生量增多，并且隨濃度增高，ROS逐漸增多；不同濃度的重金屬混合污染物暴露細(xì)胞12h后，經(jīng)熒光素酶檢測(cè)發(fā)現(xiàn)能夠上調(diào)JB6細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-kB的表達(dá)水平。染毒24h后提取細(xì)胞蛋白，經(jīng)蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)C-jun蛋白和p65蛋白表達(dá)量隨濃度的增大而逐漸升高。 加入10μM抗氧化劑EGCG后，與未加抗氧化劑組相比，抗氧化劑組的細(xì)胞毒性得到一定抑制，細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生量減少，S期的阻滯作用有所下降，蛋白檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)減弱，這些結(jié)果證實(shí)了EGCG對(duì)重金屬混合污染物的毒性有一定的拮抗作用。 結(jié)論：重金屬混合物可以阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，增加ROS的產(chǎn)生量，使JB6細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-kB表達(dá)水平增加，蛋白免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)C-jun和p65蛋白的表達(dá)增加，由此可能促使細(xì)胞發(fā)生癌變。EGCG可以對(duì)重金屬混合物引起的細(xì)胞毒性起到一定保護(hù)作用，，減輕細(xì)胞周期的阻滯，對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生起到一定的拮抗作用，并能下調(diào)Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：重金屬混合污染物 JB6細(xì)胞 毒性 EGCG 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-14
• 1 研究?jī)?nèi)容14-15
• 1.1 重金屬混合污染物對(duì) JB6 細(xì)胞的毒性作用14
• 1.2 抗氧化劑 EGCG 對(duì)重金屬混合污染物毒性的預(yù)防和拮抗作用14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法15-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 2.1.1 八種常見重金屬15
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株15
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)用主要儀器15-16
• 2.1.4 主要試劑16-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理用液17-18
• 2.2.2 EGCG 的配置18
• 2.2.3 MTT 試驗(yàn)用試劑18-19
• 2.2.4 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及配置19-21
• 2.3 研究方法21-28
• 2.3.1 八種常見重金屬混合污染物的比例的選定及合理配置21-22
• 2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)及處理22-23
• 2.3.3 MTT 實(shí)驗(yàn)23-24
• 2.3.4 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)24
• 2.3.5 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)24
• 2.3.6 細(xì)胞自由基（ROS）生成狀況觀察實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.3.7 熒光素酶檢測(cè)基因（Luciferase 法）表達(dá)實(shí)驗(yàn)25
• 2.3.8 蛋白免疫印跡（West-bloting 法）實(shí)驗(yàn)25-27
• 2.3.9 數(shù)據(jù)的處理27-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-39
• 3.1 八種常見重金屬混合污染物對(duì) JB6 細(xì)胞毒性的影響28-35
• 3.1.1 重金屬混合物對(duì) JB6 細(xì)胞生存率的影響28
• 3.1.2 重金屬混合物對(duì) JB6 細(xì)胞形態(tài)的影響28-29
• 3.1.3 重金屬混合物對(duì) JB6 細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響29-32
• 3.1.4 重金屬混合物對(duì) JB6 細(xì)胞自由基產(chǎn)生的影響32-33
• 3.1.5 重金屬混合物對(duì)細(xì)胞熒光素酶表達(dá)情況的影響33-34
• 3.1.6 重金屬混合物對(duì)細(xì)胞相關(guān)信號(hào)蛋白表達(dá)的影響34-35
• 3.2 抗氧化劑茶多酚對(duì)重金屬混合物產(chǎn)生的細(xì)胞毒性的拮抗與抑制作用35-39
• 3.2.1 抗氧化劑茶多酚對(duì)重金屬混合物細(xì)胞生存率的影響35-36
• 3.2.2 抗氧化劑茶多酚對(duì)重金屬混合物引起的細(xì)胞周期的影響36-37
• 3.2.3 抗氧化劑茶多酚對(duì)重金屬混合物引起的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響37-39
• 3.2.4 抗氧化劑茶多酚對(duì)重金屬混合物引起的細(xì)胞通路蛋白表達(dá)的影響39
• 4 討論39-43
• 4.1 重金屬混合物對(duì) JB6 細(xì)胞生存率的影響40
• 4.2 重金屬混合物對(duì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響40
• 4.3 重金屬混合物對(duì)細(xì)胞周期及凋亡的影響40-41
• 4.4 細(xì)胞氧化應(yīng)激情況41
• 4.5 細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子 AP-1 和 NF-kB 的表達(dá)情況41-42
• 4.6 細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)蛋白表達(dá)的情況42
• 4.7 EGCG 對(duì)重金屬混合污染物產(chǎn)生的細(xì)胞毒性的拮抗作用42-43
• 5 全文小結(jié)43-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 附錄A 縮略詞52-54
• 附錄B 綜述54-67
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 在學(xué)研究成果67-69
• 致謝69

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 肖碧玉,姚華,買買提·沙;三氧化二砷和氟化鈉對(duì)小鼠的聯(lián)合毒性及蓄積性的實(shí)驗(yàn)研究[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;1991年02期

2 黃星培;吳先福;周瓊芳;;甲基-1605和甲胺磷的急性聯(lián)合毒性[J];職業(yè)衛(wèi)生與病傷;1991年01期

3 高錦伍;虞秀珍;龔建新;;二氯甲烷與苯的急性聯(lián)合毒性作用[J];南京鐵道醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1985年01期

4 肖云;鎘-鎳對(duì)細(xì)菌、絲狀真菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的聯(lián)合毒性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1987年06期

5 殷若元;擬除蟲菊酯與多種化合物的聯(lián)合毒性[J];職業(yè)醫(yī)學(xué);1989年01期

6 鐘賽賢,蔡承鏗,趙振新,陳成章;應(yīng)用大型n灦遠(yuǎn)疚锪隙拘緣難芯縖J];環(huán)境與健康雜志;1990年04期

7 鐘賽賢;蔡承鏗;趙振新;陳成章;;應(yīng)用大型n灦遠(yuǎn)疚锪隙拘緣難芯縖J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志;1990年02期

8 朱心強(qiáng),黃幸紓,錢軍程,方瑩;兩種農(nóng)藥聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)方法的比較[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;1993年01期

9 錢海雷,金泰^

本文編號(hào)：322663