目的探討雙向凝膠電泳技術(shù)篩選及鑒定轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的差異蛋白質(zhì)。方法將大鼠原代肺成纖維細(xì)胞分為對(duì)照組及5 ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)組（1、24h）,以雙向凝膠電泳篩選差異蛋白,分離并進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。以Western blot法、免疫熒光染色、免疫組織染色對(duì)5 ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)（6～48 h）肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過(guò)程中差異蛋白[Rho GDP解離抑制因子α（Rho GDIα）]進(jìn)行驗(yàn)證并對(duì)矽肺纖維化相關(guān)指標(biāo)[α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）和I型前膠原（pro collagen-I）蛋白]進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)建立矽肺大鼠模型對(duì)肺組織中差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證并對(duì)矽肺纖維化相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果經(jīng)蛋白組學(xué)技術(shù)篩選出TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠原代肺成纖維細(xì)胞的9個(gè)差異蛋白,與對(duì)照組相比,TGF-β1誘導(dǎo)組有8個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)上調(diào),1個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)下調(diào),其中Rho GDIα表達(dá)上調(diào)（P<0.05）。Western blot及免疫組化結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,肺成纖維細(xì)胞Rho ... 

【文章來(lái)源】：環(huán)境與健康雜志. 2020,37(08)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要儀器與試劑
    1.2 肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 TGF-β1誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過(guò)程中差異蛋白的篩選
        1.3.1 分組
        1.3.2 差異蛋白的2-DE
        1.3.3 差異蛋白的質(zhì)譜分析
    1.4 TGF-β1誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過(guò)程中差異蛋白的驗(yàn)證及矽肺纖維化相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)
        1.4.1 分組
        1.4.2 I型前膠原（pro collagen-I）蛋白、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）及Rho GDP解離抑制因子α（Rho GDIα）蛋白表達(dá)的Western blot檢測(cè)
        1.4.3 TGF-β1誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞的α-SMA和Rho GDIα共表達(dá)免疫熒光染色檢測(cè)
    1.5 矽肺大鼠肺組織中差異蛋白的驗(yàn)證及矽肺纖維化相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)
        1.5.1 矽肺大鼠模型制備及實(shí)驗(yàn)分組
        1.5.2 大鼠肺組織中pro collagen-I蛋白、α-SMA及Rho GDIα蛋白表達(dá)的Western blot檢測(cè)
        1.5.3 大鼠肺組織Rho GDIα表達(dá)的免疫組織化學(xué)染色
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 TGF-β1誘導(dǎo)大鼠原代肺成纖維細(xì)胞關(guān)鍵差異蛋白的篩選
        2.1.1 2-DE圖譜示意圖
        2.1.2 差異蛋白點(diǎn)的判定
        2.1.3 差異蛋白鑒定結(jié)果
    2.2 TGF-β1誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞后Rho GDIα、α-SMA和pro collagen-I蛋白表達(dá)的變化
    2.3 大鼠矽肺纖維化形成發(fā)展過(guò)程中肺組織內(nèi)RhoGDIα、α-SMA和pro collagen-I蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]貼壁細(xì)胞在載玻片爬片的新方法[J]. 徐洪,宋旭東,李瑩,代健.  中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2009(02)



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