本文關(guān)鍵詞：嬰幼兒食品中嘔吐型蠟樣芽孢桿菌的鑒別與多位點序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus,簡稱Bc)是一種在自然環(huán)境中廣泛存在的食源性致病菌,極易造成食品污染,引起食物中毒的Bc分為嘔吐型和腹瀉型兩類,以嘔吐型危害最大,會導(dǎo)致人的嘔吐、腹瀉、頭暈、乏力等癥狀出現(xiàn),嚴(yán)重時甚至致死。本研究從市場采購了101分嬰幼兒食品,從中檢測分離出了155株蠟樣芽孢桿菌,通過PCR方法鑒別嘔吐型菌株,并對嘔吐型菌株進(jìn)行生化特征和表型研究。通過隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)(RAPD)篩選出帶型與標(biāo)準(zhǔn)株不同的嘔吐型分離株進(jìn)行ilvD序列分析,進(jìn)一步篩選嘔吐型株分離株進(jìn)行多位點序列分型(MLST),得到等位基因型和序列型ST,并對比、分析MLST數(shù)據(jù)庫中來自于五十多個國家提交的1707株蠟樣芽孢桿菌群分離株,共989個ST型別的數(shù)據(jù)信息來研究蠟樣芽孢桿菌的進(jìn)化特點和遺傳特性。101份樣品中蠟樣芽孢桿菌的檢出率為98%,從155個分離株中鑒別出43株嘔吐型菌株,嘔吐型分離株占Bc分離株總數(shù)的27.7%。Bc在嬰幼兒食品中的檢出率極高,只有少部分沒有被污染,說明我國嬰幼兒輔食存在潛在的安全隱患,特別是大量高毒力嘔吐型菌株的出現(xiàn)。RAPD和ilvD序列分析篩選出11株嘔吐型分離株進(jìn)行多位點序列分型,鑒定出9株嘔吐型菌株中常見的ST26型,并新發(fā)現(xiàn)了一種新的ST989型兩株。ST989與ST26型只有一個等位基因的差異,eburst算法上均屬于同一個group。MLST數(shù)據(jù)庫中的嘔吐型菌株分布在三個group里,且在亞洲地區(qū)檢出率較高,說明嘔吐型蠟樣芽孢桿菌在進(jìn)化上還是比較保守的。研究菌株的進(jìn)化關(guān)系和不同地域分布,可以了解其演化特點和進(jìn)化規(guī)律,預(yù)測疾病與中毒事件的爆發(fā)。
【關(guān)鍵詞】：蠟樣芽孢桿菌 食物中毒 嘔吐型 鑒別 多位點序列分型 進(jìn)化
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 前言9-17
• 1.立題依據(jù)及意義9-10
• 2.文獻(xiàn)綜述10-17
• 2.1 食源性微生物污染現(xiàn)狀10
• 2.2 蠟樣芽孢桿菌10-13
• 2.2.1 蠟樣芽孢桿菌性狀形態(tài)10-11
• 2.2.2 蠟樣芽孢桿菌污染11-12
• 2.2.3 蠟樣芽孢桿菌群12
• 2.2.4 蠟樣芽孢桿菌致病基因12-13
• 2.3 分子分型研究13-17
• 2.3.1 聚合酶鏈反應(yīng)13-14
• 2.3.2 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)14
• 2.3.3 擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分子分型14
• 2.3.4 脈沖場凝膠電泳14-15
• 2.3.5 多位點序列分型15-17
• 材料與方法17-24
• 1.實驗材料17-19
• 1.1 標(biāo)準(zhǔn)株來源與特征17
• 1.2 主要試劑17
• 1.3 培養(yǎng)基和試劑的配置17-18
• 1.4 主要儀器18-19
• 2.實驗方法19-24
• 2.1 樣品中分離和鑒定蠟樣芽孢桿菌19
• 2.1.1 采集樣品19
• 2.1.2 檢測分離蠟樣芽孢桿菌19
• 2.2 嘔吐型蠟樣芽孢桿菌的檢測與篩選19-21
• 2.2.1 PCR鑒別嘔吐型蠟樣芽孢桿菌19-20
• 2.2.2 RAPD篩選出嘔吐型菌株20-21
• 2.3 嘔吐型蠟樣芽孢桿菌多位點序列分型21-22
• 2.4 蠟樣芽孢桿菌的生理生化試驗22-24
• 2.4.1 溫度生長試驗22
• 2.4.2 淀粉水解試驗22
• 2.4.3 溶血試驗22-23
• 2.4.4 水楊苷水解23-24
• 結(jié)果與分析24-46
• 1 嬰幼兒食品樣品中蠟樣芽孢桿菌檢測與分離24-28
• 1.1 蠟樣芽孢桿菌顯微特征與菌落形態(tài)24-25
• 1.2 蠟樣芽孢桿菌檢出情況25-28
• 2 嘔吐型蠟樣芽孢桿菌鑒定與篩選結(jié)果28-31
• 2.1 PCR鑒別嘔吐型菌株28-30
• 2.2 RAPD篩選嘔吐型菌株30-31
• 3 多位點序列分型結(jié)果與分析31-43
• 3.1 MLST分型結(jié)果31
• 3.2 數(shù)據(jù)分析31-43
• 3.2.1 實驗室菌株分型結(jié)果分析31-33
• 3.2.2 MLST數(shù)據(jù)庫嘔吐型Bc分析33-38
• 3.2.3 MLST數(shù)據(jù)庫韋氏芽孢桿菌分布情況分析38-40
• 3.2.4 MLST數(shù)據(jù)庫Bc group分布情況分析40-43
• 4 生理生化試驗結(jié)果43-46
• 結(jié)論與討論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：嬰幼兒食品中嘔吐型蠟樣芽孢桿菌的鑒別與多位點序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：317795