本文關(guān)鍵詞：豬骨骼肌肌球蛋白輕鏈激酶（skMLCK）基因CDS序列測(cè)定及在C2C12細(xì)胞中表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 為測(cè)定獲得豬骨骼肌肌球蛋白輕鏈激酶（skeletal muscle Myosin Light ChainKinase,skMLCK）基因的CDS序列，并構(gòu)建豬skMLCK基因的真核表達(dá)載體，豬skMLCK基因在C2C12細(xì)胞中表達(dá)后，探索其在肌纖維生長(zhǎng)發(fā)育中的作用和對(duì)豬肉性狀的影響。 方法 參考NCBI上的信息，通過(guò)多種生物學(xué)軟件分析，分2段進(jìn)行豬skMLCK基因的全長(zhǎng)CDS序列克隆、拼接、測(cè)序、合成。構(gòu)建豬skMLCK基因的真核表達(dá)載體，利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的外源基因轉(zhuǎn)移技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)和篩選，獲得穩(wěn)定表達(dá)豬skMLCK的細(xì)胞株。通過(guò)熒光顯微鏡，檢測(cè)豬skMLCK基因在C2C12細(xì)胞中表達(dá)。利用Real-Time PCR技術(shù)，檢測(cè)有關(guān)基因的mRNA表達(dá)。 結(jié)果 獲得了全長(zhǎng)1851bp的豬skMLCK基因的CDS序列。獲得了豬skMLCK基因的真核表達(dá)載體pEGFP-N1-skMLCK。成功篩選出表達(dá)豬skMLCK的C2C12穩(wěn)定細(xì)胞株。skMLCK基因和MHC2B基因mRNA表達(dá)上調(diào)，CFL2b和MEF2C基因mRNA表達(dá)下調(diào)。skMLCK-CFL2b基因mRNA表達(dá)的關(guān)系為極顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)；skMLCK-MHC2B基因mRNA表達(dá)的關(guān)系為極顯著正相關(guān)(P＜0.01)；skMLCK-MEF2C基因的mRNA表達(dá)關(guān)系為極顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。 結(jié)論 豬skMLCK基因的表達(dá)，明顯地影響了MHC2B、CFL2b、MEF2C基因的mRNA表達(dá)。豬skMLCK基因的表達(dá)與肌纖維的生長(zhǎng)發(fā)育有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究豬skMLCK基因在肌纖維生長(zhǎng)發(fā)育中的作用奠定基礎(chǔ)，，為通過(guò)基因水平來(lái)改善與評(píng)價(jià)豬肉質(zhì)性狀提出了一個(gè)新方向。
【關(guān)鍵詞】：豬 skMLCK CDS 測(cè)序 細(xì)胞表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R155.5
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語(yǔ)表8-9
• 前言9-10
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法10-14
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果14-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-32
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 綜述35-41
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 在學(xué)期間科研成績(jī)41-42
• 致謝42-43
• 個(gè)人簡(jiǎn)介43-44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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  本文關(guān)鍵詞：豬骨骼肌肌球蛋白輕鏈激酶（skMLCK）基因CDS序列測(cè)定及在C2C12細(xì)胞中表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：317293