發(fā)布時間：2021-04-30 04:16

　　【研究目的】觀察染矽塵大鼠矽肺發(fā)生不同時期肺組織自噬水平的變化,探討自噬在矽肺發(fā)生中的作用及其機制�！狙芯糠椒ā客ㄟ^建立矽肺大鼠模型,觀察自噬在矽肺發(fā)生不同時間點的變化。SPF級Wistar雄性大鼠72只,8周齡,被隨機分為矽肺模型組和溶劑對照組。模型組大鼠采用非暴露式氣管滴注法一次性給予SiO₂懸浮液建立矽肺模型,溶劑對照組大鼠給予等量0.9%的Nacl溶液。每天觀察大鼠一般情況并記錄體重。于造模后1、7、14、21、28、60天各處死6只大鼠,取肺組織,稱量肺濕重,計算肺臟器系數(shù);通過HE和Masson染色觀察肺組織病理變化和纖維化程度;利用酶聯(lián)免疫吸附（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法檢測肺組織勻漿中轉化生長因子β（TGF-β）、白介素1（IL-1）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的水平;利用Western blot法檢測肺組織中自噬相關蛋白微管相關蛋白1輕鏈3（Microtubules associated protein 1 light chain 3,LC3）和酵母自噬相關基因6（Beclin1）的表達水... 

【文章來源】：濟南大學山東省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
研究生導師及課題指導小組成員簡介
摘要
Abstract
主要符號表
前言
第一部分 染矽塵大鼠不同時期肺組織纖維化及自噬相關蛋白的變化
    1.1 實驗材料
        1.1.1 主要儀器及材料
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要試劑配制
        1.1.4 實驗動物
    1.2 實驗方法
        1.2.1 動物分組及造模方法
        1.2.2 大鼠肺組織樣品的采集及處理
        1.2.3 大鼠一般情況和肺組織系數(shù)
        1.2.4 大鼠肺組織病理學檢查
        1.2.5 大鼠肺組織勻漿中TNF-α、IL-1 含量測定
        1.2.6 大鼠肺組織勻漿中TGF-β含量測定
        1.2.7 BCA蛋白濃度測定法測定肺組織蛋白濃度
        1.2.8 大鼠肺組織LC3、Beclin1 蛋白檢測
        1.2.9 透射電鏡觀察大鼠肺組織自噬體
        1.2.10 統(tǒng)計學分析
    1.3 結果
        1.3.1 兩組大鼠一般情況和體重
        1.3.2 兩組大鼠肺臟濕重及臟器系數(shù)
        1.3.3 兩組大鼠肺臟大體解剖觀察結果
        1.3.4 兩組大鼠肺組織HE染色觀察結果
        1.3.5 兩組大鼠肺組織Masson染色觀察結果
        1.3.6 兩組大鼠肺組織勻漿中IL-1 含量的比較
        1.3.7 兩組大鼠肺組織勻漿中TNF-α含量的比較
        1.3.8 兩組大鼠肺組織勻漿中TGF-β含量的比較
        1.3.9 兩組大鼠肺組織自噬相關蛋白LC3和Beclin1 表達水平的比較
        1.3.10 兩組大鼠肺組織透射電鏡觀察結果
    1.4 小結
第二部分 細胞自噬在矽肺肺纖維化發(fā)生中的作用及機制研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 實驗動物
        2.1.5 實驗細胞
    2.2 實驗方法
        2.2.1 動物分組及造模方法
        2.2.2 大鼠肺組織樣品的采集及處理
        2.2.3 大鼠一般情況和肺組織系數(shù)
        2.2.4 大鼠肺組織病理學檢查
        2.2.5 大鼠肺組織勻漿中TNF-α、IL-1 含量測定
        2.2.6 大鼠肺組織勻漿中TGF-β含量測定
        2.2.7 BCA蛋白濃度測定法測定肺組織蛋白濃度
        2.2.8 大鼠肺組織LC3、Beclin1、α-SMA、Vimentin蛋白檢測
        2.2.9 A549 細胞和THP-1 細胞共培養(yǎng)體系的分組及染毒方法
        2.2.10 A549 細胞和巨噬細胞存活率測定
        2.2.11 巨噬細胞LC3、Beclin1和P62 蛋白檢測
        2.2.12 巨噬細胞上清液中TGF-β含量測定
        2.2.13 A549 細胞α-SMA、Vimentin、E-cad蛋白檢測
        2.2.14 統(tǒng)計學分析
    2.3 結果
        2.3.1 利用Rapa和3-MA調控自噬后對染矽塵大鼠肺組織纖維化的影響
        2.3.2 體外細胞觀察自噬對A549 細胞EMT的影響
    2.4 小結
討論
結論
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3168822