發(fā)布時間：2021-04-15 05:33

　　目的:（1）利用體外原代培養(yǎng)的細胞,研究鎘對星形膠質(zhì)細胞的毒性作用;（2）探討JNK/MAPK信號通路是否參與了鎘誘導的星形膠質(zhì)細胞死亡過程。方法:（1）小鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng):取新生24 h內(nèi)（Institute of Cancer Research,ICR）小鼠大腦皮質(zhì),體外培養(yǎng)至9¹4天,采用膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫細胞化學法鑒定星形膠質(zhì)細胞;（2）以0、5、10、20、40μmol/L鎘染毒0、3、6、9、12、24 h,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;采用c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）特異性抑制劑SP600125（終濃度50μmol/L）預處理細胞45 min,給予鎘染毒0、3、6、9、12、24 h,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;（3）以0、5、10、20、40μmol/L鎘染毒9、12 h,MTT法測定氯化鎘對星形膠質(zhì)細胞的毒性作用;Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術檢測細胞凋亡率;（4）以0、5、10、... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代ulturedfor48培養(yǎng)細胞5d8h（250×）

核呈胞數(shù)呈空泡狀，數(shù)達 95%，圖 1 原FigFig不著色（圖說明星形膠原代培養(yǎng)細胞g.1 Cerebralg.2 Cerebral圖 6）；陰性膠質(zhì)細胞體胞 48 h（250cortical cellsl cortical cell性對照組細體外原代培養(yǎng)0×）s primary culs primary cu細胞不著色，養(yǎng)成功，可圖 2 原代ultured for 48ultured for 5，經(jīng)計數(shù)，可用于后續(xù)實培養(yǎng)細胞 5 d8 h（250×）days（250×GFAP 陽性實驗。（250×）×）性細

交織成網(wǎng)狀（圖 4）；原代培養(yǎng) 21 d 以后細胞開始聚集，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，部分細胞胞體開始回縮（圖5）。3.2 GFAP 免疫細胞化學染色結(jié)果GFAP 是星形膠質(zhì)細胞特有的骨架蛋白，是成熟星形膠質(zhì)細胞的標志物。GFAP 免疫細胞化學染色，見培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞胞漿和突起被染成棕黃色，胞

【參考文獻】：
期刊論文
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[10]應用流式細胞儀檢測細胞凋亡的4種方法的比較[J]. 范寧娟,項萍,段敏.  安徽農(nóng)業(yè)科學. 2014(32)

博士論文
[1]DNM1L蛋白介導的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D]. 皮會豐.第三軍醫(yī)大學 2015
[2]鎘致大鼠神經(jīng)細胞凋亡的線粒體途徑及NAC的保護作用[D]. 江辰陽.揚州大學 2014

碩士論文
[1]鎘對體外培養(yǎng)大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細胞的毒性損傷及NAC保護效應的研究[D]. 張英.揚州大學 2009



本文編號：3138738