目的采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法,建立SiO₂誘導(dǎo)的NR8383細(xì)胞染塵模型,探討miRNA-101（miR-101）對(duì)SiO₂誘導(dǎo)NR8383自噬水平的影響。方法1模型制備及分組:（1）體內(nèi)實(shí)驗(yàn):雄性SD大鼠40只,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組,每組各20只。對(duì)照組:每只大鼠氣管內(nèi)灌注1.0ml滅菌NaCl溶液,左右氣管各0.5ml;模型組:對(duì)每只大鼠氣管內(nèi)灌注1.0ml滅菌NaCl溶液與SiO₂粉塵混懸液（50mg/ml）,左右支氣管各0.5ml。兩組分別于造模后3d、7d、14d、28d分批處死留取肺組織。（2）體外實(shí)驗(yàn):生長(zhǎng)狀態(tài)良好的NR8383細(xì)胞消化后計(jì)數(shù)接種于96孔板,分為4組。對(duì)照組:NR8383完全培養(yǎng);SiO₂刺激組:NR8383+SiO₂（0.05mg/ml）;miR-101干預(yù)組:NR8383+LV-rno-mir-101α+SiO₂（0.05mg/ml）,培養(yǎng)12h后更換常規(guī)培養(yǎng)基,72h觀察感染效率。加入SiO_2<... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡觀察NR8383細(xì)胞的形態(tài)

注：A 為對(duì)照組，B 為模型組。圖 2 HE 染色觀察 NR8383 細(xì)胞的形態(tài)Fig.2 HE staining to observe the morphology of NR8383 cells1.2.3 Real time-PCR 檢測(cè)結(jié)果1）肺組織中 miR-101 檢測(cè)結(jié)果（1）Real time-PCR 反應(yīng)結(jié)果：對(duì)照組和模型組 RNA 樣本檢測(cè)后可A260/A280 比值均在 1.8~2.0 之間，說(shuō)明提取的 RNA 濃度和純度符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)求。檢測(cè)的 miR-101 基因的溶解曲線只有一個(gè)峰值，其熒光擴(kuò)增曲線均為一條滑的 S 型曲線（圖 3）。

：A 為對(duì)照組，B 為模型組。圖 2 HE 染色觀察 NR8383 細(xì)胞的形態(tài)Fig.2 HE staining to observe the morphology of NR8383 cells Real time-PCR 檢測(cè)結(jié)果組織中 miR-101 檢測(cè)結(jié)果（1）Real time-PCR 反應(yīng)結(jié)果：對(duì)照組和模型組 RNA 樣本檢測(cè)后/A280 比值均在 1.8~2.0 之間，說(shuō)明提取的 RNA 濃度和純度符合后續(xù)實(shí)檢測(cè)的 miR-101 基因的溶解曲線只有一個(gè)峰值，其熒光擴(kuò)增曲線均為一 S 型曲線（圖 3）。A B


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