發(fā)布時間：2017-04-16 07:04

  本文關鍵詞：納米二氧化硅致HaCaT細胞毒性作用的膜蛋白質(zhì)組學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討納米二氧化硅(nm-SiO2)染毒對HaCaT細胞膜蛋白表達水平的影響,篩選納米二氧化硅毒性作用的關鍵膜蛋白和標志膜蛋白,為揭示納米二氧化硅的毒理學分子機制提供有價值的實驗數(shù)據(jù)和科學線索,為預防和治療納米二氧化硅的毒性作用提供新思路。 方法：HaCaT細胞的培養(yǎng)采用單層貼壁法培養(yǎng),使用膜蛋白提取試劑盒提取HaCaT細胞的膜蛋白,采用納升液相色譜-基質(zhì)輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(nano-LC-MALDI-TOF-MS)鑒定HaCaT細胞膜蛋白,確定該方法測定膜蛋白的有效性。隨后,用不同濃度的15-nm的納米二氧化硅(nm-SiO2)對HaCaT細胞進行染毒處理,觀察細胞活力水平和細胞形態(tài),確定蛋白質(zhì)組學實驗的染毒濃度。使用膜蛋白提取試劑盒提取染毒組和對照組的膜蛋白,用熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE)分析納米二氧化硅(nm-SiO2)暴露前后膜蛋白質(zhì)組的變化情況。最后運用生物信息學分析鑒定差異表達的膜蛋白的亞細胞定位和蛋白功能。 結(jié)果：(1)運用膜蛋白提取試劑盒提取的HaCaT細胞的膜蛋白,質(zhì)譜鑒定結(jié)果顯示,一共鑒定出15個蛋白。在swissprot數(shù)據(jù)庫中搜索這些鑒定蛋白的亞細胞定位發(fā)現(xiàn),一共有9個蛋白質(zhì)與細胞膜密切相關,占總比例的60%,遠遠高于膜蛋白在整體蛋白的比例。(2)結(jié)合前期研究基礎(IC50=23.0mg/L),運用細胞形態(tài)學分析和對染毒后HaCaT細胞活力測定的結(jié)果,在后續(xù)實驗中采用粒徑濃度10mg/L的納米二氧化硅染毒24h。(3)通過熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE)分析15-nm二氧化硅暴露前后膜蛋白質(zhì)組的差異并使用MALDI-TOF-MS鑒定出差異膜蛋白,其中一級和二級質(zhì)譜共鑒定出17個差異表達蛋白,其中6個與細胞膜密切相關。使用生物信息學的方法來分析這些鑒定蛋白的亞細胞定位和蛋白功能。 結(jié)論：(1)發(fā)展了一種有效可行的提取HaCaT細胞膜蛋白的方法,用于膜蛋白質(zhì)組學研究。(2)使用熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE)-基質(zhì)輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜分析(MALDI-TOF-MS)聯(lián)用技術成功地鑒定出差異表達膜蛋白。
【關鍵詞】：納米二氧化硅(nm-SiO_2) 人永生化表皮細胞(HaCaT) 膜蛋白質(zhì) 熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE) 基質(zhì)輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜分析MALDI-TOF-MS
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 緒論8-19
• 1.1 納米二氧化硅相關研究進展8-10
• 1.1.1 納米材料的生物毒性效應8
• 1.1.2 納米二氧化硅在農(nóng)業(yè)以及食品中的應用8-9
• 1.1.3 納米二氧化硅毒性影響的研究現(xiàn)狀9-10
• 1.2 膜蛋白的研究現(xiàn)狀10-12
• 1.2.1 膜蛋白的基本結(jié)構(gòu)10-11
• 1.2.2 膜蛋白的分類11-12
• 1.3 (膜)蛋白組學在毒理學的研究現(xiàn)狀12-16
• 1.3.1 毒理蛋白質(zhì)組學技術12-14
• 1.3.2 毒理蛋白質(zhì)組學技術的應用14-16
• 1.3.3 膜蛋白質(zhì)組學技術在毒理學中的應用16
• 1.4 研究目的和內(nèi)容16-19
• 1.4.1 研究目的16-17
• 1.4.2 研究內(nèi)容17-19
• 第二章 HaCaT細胞的培養(yǎng)和納米二氧化硅染毒濃度的確定19-24
• 2.1 材料與方法19-21
• 2.1.1 實驗材料與儀器19
• 2.1.2 實驗方法19-21
• 2.2 結(jié)果與分析21-22
• 2.2.1 HaCaT培養(yǎng)條件的確定21
• 2.2.2 最佳染毒濃度的確定21-22
• 2.2.3 染毒后細胞活力測定結(jié)果22
• 2.3 結(jié)論與討論22-24
• 第三章 膜蛋白的提取以及采用液質(zhì)聯(lián)用技術鑒定膜蛋白24-30
• 3.1 材料與方法24-27
• 3.1.1 實驗材料與儀器24
• 3.1.2 實驗方法24-27
• 3.2 結(jié)果與分析27-29
• 3.2.1 膜蛋白的鑒定27-28
• 3.2.2 分子功能和生物學進程的歸類28-29
• 3.3 結(jié)論與討論29-30
• 第四章 納米二氧化硅致HaCaT細胞膜蛋白質(zhì)組學分析30-45
• 4.1 材料與方法30-41
• 4.1.1 實驗材料與儀器30-32
• 4.1.2 實驗方法32-41
• 4.2 結(jié)果與分析41-44
• 4.2.1 雙向凝膠電泳預實驗結(jié)果41-42
• 4.2.2 熒光差異雙向凝膠電泳分析結(jié)果42-44
• 4.2.3 雙向凝膠電泳考馬斯亮藍染色結(jié)果44
• 4.3 結(jié)論與討論44-45
• 第五章 質(zhì)譜鑒定差異膜蛋白并分析其亞細胞定位和功能45-51
• 5.1 材料與方法45-47
• 5.1.1 實驗材料與儀器45
• 5.1.2 實驗方法45-47
• 5.2 結(jié)果與分析47-49
• 5.2.1 膜蛋白的鑒定47-48
• 5.2.2 分子功能和生物進程的歸類48-49
• 5.3 結(jié)論與討論49-51
• 第六章 全文討論與總結(jié)51-53
• 第七章 創(chuàng)新點53-54
• 參考文獻54-60
• 附錄60-73
• 致謝73-74
• 個人簡歷74-75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 霍玉秋,翟玉春;醇鹽水解沉淀法制備二氧化硅納米粉[J];微納電子技術;2003年09期

2 李新勇;王玉新;鞠曉東;陳永英;Quincy Teng;;量子限域納米半導體上低碳烷烴的光助催化氧化[J];渤海大學學報(自然科學版);2006年01期

3 劉萍;李新勇;方寧;;TiO_2納米管的改性及光助催化性能研究[J];渤海大學學報(自然科學版);2006年03期

4 洪文旭;楊細飛;張兵;龔春梅;黃新鳳;劉建軍;莊志雄;;不同粒徑二氧化硅致人永生化表皮細胞氧化應激相關指標改變的比較[J];環(huán)境與健康雜志;2011年12期

5 吳金橋,王玉琨;納米材料的液相制備技術及其進展[J];西安石油學院學報(自然科學版);2002年03期

  本文關鍵詞：納米二氧化硅致HaCaT細胞毒性作用的膜蛋白質(zhì)組學研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：310254