本文關(guān)鍵詞：納米二氧化硅致HaCaT細(xì)胞毒性作用的膜蛋白質(zhì)組學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討納米二氧化硅(nm-SiO2)染毒對(duì)HaCaT細(xì)胞膜蛋白表達(dá)水平的影響,篩選納米二氧化硅毒性作用的關(guān)鍵膜蛋白和標(biāo)志膜蛋白,為揭示納米二氧化硅的毒理學(xué)分子機(jī)制提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)線(xiàn)索,為預(yù)防和治療納米二氧化硅的毒性作用提供新思路。 方法：HaCaT細(xì)胞的培養(yǎng)采用單層貼壁法培養(yǎng),使用膜蛋白提取試劑盒提取HaCaT細(xì)胞的膜蛋白,采用納升液相色譜-基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(nano-LC-MALDI-TOF-MS)鑒定HaCaT細(xì)胞膜蛋白,確定該方法測(cè)定膜蛋白的有效性。隨后,用不同濃度的15-nm的納米二氧化硅(nm-SiO2)對(duì)HaCaT細(xì)胞進(jìn)行染毒處理,觀察細(xì)胞活力水平和細(xì)胞形態(tài),確定蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)的染毒濃度。使用膜蛋白提取試劑盒提取染毒組和對(duì)照組的膜蛋白,用熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE)分析納米二氧化硅(nm-SiO2)暴露前后膜蛋白質(zhì)組的變化情況。最后運(yùn)用生物信息學(xué)分析鑒定差異表達(dá)的膜蛋白的亞細(xì)胞定位和蛋白功能。 結(jié)果：(1)運(yùn)用膜蛋白提取試劑盒提取的HaCaT細(xì)胞的膜蛋白,質(zhì)譜鑒定結(jié)果顯示,一共鑒定出15個(gè)蛋白。在swissprot數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索這些鑒定蛋白的亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn),一共有9個(gè)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜密切相關(guān),占總比例的60%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于膜蛋白在整體蛋白的比例。(2)結(jié)合前期研究基礎(chǔ)(IC50=23.0mg/L),運(yùn)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析和對(duì)染毒后HaCaT細(xì)胞活力測(cè)定的結(jié)果,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中采用粒徑濃度10mg/L的納米二氧化硅染毒24h。(3)通過(guò)熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE)分析15-nm二氧化硅暴露前后膜蛋白質(zhì)組的差異并使用MALDI-TOF-MS鑒定出差異膜蛋白,其中一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜共鑒定出17個(gè)差異表達(dá)蛋白,其中6個(gè)與細(xì)胞膜密切相關(guān)。使用生物信息學(xué)的方法來(lái)分析這些鑒定蛋白的亞細(xì)胞定位和蛋白功能。 結(jié)論：(1)發(fā)展了一種有效可行的提取HaCaT細(xì)胞膜蛋白的方法,用于膜蛋白質(zhì)組學(xué)研究。(2)使用熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE)-基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜分析(MALDI-TOF-MS)聯(lián)用技術(shù)成功地鑒定出差異表達(dá)膜蛋白。
【關(guān)鍵詞】：納米二氧化硅(nm-SiO_2) 人永生化表皮細(xì)胞(HaCaT) 膜蛋白質(zhì) 熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE) 基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜分析MALDI-TOF-MS
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 緒論8-19
• 1.1 納米二氧化硅相關(guān)研究進(jìn)展8-10
• 1.1.1 納米材料的生物毒性效應(yīng)8
• 1.1.2 納米二氧化硅在農(nóng)業(yè)以及食品中的應(yīng)用8-9
• 1.1.3 納米二氧化硅毒性影響的研究現(xiàn)狀9-10
• 1.2 膜蛋白的研究現(xiàn)狀10-12
• 1.2.1 膜蛋白的基本結(jié)構(gòu)10-11
• 1.2.2 膜蛋白的分類(lèi)11-12
• 1.3 (膜)蛋白組學(xué)在毒理學(xué)的研究現(xiàn)狀12-16
• 1.3.1 毒理蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)12-14
• 1.3.2 毒理蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用14-16
• 1.3.3 膜蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用16
• 1.4 研究目的和內(nèi)容16-19
• 1.4.1 研究目的16-17
• 1.4.2 研究?jī)?nèi)容17-19
• 第二章 HaCaT細(xì)胞的培養(yǎng)和納米二氧化硅染毒濃度的確定19-24
• 2.1 材料與方法19-21
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 2.2 結(jié)果與分析21-22
• 2.2.1 HaCaT培養(yǎng)條件的確定21
• 2.2.2 最佳染毒濃度的確定21-22
• 2.2.3 染毒后細(xì)胞活力測(cè)定結(jié)果22
• 2.3 結(jié)論與討論22-24
• 第三章 膜蛋白的提取以及采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定膜蛋白24-30
• 3.1 材料與方法24-27
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器24
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法24-27
• 3.2 結(jié)果與分析27-29
• 3.2.1 膜蛋白的鑒定27-28
• 3.2.2 分子功能和生物學(xué)進(jìn)程的歸類(lèi)28-29
• 3.3 結(jié)論與討論29-30
• 第四章 納米二氧化硅致HaCaT細(xì)胞膜蛋白質(zhì)組學(xué)分析30-45
• 4.1 材料與方法30-41
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器30-32
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法32-41
• 4.2 結(jié)果與分析41-44
• 4.2.1 雙向凝膠電泳預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-42
• 4.2.2 熒光差異雙向凝膠電泳分析結(jié)果42-44
• 4.2.3 雙向凝膠電泳考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果44
• 4.3 結(jié)論與討論44-45
• 第五章 質(zhì)譜鑒定差異膜蛋白并分析其亞細(xì)胞定位和功能45-51
• 5.1 材料與方法45-47
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器45
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法45-47
• 5.2 結(jié)果與分析47-49
• 5.2.1 膜蛋白的鑒定47-48
• 5.2.2 分子功能和生物進(jìn)程的歸類(lèi)48-49
• 5.3 結(jié)論與討論49-51
• 第六章 全文討論與總結(jié)51-53
• 第七章 創(chuàng)新點(diǎn)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 附錄60-73
• 致謝73-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74-75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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2 李新勇;王玉新;鞠曉東;陳永英;Quincy Teng;;量子限域納米半導(dǎo)體上低碳烷烴的光助催化氧化[J];渤海大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年01期

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5 吳金橋,王玉琨;納米材料的液相制備技術(shù)及其進(jìn)展[J];西安石油學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年03期

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本文編號(hào)：310254