發(fā)布時(shí)間：2017-04-15 05:12

  本文關(guān)鍵詞：PHF8-H3K9me2-BDNF通路在鋁致突觸可塑性損傷中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:(1)探究慢性鋁暴露經(jīng)PHF8-H3K9me2-BDNF通路對(duì)大鼠海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)的影響;(2)探討染鋁對(duì)人源性神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)中P HF8-H3K9me2-BDNF通路的影響。方法:1.動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究:1)160只雄性SD大鼠,分別染毒3、6、9、12個(gè)月,共計(jì)四批,每一批大鼠40只,并按體重隨機(jī)分為對(duì)照和72、12、2mg/kg 4個(gè)劑量組,每日經(jīng)飲水途徑建立鋁染毒模型;2)電生理學(xué)方法檢測(cè)大鼠在體海馬LTP;3)ELISA法檢測(cè)大鼠海馬PHF8酶活性;RT-PCR法測(cè)定PHF8的mRNA的表達(dá);4)Western-blot法測(cè)定PHF8、H3K9me2、BDNF的蛋白表達(dá)量。2.體外實(shí)驗(yàn)研究:1)培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞并用三氯化鋁進(jìn)行染毒,實(shí)驗(yàn)分組為分別為空白對(duì)照,1mMAl3+,2mMAl3+,4mMAl3+4個(gè)劑量組,染毒48小時(shí)后測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo);2)CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活力;ELISA法檢測(cè)細(xì)胞PHF8酶活性;RT-PCR法測(cè)定PHF8的mRNA的表達(dá);3)Western-blot方法測(cè)定PHF8、H3K9me2、BDNF的蛋白表達(dá)量。結(jié)果:1、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(1)電生理學(xué)方法檢測(cè)大鼠在體海馬LTP:染毒時(shí)間與劑量間存在交互效應(yīng)(P0.01)。各批次內(nèi)不同劑量大鼠海馬標(biāo)化的fEPSP振幅差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且隨著染毒劑量的增大,標(biāo)化的fEPSP振幅呈逐漸下降趨勢(shì)。對(duì)照、低、中劑量組內(nèi)不同批次標(biāo)化fEPSP幅度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.01),而高劑量組內(nèi)不同次標(biāo)化批次fEPSP幅度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(2)elisa法測(cè)定大鼠海馬h3k9去甲基化酶活性:染毒時(shí)間和劑量間無(wú)交互作用(p0.05),不同劑量組大鼠海馬h3k9去甲基化酶酶活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),且與對(duì)照組相比,中、高劑量酶活性分別降低了24.07%和33.62%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。在不同批次間比較,發(fā)現(xiàn)隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠海馬h3k9去甲基化酶酶活性呈逐漸下降趨勢(shì),各批次間酶活性比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),其中,與染毒3個(gè)月相比,9、12個(gè)月大鼠海馬h3k9去甲基化酶酶活性分別降低了15.77%,15.23%。(3)rt-pcr法測(cè)定phf8的基因表達(dá)情況:四個(gè)批次大鼠海馬內(nèi)phf8基因表達(dá),染毒時(shí)間與劑量間無(wú)交互效應(yīng)(f=0.833,p0.05)。phf8基因在各劑量組間和各批次間的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(4)western-blot方法測(cè)定phf8、h3k9me2、bdnf的蛋白表達(dá)情況:1)phf8表達(dá)量的改變:染毒時(shí)間和劑量間存在交互效應(yīng)(p0.05)。在四個(gè)批次內(nèi),各劑量組間phf8表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.01),且各批次內(nèi)高劑量組phf8蛋白表達(dá)量與對(duì)照組比分別下降了22.90%,28.02%,24.22%,27.14%。進(jìn)一步分析同一劑量不同批次間蛋白表達(dá)量改變,發(fā)現(xiàn)只有在高劑量組內(nèi),隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng),phf8表達(dá)量逐漸下降,且不同批次間大鼠海馬phf8表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);2)h3k9me2,bdnf表達(dá)量的改變:染毒時(shí)間和劑量間不存在交互效應(yīng)(p0.05)。分別分析染毒劑量和時(shí)間對(duì)大鼠海馬h3k9me2、bdnf表達(dá)量的影響:各劑量組蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.01),且隨著染毒劑量的增加,h3k9me2表達(dá)量增加而bdnf表達(dá)量下降。其中,中、高劑量組h3k9me2表達(dá)量與對(duì)照組相比分別增加了13.00%,27.55%;與低劑量組比分別增加了12.12%,26.26%。,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而與對(duì)照組比,中、高劑量組大鼠海馬bdnf表達(dá)量分別降低了20.88%和30.10%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);與低劑量組比,中、高劑量組大鼠海馬bdnf表達(dá)量分別降低了8.86%和17.70%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。各批次間h3k9me2、bdnf表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05,p0.01),且隨著染毒時(shí)間的增加h3k9me2表達(dá)量增加而bdnf表達(dá)量降低。其中12個(gè)月h3k9me2表達(dá)量與3、6個(gè)月相比均增加了10.34%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。而9、12個(gè)月的bdnf的表達(dá)量與3個(gè)月相比,下降了9.75%,14.63%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)2.體外實(shí)驗(yàn):(1)CCK-8細(xì)胞活力測(cè)試:各染毒組細(xì)胞活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=44.42,P0.01),與對(duì)照組比,2、4mM Al3+染毒組細(xì)胞活力分別下降了23%和32%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)ELISA法測(cè)定細(xì)胞核內(nèi)PHF8活性:各劑量組細(xì)胞H3K9去甲基化酶活性比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),酶活性隨著染毒劑量的增加而下降。高劑量組酶活性下降最為明顯,與對(duì)照、低、中劑量組相比分別下降了24.87%,24.47%、16.06%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)RT-PCR法測(cè)定PHF8基因表達(dá)量:各劑量組細(xì)胞PHF8基因表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)Western-blot法測(cè)定PHF8、H3K9me2、BDNF的蛋白表達(dá)情況:各劑量組PHF8、H3K9me2、BDNF蛋白表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。且隨著染毒劑量的增加,PHF8和BDNF表達(dá)量呈下降趨勢(shì),而H3K9me2表達(dá)量呈上升趨勢(shì)。與對(duì)照組相比,中、高劑量組PHF8表達(dá)量分別降低了11.20%,21.10%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與低劑量組比,高劑量組PHF8表達(dá)量降低了20.45%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照、低劑量組相比,高劑量組H3K9me2表達(dá)量分別增加了20.59%,14.71%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照、低劑量組相比,高劑量組BDNF表達(dá)量分別降低了20.68%,13.75%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.慢性飲水染鋁可對(duì)大鼠海馬LTP產(chǎn)生抑制作用,并且隨著鋁暴露時(shí)間的延長(zhǎng)和劑量的增加,損傷趨于加重;2.慢性飲水染鋁呈可致PHF8酶活性受到抑制且蛋白表達(dá)減少、H3K9me2蛋白表達(dá)增加、BDNF的蛋白表達(dá)減少;3.鋁可能通過PHF8-H3K9me2-BDNF通路對(duì)大鼠海馬LTP產(chǎn)生影響;4.鋁可能通過對(duì)組蛋白甲基化修飾產(chǎn)生影響,進(jìn)而引起學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白表達(dá)的改變。本課題由國(guó)家自然科學(xué)基金“組蛋白賴氨酸甲基化修飾調(diào)控鋁神經(jīng)毒性的機(jī)制研究(編號(hào):81372968)”資助
【關(guān)鍵詞】：鋁 海馬 組蛋白甲基化修飾 突觸可塑性
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表13-14
• 前言14-22
• 參考文獻(xiàn)17-22
• 第一部分 慢性鋁暴露對(duì)大鼠海馬突觸可塑性及相關(guān)蛋白的影響22-48
• 1 材料和方法22-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 1.3 統(tǒng)計(jì)方法28
• 2 結(jié)果28-43
• 2.1 慢性鋁暴露對(duì)大鼠海馬LTP的影響28-33
• 2.2 慢性鋁暴露對(duì)大鼠海馬H3K9去甲基化酶活性以及基因表達(dá)的影響33-36
• 2.3 慢性鋁暴露對(duì)PHF8，H3K9me2，BDNF蛋白表達(dá)的影響36-43
• 3 討論43-48
• 第二部分 染鋁對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活力及相關(guān)蛋白的影響48-60
• 1 材料和方法48-52
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料48
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法48-52
• 1.3 統(tǒng)計(jì)方法52
• 2 結(jié)果52-58
• 2.1 染鋁對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)和活力的影響52-53
• 2.2 染鋁對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞H3K9去甲基化酶活性以及基因表達(dá)的影響53-55
• 2.3 染鋁對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞PHF8，，H3K9me2，BDNF蛋白表達(dá)的影響55-58
• 3 討論58-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 綜述66-77
• 參考文獻(xiàn)72-77
• 致謝77-79
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果79-80
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷80

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