發(fā)布時(shí)間：2021-03-09 06:13

　　淡色庫(kù)蚊是一種分布極廣的全球性衛(wèi)生害蟲(chóng)，能夠傳播多種致命疾病。對(duì)其的防治主要是使用各類化學(xué)殺蟲(chóng)劑，這引起了殺蟲(chóng)劑抗性的產(chǎn)生和發(fā)展。淡色庫(kù)蚊抗性機(jī)理及抗性基因的研究成為熱點(diǎn)。本論文以淡色庫(kù)蚊為材料進(jìn)行了以下三方面的實(shí)驗(yàn)：1.比較使用了五種改良的方法：異硫氰酸胍法、Trizol法、Trizol+CTAB法、改良的Trizol法和CTAB法，從淡色庫(kù)蚊抗性品系中提取總RNA，通過(guò)對(duì)所提總RNA的純度、濃度、完整性以及耗用時(shí)間等方面進(jìn)行比較，并以實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法來(lái)定量比較了五種方法所提取產(chǎn)物中RNA的拷貝數(shù)，結(jié)果顯示：改良的CTAB法為淡色庫(kù)蚊總RNA提取的最優(yōu)法。2.以淡色庫(kù)蚊抗性相關(guān)的EST（EC093830.1）序列為模板，設(shè)計(jì)基因特異性引物，通過(guò)RACE的方法克隆得到了長(zhǎng)為1637bp的cDNA全長(zhǎng)序列——XN-P450。確定其開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1521bp，通過(guò)軟件對(duì)其進(jìn)行氨基酸、跨膜區(qū)、亞細(xì)胞定位、二級(jí)結(jié)構(gòu)及酶切位點(diǎn)等的預(yù)測(cè)。結(jié)果表明XN-P450編碼蛋白質(zhì)有506個(gè)氨基酸，二級(jí)結(jié)構(gòu)有53.16%的α螺旋，14.62%的β折疊及32.21%的環(huán)，含4個(gè)主要的跨膜螺旋；經(jīng)亞細(xì)胞定位... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

五種方法提取淡色庫(kù)蚊總RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)Figure2-1AgarosegelelectrophoresisoftotalRNAextractedfromCulexpipienspallensbyfivemethods

求時(shí)間比較長(zhǎng)而最耗且居中，從節(jié)時(shí)的角度表 2-3 不同提取方法耗時(shí)he time-consuming of diffeTrizol Trizol+ CTAB 1.5 2 sothiocyanate；改良：mod泳結(jié)果分析證實(shí)為庫(kù)蚊保守的基因?yàn)槟０�，加�?CYP6F1，該定量引物的目的擴(kuò)大小在 180bp 處附近，蚊中這一隨機(jī)的基因反轉(zhuǎn)錄以及擴(kuò)增成功5 4 3 2 1 M

M DNA marker 1 異硫氰酸胍 2 Trizol 3 CTAB+ Trizol 4 Trizol 改良 5 CTAB 改M DNA marker 1 Guanidine isothiocyanate 2 Trizol 3 CTAB+Trizol 4 modified Trizol 5 modified C.2.5 五種方法所提總 RNA 定量分析根據(jù)定量 PCR 儀給出的結(jié)果（圖 2-3）來(lái)看，標(biāo)準(zhǔn)曲線的 R2接近于 1，表明釋所產(chǎn)生的各梯度線性相關(guān)。定量數(shù)據(jù)顯示如表 2-4，β-actin 的表達(dá)量在五種 的表現(xiàn)并無(wú)明顯差異，保持在一個(gè)水平； CYP6F1 的表達(dá)量則存在著較大的差TAB 改良法最高、Trizol+ CTAB 法次之、接下來(lái)是比較接近的 Trizol 法和異硫氰酸rizol 改良法最低，最后能夠確定下來(lái)的是 CTAB 改良法為總 RNA 提取得率最高


本文編號(hào)：3072394