為建立一種三重DPO-PCR方法用于食品樣品中的產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌O26的檢測(cè)。以志賀毒素stx1和stx2、O抗原基因wzx O26特異性和實(shí)際檢測(cè)效果,設(shè)計(jì)引物,構(gòu)建三重DPO-PCR反應(yīng)體系,進(jìn)行特異性、靈敏度、模擬樣品驗(yàn)證和實(shí)際樣品驗(yàn)證。結(jié)果表明,三對(duì)DPO引物對(duì)退火溫度不敏感,在49～69℃之間均能發(fā)生擴(kuò)增,且引物之間干擾較小,具有較高的特異性,除目的基因外非目標(biāo)細(xì)菌均無(wú)擴(kuò)增條帶出現(xiàn),純菌靈敏度檢測(cè)表明,三重DPO-PCR方法對(duì)O26的最低檢測(cè)限為3.8×10³ cfu/g。在模擬樣品和實(shí)際樣品中具有良好的檢測(cè)效果。本研究基于DPO引物構(gòu)建的三重DPO-PCR方法具有效率高,特異性強(qiáng),不受退火溫度限制等優(yōu)點(diǎn),可用于食品樣品中產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌O26的快速準(zhǔn)確檢測(cè)提供一種高效的輔助檢測(cè)方法。 

【文章來(lái)源】：現(xiàn)代食品科技. 2020,36(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

DPO PCR擴(kuò)增結(jié)果

DPO-PCR特異性檢測(cè)

2.3 DPO-PCR退火溫度敏感性由圖3可知，DPO引物在49.0℃、49.4℃、50.4℃、52.0℃、54.2℃、57.2℃、60.8℃、63.8℃、66.0℃、67.6℃、68.6℃和69.0℃均可以擴(kuò)增出三條目的條帶stx1 308 bp、stx2 240 bp、wzx O26 472 bp，表明DPO引物的退火溫度范圍較寬，不易受溫度變化影響(圖3a)；而傳統(tǒng)PCR引物最佳的退火溫度為57.2℃，易受退火溫度變化的影響，在擴(kuò)增反應(yīng)前需要進(jìn)行退火溫度的優(yōu)化(圖3b)。

【參考文獻(xiàn)】：
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