目的:探討mTOR信號(hào)通路在錳誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元凋亡中的作用及機(jī)制,為錳致神經(jīng)損傷的防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:以大鼠多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞系（簡(jiǎn)稱“N27細(xì)胞”）、慢病毒介導(dǎo)的沉默mTOR基因的N27細(xì)胞（shRNA-mTOR）及其空白對(duì)照細(xì)胞（shRNA-GFP）為研究對(duì)象。按照MnCl₂濃度設(shè)置空白對(duì)照組及低、中高劑量組對(duì)應(yīng)濃度分別為0、200/400/800μM,對(duì)上述細(xì)胞進(jìn)行24 h錳暴露處理。染錳后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);采用CCK8法測(cè)定細(xì)胞活性;AnnexinV Alexa Fluor 647/PI凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;應(yīng)用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-Caspase-3、mTOR及下游效應(yīng)蛋白S6K1、4E-BP1、Akt、SGK1的總蛋白和磷酸化蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、CCK8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),錳對(duì)N27細(xì)胞的活性的影響呈時(shí)間、劑量效應(yīng)關(guān)系,細(xì)胞的活性隨著染錳時(shí)間和劑量的增加而下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;2、倒置顯微鏡下觀察到相應(yīng)的細(xì)胞形態(tài)變化,并隨著染錳濃度增加,細(xì)胞形態(tài)異常及死亡數(shù)量增加;3、... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

錳誘導(dǎo)N27細(xì)胞形態(tài)改變

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 岑語燕2.2 錳誘導(dǎo) N27 細(xì)胞活力下降如圖 2 所示，N27 細(xì)胞在 10 個(gè)不同的 MnCl2濃度下作用 24 h 和 48 h，染錳組細(xì)胞的活力與對(duì)照組的均有差異（P<0.05），當(dāng) MnCl2濃度為 100 μM 的時(shí)候，24 h 和 48 h 錳作用后的結(jié)果表明細(xì)胞存活率有所提高（P<0.05），但當(dāng)錳濃度和錳作用時(shí)間增加后，細(xì)胞的存活率逐漸下降，錳對(duì) N27 細(xì)胞的毒性作用呈時(shí)間-效應(yīng)和劑量-效應(yīng)關(guān)系。

17圖 3AnnexinVAlexa Fluor 647/PI 檢測(cè)不同處理組對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響Fig.3 Detect the cell apoptotic rate with AnnexinV Alexa Fluor 647/PI.xinV Alexa Fluor 647/PI 雙染細(xì)胞流式圖；B：AnnexinV Alexa Fluor 647/PI 雙染細(xì)胞流式分均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(n=3)表示，a：與對(duì)照組相比 P<0.05；b：與 200 μM 組相比 P<0.05；c：與<0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SOD類似物阻斷百草枯誘導(dǎo)的N27細(xì)胞凋亡的作用[J]. 陳平,陳震,李昂,趙春軍,吳曉康,徐雍羽,梁立平.  中國(guó)生化藥物雜志. 2008(05)



本文編號(hào)：3051297