目的:構建四環(huán)素反應元件（Tetracycline Response Element,TRE）調控的重組基因酵母細胞,用于快速檢測動物食品中四環(huán)素類抗生素的殘留。方法:1.用PCR方法從酵母DNA提取液中擴增GPD（3-磷酸甘油醛脫氫酶,Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydro-genase）基因啟動子,將其插入到酵母表達載體pYESTrp2,從而構建GPD 啟動子驅動的酵母表達載體pGPD。2.人工合成雙股V5抗原表位DNA,將其插入pGPD載體;以質粒pcDNA6/TR為模板,PCR擴增四環(huán)素阻逆蛋白（Tetracycline Repressor Protein,tetR）基因,并與pGPD載體的V5抗原表位DNA相融合,構建成GPD驅動的TR酵母表達載體,并轉化于酵母細胞W303-1A,用Western blot方法鑒定tetR基因的表達。3.人工合成四環(huán)素反應元件（Tetracycline Response Element,TRE）,將其插入pMP206酵母報告載體的CYC1啟動子與報告基因Lac Z（β-半乳糖苷酶基因）之間,構建成TRE調控的La... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 前言
第二章 四環(huán)素阻逆蛋白（TR）在酵母細胞中的表達
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果
        2.1 pcDNA6/TR鑒定
        2.2 GPD驅動的酵母表達載體
        2.3 V5抗原表位與載體連接鑒定
        2.4 抗原表位DNA與TR基因相融合鑒定
        2.5 TR酵母表達載體的轉化
        2.6 重組TR酵母細胞的PCR鑒定
        2.7 TR在酵母中的表達
第三章 四環(huán)素反應元件（TRE）調控的Lac Z報告載體的構建
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 TRE調控的Lac Z酵母報告載體
        1.3 TRE調控的Lac Z酵母報告載體轉化
        1.4 實驗研究
        1.5 資料的分析于處理
    2 結果
        2.1 pTeton-Lac Z酵母報告載體
        2.2 pyTeton-Lac Z酵母報告載體
        2.3 實驗結果
第四章 四環(huán)素調控的重組酵母細胞的建立
    1 材料與方法
        1.1 GAL 1啟動子的TA克隆
        1.2 GAL 1啟動子驅動的TRE調控的Lac Z酵母報告載體的構建
        1.3 pGAL1-Teton-Lac Z轉化于酵母細胞的鑒定
        1.4 酵母轉化子實驗篩選
        1.5 四環(huán)素調控的重組酵母細胞的實驗研究
    2 結果
        2.1 GAL 1啟動子的TA克隆
        2.2 GAL 1啟動子驅動的TRE調控的Lac Z酵母報告載體
        2.3 酵母細胞轉化子的PCR鑒定
        2.4 重組酵母的敏感性研究
        2.5 重組酵母的特異性研究
第五章 四環(huán)素調控的重組酵母對豬尿中四環(huán)素類抗生素殘留的篩檢研究
    1 材料與方法
        1.1 重組酵母對豬尿液中四環(huán)素類抗生素殘留的檢測
    2 結果
        2.1 ELISA法標準曲線
        2.2 ELISA法檢出限
        2.3 對四環(huán)素類抗生素混合物的檢測
        2.4 兩種法檢測對四環(huán)素類抗生素檢測結果的比較
第六章 討論
第七章 綜述
    1. 食品中四環(huán)素類抗生素（TCs）殘留的來源
    2. 殘留的四環(huán)素類抗生素對人類健康的危害
    3. 現代檢測食品中殘留四環(huán)素類抗生素的技術
    4. 四環(huán)素殘留的防治
    5. 研究前景的展望
參考文獻
附錄
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文情況



本文編號：3048463