目的通過不同濃度甲醇染毒SK-N-SH細(xì)胞后,檢測細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡情況、氧化應(yīng)激水平以及相關(guān)因子（Calpain2、p35、p25、CDK5、p53）的基因與蛋白表達(dá)水平,探究p25-CDK5-p53信號通路在甲醇致SK-N-SH細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制,為甲醇的神經(jīng)毒性提供一定的理論依據(jù)。方法選取體外培養(yǎng)的SK-N-SH細(xì)胞,采用不同濃度甲醇（0-2000mmol/L）分別染毒細(xì)胞24、48h,CCK-8法檢測細(xì)胞活力,確定后續(xù)甲醇染毒濃度為0、250、750、1250mmol/L（對照、低、中、高甲醇濃度組）,染毒時間為24h。染毒24h后,顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);Annexin V-FITC雙染檢測細(xì)胞凋亡;活性氧（ROS）試劑盒檢測ROS水平;RT-PCR技術(shù)檢測Calpain2、CDK5、p35、p25、p53的基因表達(dá)水平;Western blot檢測Calpain2、CDK5、p25、p35、p53及p53磷酸化蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1.甲醇染毒24、48h后,細(xì)胞活力均分別從（100.00±0.00）%下降至（16.03±0.72）、（9.66±0.37）%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度甲醇染毒SK-N-SH細(xì)胞24h、48h后細(xì)胞活力（n=3，X±S）

細(xì)胞的大小、形態(tài)、貼壁力等都具有明顯的改變。對照組（圖2-A）SK-N-SH 細(xì)胞呈不規(guī)則的三角形或梭形生長，有較長的突起，細(xì)胞之間間隙較小，連接較為緊密，為扁平的單層貼壁生長的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞；低濃度甲醇組（圖 2-B）有個別細(xì)胞變?yōu)閳A形；中濃度甲醇組（圖 2-C）部分細(xì)胞縮短變圓，形狀有些似多角形，有些細(xì)胞呈圓形，細(xì)胞間隙增大，部分細(xì)胞漂浮失去貼壁力；高濃度甲醇組（圖 2-D），細(xì)胞間隙明顯增大，細(xì)胞折光性變強(qiáng)，大部分細(xì)胞變圓，漂浮在培養(yǎng)液中，少部分細(xì)胞正常貼壁。18


本文編號：3015279