本文關(guān)鍵詞：市售肉菜產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶腸桿菌的分子流行病學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著抗生素的廣泛使用,腸桿菌耐藥成為全球面臨的突出問題。細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生使耐藥腸桿菌對(duì)目前臨床上使用的抗生素不再敏感,包括第三、四代頭孢菌素、碳青霉烯類藥物等,產(chǎn)ESBLs(Extended-spectrumβ-lactamases)和碳青霉烯酶是細(xì)菌對(duì)上述藥物產(chǎn)生耐藥性的主要機(jī)制之一,也是目前耐藥性研究的熱點(diǎn)之一。對(duì)不同來源的抗生素耐藥菌研究中,食品源研究尚不多見,本文對(duì)蔬菜源及雞肉源大腸桿菌耐藥性及其ESBLs和碳青霉烯酶基因的分子流行病學(xué)進(jìn)行初步研究,以了解蔬菜及動(dòng)物食品中耐藥腸桿菌的流行情況,為防止耐藥基因的傳播提供依據(jù)。2014~2015年,從廣州各大市場以及超市隨機(jī)采集了395份蔬菜樣品和200份雞肉樣品,分離得到60株大腸桿菌(蔬菜)和134株大腸桿菌(雞肉)。另外,從395份蔬菜樣品中用選擇性平板篩選出33株產(chǎn)ESBLs腸桿菌,包括12株大腸桿菌、19株肺炎克雷伯菌、1株陰溝腸桿菌和1株弗氏檸檬酸桿菌。用瓊脂稀釋法對(duì)隨機(jī)分離得到的大腸桿菌進(jìn)行藥物敏感性檢測,結(jié)果顯示肉源大腸桿菌對(duì)各種藥物的耐藥情況比蔬菜源更嚴(yán)重。33株蔬菜源產(chǎn)ESBLs腸桿菌對(duì)氨芐西林和頭孢噻肟全部耐藥,對(duì)頭孢喹肟、四環(huán)素、磷霉素、多西環(huán)素、喹乙醇、復(fù)方新諾明的耐藥率均超過50%,對(duì)亞胺培南全部敏感。33株蔬菜源產(chǎn)ESBLs腸桿菌共檢測到7種不同亞型的CTX-M基因,分別是bla~(CTX-M)-3、bla~(CTX-M)-15、bla~(CTX-M)-55、bla CTX-M-14、bla CTX-M-24、bla CTX-M-38和bla CTX-M-65,檢出率最高的是bla CTX-M-15(n=10),其次是bla~(CTX-M)-55(n=7)。不同蔬菜中bla~(CTX-M)基因的檢出率分別為黃瓜10.4%(12/115)、番茄3.3%(3/90)、生菜13.0%(13/100)和胡蘿卜5.7%(5/90)。從生菜樣品中檢測到一株產(chǎn)KPC-2的大腸桿菌TS79,多序列位點(diǎn)分型結(jié)果為ST877型。該基因位于一個(gè)大小約54kb的質(zhì)粒上,復(fù)制子分型未成功。藥物敏感性結(jié)果顯示TS79對(duì)黏菌素和替加環(huán)素敏感,對(duì)其他藥物全部耐藥。另外從超市生鮮雞肉中分離到的一株亞胺培南耐藥大腸桿菌THSJ02,多序列位點(diǎn)分型結(jié)果為ST167型,除對(duì)多西環(huán)素和替加環(huán)素敏感以外,對(duì)其余藥物全部耐藥,PCR結(jié)果顯示該菌攜帶mcr-1、blaNDM-9、flo R、fos A3、rmt B和bla~(CTX-M)-65基因。經(jīng)接合試驗(yàn)、S1-PFGE和southern雜交證實(shí)mcr-1基因位于Inc I2型質(zhì)粒上,rmt B,bla~(CTX-M)-65和fos A3基因位于F33:A :B 質(zhì)粒上,而blaNDM-9和另一個(gè)fos A3基因位于一個(gè)約100kb的未知質(zhì)粒上。本研究結(jié)果表明蔬菜和動(dòng)物性食品中存在耐藥腸桿菌,蔬菜源產(chǎn)ESBLs腸桿菌中以產(chǎn)CTX-M-15和CTX-M-55居多,且存在多重耐藥現(xiàn)象。這是首次在蔬菜中檢出對(duì)大部分抗生素耐藥的產(chǎn)KPC酶的大腸桿菌及在雞肉中檢出同時(shí)攜帶blaNDM-9和mcr-1基因的大腸桿菌。因此,我們應(yīng)當(dāng)重視食品安全隱患,避免其成為耐藥基因傳播的途徑,以保障人類健康。
【關(guān)鍵詞】：食品源 腸桿菌 ESBLs 碳青霉烯酶 bla~(CTX-M)
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R155.5
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-6
• 英文縮寫對(duì)照表6-9
• 1 前言9-14
• 2 材料與方法14-36
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 樣品來源14
• 2.1.2 菌株及載體14
• 2.1.3 抗菌藥物及藥敏紙片14-15
• 2.1.4 培養(yǎng)基及其配制15-16
• 2.1.5 試劑16
• 2.1.6 主要儀器設(shè)備16-17
• 2.1.7 主要試劑的配制17-19
• 2.2 方法19-36
• 2.2.1 細(xì)菌的分離鑒定與保存19-21
• 2.2.2 耐藥基因的PCR檢測及其他相關(guān)基因檢測21-24
• 2.2.3 瓊脂稀釋法敏感性試驗(yàn)24-25
• 2.2.4 大腸桿菌MLST分析25-27
• 2.2.5 接合試驗(yàn)及陽性接合子復(fù)制子分型27-30
• 2.2.6 大腸桿菌接合子 S1-PFGE 分析30-33
• 2.2.7 Southern雜交33-36
• 3 結(jié)果與分析36-45
• 3.1 腸桿菌的分離與鑒定36-39
• 3.1.1 大腸桿菌的分離36
• 3.1.2 產(chǎn)CTX-M腸桿菌分離鑒定36-39
• 3.2 藥物敏感性試驗(yàn)39-41
• 3.2.1 隨機(jī)分離大腸桿菌藥敏試驗(yàn)39-40
• 3.2.2 腸桿菌藥敏試驗(yàn)40-41
• 3.3 肉菜產(chǎn)KPC、NDM酶大腸桿菌的分子特性41-45
• 4 討論45-49
• 4.1 雞肉和蔬菜源大腸桿菌藥物敏感性比較45
• 4.2 蔬菜源產(chǎn)ESBL腸桿菌流行情況45-46
• 4.3 產(chǎn)碳青霉烯酶大腸桿菌分子特性46-49
• 5 結(jié)論49-50
• 致謝50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 附錄58

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