研究目的：研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路在氯化鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞增殖的毒物興奮效應(yīng)中的作用，探討氯化鎘所致細(xì)胞增殖興奮效應(yīng)的機(jī)制，為進(jìn)一步理解毒物興奮效應(yīng)及其安全性提供參考。研究方法與研究內(nèi)容：1.針對(duì)β-catenin基因序列設(shè)計(jì)并合成三對(duì)shRNA，構(gòu)建shRNA質(zhì)粒載體，干擾HEK293細(xì)胞β-catenin基因mRNA表達(dá)，阻斷細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路。2. CCK-8法檢測不同劑量氯化鎘對(duì)HEK293細(xì)胞增殖的影響，建立氯化鎘所致HEK293細(xì)胞增殖興奮效應(yīng)模型，并確定毒物興奮效應(yīng)劑量范圍（Hormetic Zone）。3. CCK-8法檢測不同劑量氯化鎘對(duì)β-catenin基因干擾HEK293細(xì)胞增殖的影響，探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路在氯化鎘所致細(xì)胞增殖興奮效應(yīng)中的作用。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測不同劑量氯化鎘作用于HEK293細(xì)胞與β-catenin基因干擾HEK293細(xì)胞24h后Cyclin D1、c-myc基因的表達(dá)水平。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測不同劑量氯化鎘作用于HEK293細(xì)胞與β-catenin基因干擾的HEK293細(xì)胞24h后... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

1劑量-反應(yīng)關(guān)系模型

/LEF）家族轉(zhuǎn)錄因子形成轉(zhuǎn)錄（圖 1.2.1.A），最后形成 β-catenin激活下游 c-myc、Cyclin、surivin、c-jun、c-fos、twist 等目的基0]。正常機(jī)體中 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路是處于靜默狀態(tài)的，但 Wnt 信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)使 β-catenin 的降解受抑制，導(dǎo)致 β-catenin 。β-catenin 細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平高低決定著 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路 GSK-3β、Axin 以及 APC 蛋白的調(diào)控，這些蛋白的主要作用是促 β-catenin 在細(xì)胞內(nèi)保持低水平，從而關(guān)閉 Wnt 通路[21]。

圖1.3.1 RNA干擾作用機(jī)制關(guān)鍵，要進(jìn)行 RNAi 首先需要獲得目的基因。理論上按照目的基因 cDNA 為模版的 si互補(bǔ)結(jié)合，誘導(dǎo)目的基因 mRNA 降解。但區(qū)域設(shè)計(jì)的 siRNA 才能獲得較高的基因干擾A 干擾序列設(shè)計(jì)的 AA 原則：1.選擇在目的 100nt 以后的序列；2.盡量避開 5’和 3’UTR的區(qū)域；3.G/C 含量比在 40%~60%之間，免連續(xù) 4 個(gè)及以上的堿基重復(fù)，所有堿基應(yīng)序列，避開單核苷酸多肽性（SNP）位點(diǎn)行同源性分析，確保設(shè)計(jì)的干擾序列與其他

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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