目的:本論文就Nrf2/ARE信號(hào)通路在nm-Si O2毒性中的作用及其影響進(jìn)行了研究。從細(xì)胞和動(dòng)物水平,探討了nm-Si O2暴露誘導(dǎo)的氧化損傷、Nrf2/ARE信號(hào)通路對(duì)nm-Si O2毒效應(yīng)的防御作用及其機(jī)制,為nm-Si O2的人群暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供數(shù)據(jù),并對(duì)nm-Si O2的毒性機(jī)制進(jìn)行了初步探索。方法:nm-Si O2（10-20nm）和μm-Si O2（1-5μm）經(jīng)表征后,①分別用不同濃度的nm-Si O2和μm-Si O2暴露A549細(xì)胞,檢測(cè)其細(xì)胞活力,確定IC50;再用濃度15μg/ml的nm-Si O2和μm-Si O2分別暴露A549細(xì)胞,觀察其形態(tài)學(xué)變化,并檢測(cè)其細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞膜電位、SOD活性、ROS含量及Nrf2/ARE信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。②構(gòu)建A549-sh Nrf2細(xì)胞模型并作為實(shí)驗(yàn)組,A549和A549-sh RNA細(xì)胞作為空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組,分別用濃度為15μg/ml的nm-Si O2暴露,檢測(cè)其細(xì)胞活力、SOD活性、ROS含量、T-AOC及Nrf2/ARE信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。③選取ICR小鼠和Nrf2-/-ICR小鼠,分別作... 

【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：117 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 納米材料及納米二氧化硅概述
    1.2 納米材料與納米二氧化硅毒性及流行病學(xué)研究現(xiàn)狀
    1.3 Nrf2/ARE信號(hào)通路概述
    1.4 本研究的目的意義
    1.5 本研究的實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)路線
第二章 納米二氧化硅暴露致A549細(xì)胞毒性及Nrf2/ARE信號(hào)通路轉(zhuǎn)運(yùn)激活分析
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 受試細(xì)胞
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 納米二氧化硅（10-20nm）和微米二氧化硅（1-5μm）的表征
        2.2.2 A549細(xì)胞培養(yǎng)及處理
        2.2.3 A549細(xì)胞活力分析
        2.2.4 A549細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.2.5 A549細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.6 超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)
        2.2.7 活性氧（ROS）檢測(cè)
        2.2.8 細(xì)胞膜電位檢測(cè)
        2.2.9 PERK、Nrf2蛋白表達(dá)檢測(cè)
        2.2.10 HO-1 蛋白表達(dá)檢測(cè)
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 納米二氧化硅（10-20nm）和微米二氧化硅（1-5μm）的表征
        2.4.2 納米二氧化硅暴露對(duì)A549細(xì)胞生物學(xué)性狀分析
        2.4.3 納米二氧化硅暴露對(duì)A549細(xì)胞周期的影響
        2.4.4 納米二氧化硅暴露對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響
        2.4.5 納米二氧化硅暴露對(duì)A549細(xì)胞SOD活性的影響
        2.4.6 納米二氧化硅暴露對(duì)A549細(xì)胞ROS的影響
        2.4.7 納米二氧化硅暴露對(duì)A549細(xì)胞膜電位的影響
        2.4.8 納米二氧化硅暴露對(duì)A549細(xì)胞Nrf2/ARE信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 納米二氧化硅暴露致A549-shNrf2細(xì)胞生物學(xué)性狀變化研究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 受試細(xì)胞
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 A549-shNrf2細(xì)胞系的建立
        3.2.2 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞活力檢測(cè)
        3.2.3 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)
        3.2.4 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞活性氧（ROS）檢測(cè)
        3.2.5 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞T-AOC檢測(cè)
        3.2.6 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞PERK、Nrf2蛋白檢測(cè)
        3.2.7 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞HO-1 蛋白含量檢測(cè)
    3.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 A549 Nrf2低表達(dá)細(xì)胞系構(gòu)建及鑒定
        3.4.2 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞活力檢測(cè)
        3.4.3 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)
        3.4.4 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞活性氧（ROS）檢測(cè)
        3.4.5 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞T-AOC檢測(cè)
        3.4.6 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)PERK、Nrf2蛋白檢測(cè)
        3.4.7 納米二氧化硅暴露對(duì)A549-shNrf2細(xì)胞HO-1 蛋白含量檢測(cè)
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 納米二氧化硅暴露于Nrf2-/-小鼠氧化損傷及Nrf2/ARE信號(hào)通路表達(dá)分析
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 受試動(dòng)物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器
        4.1.5 試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 Nrf2基因敲除小鼠的鑒定
        4.2.2 納米二氧化硅暴露處理
        4.2.3 肺系數(shù)、肝系數(shù)、腎系數(shù)的測(cè)定
        4.2.4 肺組織石蠟切片病理學(xué)觀察
        4.2.5 肺部納米二氧化硅粒子的亞細(xì)胞定位檢測(cè)
        4.2.6 小鼠肺組織ROS含量分析
        4.2.7 小鼠肺組織T-AOC測(cè)定
        4.2.8 小鼠肺組織 8-OHdG測(cè)定
        4.2.9 小鼠肺組織PERK、Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)的變化分析
    4.3 統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 Nrf2基因敲除小鼠的鑒定
        4.4.2 肺部納米二氧化硅粒子的亞細(xì)胞定位檢測(cè)
        4.4.3 小鼠體重及肺系數(shù)、肝系數(shù)、腎系數(shù)的測(cè)定
        4.4.4 肺組織石蠟切片病理學(xué)觀察
        4.4.5 小鼠肺組織ROS含量分析
        4.4.6 小鼠肺組織T-AOC測(cè)定
        4.4.7 小鼠肺組織 8-OHdG測(cè)定
        4.4.8 肺組織PERK、Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)的變化分析
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第五章 課題結(jié)論及展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 縮略詞注釋表
附錄Ⅱ 攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]納米二氧化鈦對(duì)大鼠氧化應(yīng)激水平及海馬組織結(jié)構(gòu)的影響[J]. 王文斌,李倉(cāng)廩,安麗紅,張鳳梅,辛菲,趙慧男,馮德達(dá),李杰,李國(guó)珍.  環(huán)境與健康雜志. 2013(12)
[2]影響納米材料毒性的關(guān)鍵因素[J]. 徐鶯鶯,林曉影,陳春英.  科學(xué)通報(bào). 2013(24)
[3]碳納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用現(xiàn)狀及展望[J]. 張金超,楊康寧,張海松,梁興杰.  化學(xué)進(jìn)展. 2013(Z1)
[4]納米二氧化硅體內(nèi)與體外氧化應(yīng)激及細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)研究[J]. 史宏博,王尊,于宏升,劉魁,岳霞,鄭茹茹,鄒寶波,趙進(jìn)順.  寧波大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版). 2013(01)
[5]炎癥和炎性微環(huán)境在肺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用[J]. 陳賜慧,花寶金.  醫(yī)學(xué)綜述. 2012(23)
[6]納米二氧化硅影響人肺癌細(xì)胞的定量糖蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J]. 胡爭(zhēng)艷,孫珍,張軼,吳仁安,鄒漢法.  化學(xué)學(xué)報(bào). 2012(19)
[7]云南省宣威地區(qū)煙煤燃燒后的底灰對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的體外毒性作用[J]. 李光劍,王霽陽(yáng),黃云超,周永春,楊堃,陳穎,趙光強(qiáng),雷玉潔.  廣東醫(yī)學(xué). 2012(19)
[8]Au nanostructures:an emerging prospect in cancer theranostics[J]. NIE Xin & CHEN ChunYing * CAS Key Laboratory for Biomedical Effects of Nanomaterials and Nanosafety, National Center for Nanoscience and Technology of China, Beijing 100190, China.  Science China（Life Sciences）. 2012(10)
[9]不同粒徑二氧化硅致人永生化表皮細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)水平改變[J]. 洪文旭,楊細(xì)飛,張兵,龔春梅,黃新鳳,劉建軍,莊志雄.  中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué). 2012(04)
[10]不同粒徑二氧化硅對(duì)人永生化表皮細(xì)胞抗氧化酶基因mRNA表達(dá)水平的影響[J]. 洪文旭,楊細(xì)飛,張兵,龔春梅,莊志雄,劉建軍.  中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志. 2012(03)

博士論文
[1]我國(guó)納米材料產(chǎn)業(yè)化機(jī)制研究[D]. 許華勝.同濟(jì)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]納米二氧化硅對(duì)Sprague-Dawley雄性大鼠生殖毒性研究[D]. 黃遂.湖南師范大學(xué) 2013



本文編號(hào)：2957141