有機致癌物自身通常缺乏生物反應性,需要經過代謝活化才具有致突變和致癌性�；瘜W物的致突變性篩查通常采用體外細胞遺傳毒理學試驗,然而,由于常規(guī)細胞缺少生物轉化酶活性,易致假陰性結果。采用體外代謝活化系統(tǒng)（如大鼠肝臟S9混合物）可增加致突變物的檢出率。然而,某些重要的代謝酶在肝細胞中并不表達或者表達量不受常用誘導劑（如Aroclor 1254）影響,導致依賴相應酶活化的前致突變物在添加S9混合物的實驗體系中也表現(xiàn)為陰性結果。采用重組表達特定細胞色素P450（cytochrome P450,CYP）酶的細胞系作為遺傳毒性研究的實驗體系可明顯增加前致突變物的檢出率。CYP2E1是活化某些親脂性小分子化合物的重要代謝酶,表達該酶的各種細胞模型已被用于研究相關前致突變物的遺傳毒作用,然而關于細胞內表達代謝酶的實驗體系與細胞外添加S9混合物的活化體系的比較優(yōu)勢尚未見報道。N-二乙基亞硝胺（NDEA）是重要的食品污染物及肝臟誘癌劑,在缺乏代謝酶活性的實驗體系中遺傳毒性試驗結果為陰性,只有在添加S9混合物并采用高濃度處理才表現(xiàn)致突變作用。有研究提示其可能經CYP2E1酶代謝活化。本研究采用表達人CYP2E... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?Ｖ７９－Ｍｚ、Ｖ７９衍生細胞和Ｌ－０２細胞系中ＣＹＰ２Ｅ１酶的表達??

ｌｉｖｅｒ?Ｓ９?ｍｉｘ??１．３．５．４?ＤＭＳＯ?對?Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌＡＩ?細胞?ＣＹＰ２Ｅ１?酶表達量的影響??由圖１?－７可知，與陰性對照組相比，ＤＭＳＯ在０．０５％？０．２％的范圍內不影響??Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌＡ丨細胞屮ＣＹＰ２Ｅ１酶表達水、卜，統(tǒng)計學無差異（ｐ?＞?０．０５）。??４３??

分細胞沖付基因發(fā)生自發(fā)突變；陽性對照組ＮＤＥＡ的平皿中克隆數(shù)顯著增多，??提示了?ＮＤＥＡ加入后發(fā)生基因突變獲得６－ＴＧ抗性的細胞數(shù)目增加，（見??圖２－２Ａ、Ｂ）?，?ＰＣＢ２８和ＰＣＢ５２組的突變克隆圖片與陽性對照類似。??Ｄ?ＡＭ??曹??Ａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｂ?ＮＤＥＡ?（２０〇ｎｍｏｌ／Ｌ）??圖?２－２?６－ＴＧ?抗性?Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌＡｌ?突變克隆??Ｆｉｇ．?２－２?６－Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ?（ＴＧ）－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌ?Ａ１?ｍｕｔａｎｔｓ??２．３．２．２篩選突變克隆獲取沖／７基因ＰＣＲ產物??陰性對照組、ＰＣＢ?２８（?１０?ｐｍｏｌ／Ｌ、２０?ｐｍｏｌ／Ｌ、４０?｜ｉｍｏｌ／Ｌ）、ＰＣＢ?５２（８０?ｐｍｏｌ／Ｌ）??及陽性對照ＮＤＥＡ?（２００卩ｍｏｌ／Ｌ）組隨機選擇Ｈ）個突變克隆，通過細胞傳代擴??大培養(yǎng)后，提取細胞總ＲＮＡ，逆轉錄成ｃＤＮＡ，并通過ＰＣＲ對ｃＤＮＡ進行／／ｐｒ；??基因片段的擴增，通過瓊脂糖電泳鑒定ＰＣＲ擴增產物，如圖２－３?（列出部分產物??的電泳結果），部分克�。悖模危翢oＰＣＲ擴增產物。??６５??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]某典型電子垃圾拆解區(qū)大氣中氯化石蠟和多氯聯(lián)苯的污染特征[J]. 陳滿英,路風輝,劉瓊,陳潔.  再生資源與循環(huán)經濟. 2018(08)
[2]我國飲用水中亞硝胺類消毒副產物暴露水平的Meta分析[J]. 王海燕,石修權,覃明,董蕾,李童.  遵義醫(yī)學院學報. 2017(03)
[3]天津濱海新區(qū)大氣中多氯聯(lián)苯的季節(jié)分布與氣粒分配[J]. 李志勇,趙鵬,張敬紅.  中國環(huán)境科學. 2015(08)
[4]北京市大氣中多氯聯(lián)苯的污染水平和分布特征[J]. 洪維哲,李英明,張林楠,鮑佳,王璞,朱超飛,張慶華.  環(huán)境化學. 2015(03)
[5]珠江三角洲地區(qū)大氣和土壤中多氯聯(lián)苯分布特征研究[J]. 迭慶杞,聶志強,何潔,劉鋒,黃啟飛,田書磊.  環(huán)境工程技術學報. 2014(06)
[6]杭州市冬季大氣氣溶膠PM2.5中二惡英和多氯聯(lián)苯的污染特征[J]. 李沐霏,劉勁松,周欣,朱國華,鞏宏平,陳貝,王玲,孫軍軍.  色譜. 2014(09)
[7]深圳市大氣多氯聯(lián)苯的分布特征與來源[J]. 劉國卿,劉德全,李志剛,周志華,李軍,張鴻.  深圳大學學報(理工版). 2014(04)
[8]電子垃圾拆解區(qū)多氯聯(lián)苯暴露對新生兒生長發(fā)育的影響[J]. 陸紹琦,徐錫金,劉俊曉,邱少汕,李斌,張浴玲,霍霞.  汕頭大學醫(yī)學院學報. 2012(03)
[9]某電子垃圾拆解地鯽魚和雞蛋中二噁英和多氯聯(lián)苯的污染狀況研究[J]. 宋楊,吳南翔,韓見龍,沈海濤,譚玉鳳,丁剛強,項菊香,陶核,金順亮.  環(huán)境與健康雜志. 2011(04)
[10]深圳市大氣中多氯聯(lián)苯污染水平[J]. 王春雷,張建清,楊大成,彭朝瓊,蔣友勝,周健,黃海燕,何龍,招康賽.  環(huán)境化學. 2010(05)

碩士論文
[1]市售動物性腌制食品（臘腸和咸魚）中揮發(fā)性亞硝胺的調查研究[D]. 余衛(wèi)軍.南方醫(yī)科大學 2016



本文編號：2949233