本文關(guān)鍵詞：茶多酚對人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：茶能清肝明目,對視覺康復(fù)有很好的療效。隨著人類社會的發(fā)展,眼睛所受的光、輻射污染、年齡增長等一系列問題愈發(fā)嚴(yán)重,導(dǎo)致處于視網(wǎng)膜最外面一層的人視網(wǎng)膜色素上皮(HRPE)細(xì)胞慢性氧化損傷,而RPE細(xì)胞是治療視網(wǎng)膜病變的關(guān)鍵。茶多酚(Tea polyphenols, TP)作為國際公認(rèn)地強(qiáng)抗氧化劑,易于獲取且人體易吸收。本文選取茶多酚粉末,研究其對過氧化氫(Hydrogen peroxide,H202)誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮(HRPE-19)細(xì)胞抗氧化損傷的保護(hù)作用,為日后臨床上利用茶多酚治療年齡相關(guān)性黃斑病變等視網(wǎng)膜疾病和實現(xiàn)茶葉資源與眼科保健的跨界利用提供科學(xué)實驗依據(jù)。實驗采用500μmol·L-1的過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)體外培養(yǎng)ARPE-19細(xì)胞24h建立H2O2氧化損傷模型。確保茶多酚對ARPE-19細(xì)胞無增值和毒理作用后,設(shè)計5組進(jìn)行對照實驗：正常對照組,過氧化氫模型組,過氧化氫+4mg/mlTP組,過氧化氫+8mg/mlTP組,過氧化氫+16mg/mlTP組。MTT法檢測ARPE-19細(xì)胞細(xì)胞活性,并應(yīng)用紫外分光光度計法測定ARPE-19細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,最后利用Annexin V-FITC/PI雙染色流式細(xì)胞法測定細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示0-16mg/ml濃度的TP對ARPE-19細(xì)胞沒有表現(xiàn)出明顯的毒性作用和增殖作用：研究表明建立ARPE-19細(xì)胞氧化損傷模型最適宜的條件是用500 μmol/LH202濃度作用ARPE-19細(xì)胞24h,在此條件下,H202會造成ARPE-19細(xì)胞SOD活力降低,MDA含量增加,氧化程度加深,細(xì)胞凋亡增加。研究表明8mg/ml茶多酚就能通過發(fā)揮其超強(qiáng)的抗氧化能力來降低氧化應(yīng)激指標(biāo),從而達(dá)到保護(hù)ARPE-19細(xì)胞的目的,進(jìn)而延緩年齡相關(guān)性黃斑病變(AMD)等視網(wǎng)膜疾病的惡化。
【關(guān)鍵詞】：茶多酚 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 氧化損傷 抗氧化
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R151
【目錄】：

• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 第一章 緒論11-19
• 1.1 引言11
• 1.2 茶與視覺康復(fù)的相關(guān)性研究進(jìn)展11-16
• 1.2.1 茶中的維生素與視覺康復(fù)11-12
• 1.2.2 茶中的脂肪酸與眼健康研究12-13
• 1.2.3 茶葉中的生物堿與眼保健的祖國醫(yī)學(xué)觀13-14
• 1.2.4 茶多酚對視網(wǎng)膜疾病的視覺康復(fù)14-16
• 1.3 研究的主要內(nèi)容16-19
• 第二章 材料與方法19-31
• 2.1 實驗材料19-23
• 2.1.1 實驗細(xì)胞19
• 2.1.2 實驗試劑19-20
• 2.1.3 實驗儀器20
• 2.1.4 實驗主要試劑及其配制方法20-23
• 2.1.4.1 PBS緩沖液20-21
• 2.1.4.2 RPMI-1640培養(yǎng)液21
• 2.1.4.3 胰蛋白酶21
• 2.1.4.4 凍存液21
• 2.1.4.5 茶多酚藥液21-22
• 2.1.4.6 實驗用H_2O_2溶液22-23
• 2.2 實驗方法23-30
• 2.2.1 ARPE-19細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)23-25
• 2.2.1.1 細(xì)胞房的無菌操作23
• 2.2.1.2 ARPE-19細(xì)胞的傳代培養(yǎng)23-24
• 2.2.1.3 ARPE-19細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇24-25
• 2.2.1.4 ARPE-19細(xì)胞的計數(shù)與鑒定25
• 2.2.2 CCK-8法檢測茶多酚對ARPE-19細(xì)胞的毒性作用25-26
• 2.2.3 MTT法檢測茶多酚對ARPE-19細(xì)胞增殖影響26-27
• 2.2.4 過氧化氫誘導(dǎo)的ARPE-19氧化損傷模型的建立27-28
• 2.2.4.1 同一時間不同H_2O_2濃度下ARPE-19細(xì)胞活力變化27-28
• 2.2.4.2 同一H_2O_2濃度不同時間下ARPE-19細(xì)胞活力變化28
• 2.2.5 茶多酚對H_2_O2誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用28-30
• 2.2.5.1 實驗分組28
• 2.2.5.2 MTT檢測ARPE-19細(xì)胞活力28-29
• 2.2.5.3 流式細(xì)胞Annexin V-FITC/PI熒光標(biāo)記雙染法檢測hRPE細(xì)胞凋亡29
• 2.2.5.4 細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)的測定29-30
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析30-31
• 第三章 結(jié)果31-38
• 3.1 ARPE-19細(xì)胞的鑒定31
• 3.2 不同濃度茶多酚對ARPE-19細(xì)胞毒性的影響31-32
• 3.3 過氧化氫對ARPE-19細(xì)胞活力的影響研究32-34
• 3.3.1 不同H202濃度對ARPE-19細(xì)胞活力的影響32-33
• 3.3.2 H_2O_2不同作用時間對ARPE-19細(xì)胞活力的影響33-34
• 3.4 茶多酚對ARPE-19細(xì)胞增殖的影響34-35
• 3.5 茶多酚對H_2O_2氧化損傷ARPE-19細(xì)胞活性的影響35
• 3.6 Annexin V-FITC檢測ARPE-19細(xì)胞凋亡35-37
• 3.7 茶多酚對H_2O_2氧化損傷ARPE-19細(xì)胞SOD活性、MDA含量的影響37-38
• 第四章 討論38-42
• 4.1 過氧化氫誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞氧化損傷模型的建立38-39
• 4.2 茶多酚對ARPE-19細(xì)胞增殖的影響39
• 4.3 茶多酚對H_2O_2誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)39-42
• 第五章 結(jié)論與展望42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 附錄47-50
• 1. 中英文縮略詞47
• 2. 碩士期間發(fā)表論文47-48
• 3. 本論文項目支撐48
• 4. 實驗主要儀器和設(shè)備48-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：茶多酚對人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：293606