本文關(guān)鍵詞：MC-LR誘導(dǎo)大鼠睪丸支持細(xì)胞凋亡的線(xiàn)粒體-caspase依賴(lài)性途徑研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、ROS含量和線(xiàn)粒體膜電位變化以及相關(guān)凋亡蛋白相對(duì)表達(dá)水平,探討MC-LR是否通過(guò)線(xiàn)粒體介導(dǎo)的caspase依賴(lài)性途徑誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡,為保護(hù)、預(yù)防和治療MC-LR所致的生殖系統(tǒng)損傷提供科學(xué)依據(jù)。方法1.原代細(xì)胞培養(yǎng)：從青春前期(日齡18-20天)SD大鼠睪丸中提取、分離、純化睪丸支持細(xì)胞,建立原代培養(yǎng)睪丸支持細(xì)胞模型。2.CCK-8實(shí)驗(yàn)：CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度MC-LR (0,1,5,10,20,40, 60 p.g/ml)作用睪丸支持細(xì)胞24h后細(xì)胞增殖變化,確定ICso,設(shè)置ICso/4、IC50/2、IC50為后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。3.實(shí)驗(yàn)分組：睪丸支持細(xì)胞分為對(duì)照組(培養(yǎng)液)、ICso/4、IC50/2、IC50 MC-LR組和Caspase抑制劑zVADfink (50pmol/L)+IC50MC-LR組以及抗氧化劑NAC(10mmol/L)+IC50MC-LR組,繼續(xù)培養(yǎng)24h。4.凋亡率檢測(cè)：AnnexinV-FITC/PI雙染聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)各處理組細(xì)胞凋亡率變化。5.活性氧檢測(cè)：ROS試劑盒聯(lián)合熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度MC-LR和NAC預(yù)處理組細(xì)胞內(nèi)ROS熒光值變化。6.線(xiàn)粒體膜電位：JC-1試劑盒聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度MC-LR和NAC預(yù)處理組細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位變化。7.蛋白檢測(cè)：利用Western Blot法檢測(cè)各處理組細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素C、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3蛋白相對(duì)表達(dá)量變化。結(jié)果1.不同濃度MC-LR (0,1,5,10,20,40,60μg/ml)作用睪丸支持細(xì)胞24h后,細(xì)胞增殖被明顯抑制,且隨著MC-LR濃度升高,增殖抑制率顯著升高(P0.05)。經(jīng)計(jì)算MC-LR作用睪丸支持細(xì)胞24h ICso為32μg/ml,后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度分別為：8μg/ml,16μg/ml和32μg/ml。2. MC-LR能誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡,8μg/ml,16μg/ml和32μg/ml染毒組細(xì)胞凋亡率分別為3.9000%±0.200%、6.000%±0.100%、27.266%±0.115%,隨著MC-LR濃度升高,細(xì)胞凋亡率顯著升高(P0.05)。3. MC-LR能增加睪丸支持細(xì)胞內(nèi)ROS含量。熒光顯微鏡和流式結(jié)果均顯示：隨著MC-LR濃度升高,熒光值明顯升高,細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著增加(P0.05)。4. MC-LR能降低睪丸支持細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位,且隨著MC-LR濃度升高,線(xiàn)粒體膜電位顯著降低(P0.05)。5. MC-LR能增加睪丸支持細(xì)胞Cyt-c、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3的相對(duì)表達(dá)量,且隨著MC-LR濃度升高,四種蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.05)。6. Caspase抑制劑zVADfmk預(yù)處理可使32μg/ml MC-LR組細(xì)胞凋亡率由27.266%±0.115%下降至9.633±00.057%(P0.05),且能顯著降低四種蛋白的相對(duì)表達(dá)量(P0.05)。7.抗氧化劑NAC預(yù)處理可使32μg/ml MC-LR組細(xì)胞凋亡率由27.266±0.115%下降至13.200%±0.100%(P0.05),且明顯降低細(xì)胞內(nèi)ROS含量、抑制線(xiàn)粒體膜電位降低以及降低四種蛋白的相對(duì)表達(dá)量(P0.05)。結(jié)論1.微囊藻毒素-LR在一定濃度范圍內(nèi)可明顯抑制睪丸支持細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)其凋亡。2.線(xiàn)粒體介導(dǎo)的caspase依賴(lài)性途徑可能是微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡的主要途徑之一。3.活性氧參與了微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：微囊藻毒素-LR 睪丸支持細(xì)胞 活性氧 線(xiàn)粒體-Caspase 依賴(lài)性 凋亡
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略詞表12-13
• 1 前言13-16
• 2 材料與方法16-27
• 2.1 原代培養(yǎng)大鼠睪丸支持細(xì)胞的動(dòng)物來(lái)源16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑16-18
• 2.3 主要試劑配制18-19
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 2.4.1 睪丸支持細(xì)胞的分離以及培養(yǎng)19-20
• 2.4.2 MC-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞增殖抑制的測(cè)定20
• 2.4.3 睪丸支持細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位(MMP)的測(cè)定20-21
• 2.4.4 睪丸支持細(xì)胞中活性氧ROS的測(cè)定21-22
• 2.4.5 睪丸支持細(xì)胞凋亡率的測(cè)定22-23
• 2.4.6 睪丸支持細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白分子的測(cè)定23-26
• 2.5 統(tǒng)計(jì)分析方法26-27
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-42
• 3.1 不同濃度MC-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞增殖的影響27-28
• 3.2 不同濃度MC-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞凋亡率的影響28-30
• 3.3 不同濃度MC-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞內(nèi)ROS含量的影響30-32
• 3.4 不同濃度MC-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的影響32-33
• 3.5 不同濃度MC-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞中線(xiàn)粒體caspase依賴(lài)性途徑相關(guān)蛋白表達(dá)的影響33-34
• 3.6 Caspase抑制劑zVADfmk預(yù)處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞凋亡率的影響34-36
• 3.7 Caspase抑制劑zVADfmk預(yù)處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的影響36-37
• 3.8 抗氧化劑NAC預(yù)處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞凋亡率的影響37-38
• 3.9 抗氧化劑NAC預(yù)處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞ROS含量的影響38-39
• 3.10 抗氧化劑NAC預(yù)處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的影響39-40
• 3.11 抗氧化劑NAC預(yù)處理對(duì)睪丸支持細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響40-42
• 4 討論42-47
• 4.1 MC-LR抑制睪丸支持細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡42-43
• 4.2 ROS在MC-LR誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡中的調(diào)控作用43-44
• 4.3 線(xiàn)粒體在MC-LR在誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡中的重要作用44-45
• 4.4 MC-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞線(xiàn)粒體caspase依賴(lài)性凋亡途徑相關(guān)蛋白表達(dá)的影響45-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 綜述53-73
• 參考文獻(xiàn)65-73
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷73-74
• 致謝74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊黎江;沈放;仝向榮;路斌;高四愛(ài);馬銀海;;重樓皂苷對(duì)微囊藻毒素致小鼠腎損傷保護(hù)作用的組織學(xué)研究[J];昆明學(xué)院學(xué)報(bào);2013年06期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 孫瑜;微囊藻毒素LR對(duì)肝細(xì)胞系HL7702內(nèi)的蛋白磷酸酶PP2A下游靶點(diǎn)的影響[D];浙江大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：291800