本文關(guān)鍵詞：MC-LR誘導(dǎo)大鼠睪丸支持細胞凋亡的線粒體-caspase依賴性途徑研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過檢測細胞凋亡率、ROS含量和線粒體膜電位變化以及相關(guān)凋亡蛋白相對表達水平,探討MC-LR是否通過線粒體介導(dǎo)的caspase依賴性途徑誘導(dǎo)睪丸支持細胞凋亡,為保護、預(yù)防和治療MC-LR所致的生殖系統(tǒng)損傷提供科學(xué)依據(jù)。方法1.原代細胞培養(yǎng)：從青春前期(日齡18-20天)SD大鼠睪丸中提取、分離、純化睪丸支持細胞,建立原代培養(yǎng)睪丸支持細胞模型。2.CCK-8實驗：CCK-8試劑盒檢測不同濃度MC-LR (0,1,5,10,20,40, 60 p.g/ml)作用睪丸支持細胞24h后細胞增殖變化,確定ICso,設(shè)置ICso/4、IC50/2、IC50為后續(xù)實驗濃度。3.實驗分組：睪丸支持細胞分為對照組(培養(yǎng)液)、ICso/4、IC50/2、IC50 MC-LR組和Caspase抑制劑zVADfink (50pmol/L)+IC50MC-LR組以及抗氧化劑NAC(10mmol/L)+IC50MC-LR組,繼續(xù)培養(yǎng)24h。4.凋亡率檢測：AnnexinV-FITC/PI雙染聯(lián)合流式細胞儀檢測各處理組細胞凋亡率變化。5.活性氧檢測：ROS試劑盒聯(lián)合熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測不同濃度MC-LR和NAC預(yù)處理組細胞內(nèi)ROS熒光值變化。6.線粒體膜電位：JC-1試劑盒聯(lián)合流式細胞儀檢測不同濃度MC-LR和NAC預(yù)處理組細胞線粒體膜電位變化。7.蛋白檢測：利用Western Blot法檢測各處理組細胞內(nèi)細胞色素C、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3蛋白相對表達量變化。結(jié)果1.不同濃度MC-LR (0,1,5,10,20,40,60μg/ml)作用睪丸支持細胞24h后,細胞增殖被明顯抑制,且隨著MC-LR濃度升高,增殖抑制率顯著升高(P0.05)。經(jīng)計算MC-LR作用睪丸支持細胞24h ICso為32μg/ml,后續(xù)實驗濃度分別為：8μg/ml,16μg/ml和32μg/ml。2. MC-LR能誘導(dǎo)睪丸支持細胞凋亡,8μg/ml,16μg/ml和32μg/ml染毒組細胞凋亡率分別為3.9000%±0.200%、6.000%±0.100%、27.266%±0.115%,隨著MC-LR濃度升高,細胞凋亡率顯著升高(P0.05)。3. MC-LR能增加睪丸支持細胞內(nèi)ROS含量。熒光顯微鏡和流式結(jié)果均顯示：隨著MC-LR濃度升高,熒光值明顯升高,細胞內(nèi)ROS含量顯著增加(P0.05)。4. MC-LR能降低睪丸支持細胞線粒體膜電位,且隨著MC-LR濃度升高,線粒體膜電位顯著降低(P0.05)。5. MC-LR能增加睪丸支持細胞Cyt-c、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3的相對表達量,且隨著MC-LR濃度升高,四種蛋白相對表達量顯著升高(P0.05)。6. Caspase抑制劑zVADfmk預(yù)處理可使32μg/ml MC-LR組細胞凋亡率由27.266%±0.115%下降至9.633±00.057%(P0.05),且能顯著降低四種蛋白的相對表達量(P0.05)。7.抗氧化劑NAC預(yù)處理可使32μg/ml MC-LR組細胞凋亡率由27.266±0.115%下降至13.200%±0.100%(P0.05),且明顯降低細胞內(nèi)ROS含量、抑制線粒體膜電位降低以及降低四種蛋白的相對表達量(P0.05)。結(jié)論1.微囊藻毒素-LR在一定濃度范圍內(nèi)可明顯抑制睪丸支持細胞的增殖,并誘導(dǎo)其凋亡。2.線粒體介導(dǎo)的caspase依賴性途徑可能是微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)睪丸支持細胞凋亡的主要途徑之一。3.活性氧參與了微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)睪丸支持細胞凋亡過程。
【關(guān)鍵詞】：微囊藻毒素-LR 睪丸支持細胞 活性氧 線粒體-Caspase 依賴性 凋亡
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略詞表12-13
• 1 前言13-16
• 2 材料與方法16-27
• 2.1 原代培養(yǎng)大鼠睪丸支持細胞的動物來源16
• 2.2 實驗儀器及試劑16-18
• 2.3 主要試劑配制18-19
• 2.4 實驗方法19-26
• 2.4.1 睪丸支持細胞的分離以及培養(yǎng)19-20
• 2.4.2 MC-LR對睪丸支持細胞增殖抑制的測定20
• 2.4.3 睪丸支持細胞線粒體膜電位(MMP)的測定20-21
• 2.4.4 睪丸支持細胞中活性氧ROS的測定21-22
• 2.4.5 睪丸支持細胞凋亡率的測定22-23
• 2.4.6 睪丸支持細胞凋亡相關(guān)蛋白分子的測定23-26
• 2.5 統(tǒng)計分析方法26-27
• 3 實驗結(jié)果27-42
• 3.1 不同濃度MC-LR對睪丸支持細胞增殖的影響27-28
• 3.2 不同濃度MC-LR對睪丸支持細胞凋亡率的影響28-30
• 3.3 不同濃度MC-LR對睪丸支持細胞內(nèi)ROS含量的影響30-32
• 3.4 不同濃度MC-LR對睪丸支持細胞線粒體膜電位的影響32-33
• 3.5 不同濃度MC-LR對睪丸支持細胞中線粒體caspase依賴性途徑相關(guān)蛋白表達的影響33-34
• 3.6 Caspase抑制劑zVADfmk預(yù)處理對睪丸支持細胞凋亡率的影響34-36
• 3.7 Caspase抑制劑zVADfmk預(yù)處理對睪丸支持細胞相關(guān)凋亡蛋白表達的影響36-37
• 3.8 抗氧化劑NAC預(yù)處理對睪丸支持細胞凋亡率的影響37-38
• 3.9 抗氧化劑NAC預(yù)處理對睪丸支持細胞ROS含量的影響38-39
• 3.10 抗氧化劑NAC預(yù)處理對睪丸支持細胞線粒體膜電位的影響39-40
• 3.11 抗氧化劑NAC預(yù)處理對睪丸支持細胞凋亡相關(guān)蛋白表達的影響40-42
• 4 討論42-47
• 4.1 MC-LR抑制睪丸支持細胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡42-43
• 4.2 ROS在MC-LR誘導(dǎo)睪丸支持細胞凋亡中的調(diào)控作用43-44
• 4.3 線粒體在MC-LR在誘導(dǎo)睪丸支持細胞凋亡中的重要作用44-45
• 4.4 MC-LR對睪丸支持細胞線粒體caspase依賴性凋亡途徑相關(guān)蛋白表達的影響45-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-53
• 綜述53-73
• 參考文獻65-73
• 個人簡歷73-74
• 致謝74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊黎江;沈放;仝向榮;路斌;高四愛;馬銀海;;重樓皂苷對微囊藻毒素致小鼠腎損傷保護作用的組織學(xué)研究[J];昆明學(xué)院學(xué)報;2013年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫瑜;微囊藻毒素LR對肝細胞系HL7702內(nèi)的蛋白磷酸酶PP2A下游靶點的影響[D];浙江大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：MC-LR誘導(dǎo)大鼠睪丸支持細胞凋亡的線粒體-caspase依賴性途徑研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：291800