發(fā)布時(shí)間：2020-12-06 07:42

　　目的探討N,N-二甲基甲酰胺（DMF）對(duì)C57BL/6雄性小鼠肝臟的急性毒性效應(yīng)。方法 32只雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組,每組8只。2、3、4組單次經(jīng)口染毒1 500 mg/kg(bw DMF后分別在24 h,48 h,72 h處死。1組為空白對(duì)照組。記錄各組小鼠染毒前后的體重并計(jì)算肝臟系數(shù)。摘眼球取血并分析血生化指標(biāo),光鏡下觀察肝組織切片檢查肝臟損傷情況;LC-MS/MS檢測(cè)小鼠血液中N-甲基氨基甲酰加合物（NMHb）含量。結(jié)果與對(duì)照組相比,染毒后各組肝臟系數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.837,P<0.05）。24 h時(shí)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=17.173,P<0.05）;肝臟出現(xiàn)多灶性水樣變伴小的壞死灶,表現(xiàn)出較明顯的肝臟毒性效應(yīng)。48 h時(shí)毒性效應(yīng)進(jìn)一步加重,ALT、AST（天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶）升至高峰（F=17.173,P<0.05;F=17.633,P<0.05）,鏡下呈彌漫性肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變。染毒后72 h時(shí)毒性效應(yīng)減輕,ALT、AST較48 h時(shí)有所下降,但與對(duì)照組比較差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（... 

【文章來(lái)源】：現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2017年11期 第2023-2026頁(yè) 北大核心

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【部分圖文】：

各組小鼠肝臟大體圖片及組織病理改變

示DMF對(duì)肝臟的毒性效應(yīng)在72h時(shí)降低。由此可見，DMF染毒后24h肝臟即表現(xiàn)出明顯的毒性效應(yīng);48h時(shí)肝臟毒性效應(yīng)更為顯著，此時(shí)肝臟損傷最為嚴(yán)重;72h時(shí)肝臟損傷減輕。圖2各組小鼠血液中NMHb含量(n=4)DMF進(jìn)入機(jī)體后，主要通過肝臟進(jìn)行代謝。研究表明，DMF在肝臟內(nèi)主要經(jīng)過細(xì)胞色素酶CYP2E1催化形成N－羥甲基－N－甲醇酰胺(HMMF)和NMF。而NMF經(jīng)CYP2E1代謝后生成的活性中間產(chǎn)物異氰酸甲酯(MIC)［10］能與肝臟中生物大分子結(jié)合，破壞其結(jié)構(gòu)和功能，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。體內(nèi)和體外試驗(yàn)表明，MIC可與球蛋白的N－末端纈氨酸產(chǎn)生N－甲基氨基甲酰加合物(NMHb)［8，11］。由于Hb能長(zhǎng)期存在于紅細(xì)胞內(nèi)，故NMHb作為生物標(biāo)志物的優(yōu)點(diǎn)為其能在紅細(xì)胞生存期內(nèi)保持穩(wěn)定［12］。NMHb的檢測(cè)方法已經(jīng)開始應(yīng)用于大鼠和人體的血液樣本，但能否檢測(cè)小鼠DMF暴露尚未得到證實(shí)。由于小鼠取血量約在1ml，達(dá)不到大鼠及人群樣本5ml的血量，故檢測(cè)難度增大，過程亦需優(yōu)化。通過直接將小鼠全血用生理鹽水沖洗后離心而非離心后清洗，盡可能避免紅細(xì)胞損失和直接離心導(dǎo)致紅細(xì)胞分離困難的問題。試驗(yàn)證明，1ml的小鼠全血可以得到至少50mg的Hb固體，滿足檢測(cè)要求。本試驗(yàn)中，NMHb在1組小鼠中無(wú)檢出，而在2、3、4三個(gè)染毒組小鼠中均有檢出，反映了NMHb具有良好的特異性。但NMHb在三個(gè)染毒組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示在染毒后24h時(shí)，小鼠體內(nèi)大部分DMF已經(jīng)被代謝。本次試驗(yàn)成功實(shí)現(xiàn)小鼠體內(nèi)NMHb的測(cè)定，為明確DMF在小鼠體內(nèi)的代謝情況提供有力證據(jù)。參考文獻(xiàn)［1］徐波，程娟，江海，等.太倉(cāng)市二甲基甲酰胺職業(yè)危害狀況調(diào)查［J］．衛(wèi)生研究，2014，43(6):1015－1017．［2］陳惠清，李榮宗，李小亮，等.1例二甲基甲酰胺致職業(yè)性慢性中毒性肝病調(diào)查

表2各組小鼠血生化指標(biāo)(n=4)組別ALT(U/L)AST(U/L)TG(mmol/L)ALP(U/L)TBA(μmol/L)1組130.67±61.94259.80±102.860.54±0.1195.00±35.726.45±0.072組515.50±269.41a141.00±105.360.60±0.1993.00±28.2519.40±11.553組982.00±272.94a772.00±579.00a0.47±0.16109.67±60.9532.17±24.574組778.33±219.73a651.00±293.67a0.59±0.2370.83±28.7416.47±12.10注:a與1組比較P＜0.052.3.2病理組織學(xué)光鏡下觀察對(duì)照組(1組)肝小葉輪廓清晰、核大而圓、核仁清晰(圖1.B)。染毒后24h(2組)表現(xiàn)為局灶性肝細(xì)胞水樣變及小的壞死灶形成(圖1.C)。染毒后48h(3組)可見較為嚴(yán)重的肝細(xì)胞壞死，壞死區(qū)組織崩解，肝細(xì)胞消失，呈均質(zhì)紅染無(wú)結(jié)構(gòu)物質(zhì)，壞死區(qū)周圍伴有出血及炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1.D);肝細(xì)胞胞漿可見脂滴蓄積，形成囊泡樣結(jié)構(gòu)(圖1.E)。染毒后72h(4組)可見彌漫性肝細(xì)胞水樣變性及點(diǎn)狀壞死，并伴有大量枯否細(xì)胞增生(圖1.F)。圖1各組小鼠肝臟大體圖片及組織病理改變2.4血液中NMHb含量2.3.4組小鼠均有NMHb檢出，分別為18.56±9.60，22.35±7.66和19.55±3.56nmol/gglobin，三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1組無(wú)檢出。見圖2。3討論染毒24h后肝臟已出現(xiàn)明顯的毒性效應(yīng)，表現(xiàn)為肝臟系數(shù)和ALT水平顯著升高(分別為1組的1.26和3.95倍)。雖大體解剖未見異常，但鏡下觀察已出現(xiàn)肝細(xì)胞水樣變及DMF染毒后典型的肝臟損傷———肝細(xì)胞壞死。染毒48h后肝臟系數(shù)進(jìn)一步升高(為對(duì)照組的1.29倍)，ALT為對(duì)照組7.52倍，AST為對(duì)照組2.97倍，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究表明，血清ALT反映肝細(xì)胞損傷的靈敏度較高而AST主要反映肝臟的損傷程度［9］。故AST水平在24h時(shí)尚未出現(xiàn)改變，而48h時(shí)已顯著升高，說明在48h時(shí)肝臟細(xì)胞已嚴(yán)重?fù)p傷

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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