目的通過體外培養(yǎng)的小鼠原代神經(jīng)元及體內(nèi)小鼠短期、慢性染錳實驗,測定不同濃度錳處理組神經(jīng)營養(yǎng)因子NT3與其受體TrkC及其激活的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白和凋亡蛋白的表達情況,探討NT3及其受體TrkC在錳致神經(jīng)毒性的潛在作用機制。方法將體外培養(yǎng)的小鼠神經(jīng)元經(jīng)不同濃度的MnCl₂·4H₂O溶液處理24小時后,在倒置相差顯微鏡下觀察染錳后細胞形態(tài)改變,經(jīng)MTT法測定其存活率,確定小鼠神經(jīng)元實驗各處理組的染錳濃度。小鼠神經(jīng)元按不同濃度染錳24小時后,經(jīng)熒光定量PCR分析TrkC及NT3的mRNA表達水平;經(jīng)Western Blot測定不同染錳劑量及不同染錳時間的細胞中NT3與TrkC及其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白（p-Akt、Akt,p-Erk,Erk,P-CREB,CREB）表達水平和其下游凋亡相關(guān)蛋白（Caspase3、Bax和Bcl2）的含量變化;經(jīng)免疫熒光觀察小鼠神經(jīng)元內(nèi)NT3及TrkC定位及變化情況;經(jīng)TMRM染料染色后,分別經(jīng)熒光顯微鏡及流式細胞儀檢測細胞的線粒體膜電位的變化情況;采用Annexin V-FITC細胞凋亡試劑盒、Tunel凋... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)元免疫熒光鑒定

圖 1-3：各染錳組小鼠神經(jīng)元存活率。*與 0 μM 組相比，p<0.05。不同錳處理組小鼠神經(jīng)元鏡下形態(tài)學(xué)觀察小鼠神經(jīng)元經(jīng)不同劑量染錳后經(jīng)倒置顯微鏡觀察可見，胞體飽滿透亮，細胞之間突起形成密集的網(wǎng)絡(luò)；100μM稍有減少，折光性未見改變，突觸網(wǎng)絡(luò)仍清晰可見，200μM 劑量組的細胞密度降低，折光度下降，突起回縮以胞核為中心發(fā)生皺縮、變圓，可見有大量透亮的細胞組細胞密度明顯降低，細胞的折光度明顯下降，胞體及程度均較 200μM 劑量組嚴重，細胞聚集成團，見有密圖 1-4。B

圖 1-3：各染錳組小鼠神經(jīng)元存活率。*與 0 μM 組相比，p<0.05。2.4 不同錳處理組小鼠神經(jīng)元鏡下形態(tài)學(xué)觀察小鼠神經(jīng)元經(jīng)不同劑量染錳后經(jīng)倒置顯微鏡觀察可見， 0μM 劑量組的細胞胞體飽滿透亮，細胞之間突起形成密集的網(wǎng)絡(luò)；100μM 劑量組的細胞密度稍有減少，折光性未見改變，突觸網(wǎng)絡(luò)仍清晰可見，少數(shù)細胞胞體變圓；200μM 劑量組的細胞密度降低，折光度下降，突起回縮細胞聚集成團，胞質(zhì)以胞核為中心發(fā)生皺縮、變圓，可見有大量透亮的細胞碎片；而 400μM劑量組細胞密度明顯降低，細胞的折光度明顯下降，胞體皺縮和突起回縮數(shù)量及程度均較 200μM 劑量組嚴重，細胞聚集成團，見有密集的細胞碎片。詳見圖 1-4。A B

【參考文獻】：
期刊論文
[1]線粒體凋亡通路的研究進展[J]. 鄭天勝,李翔.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(18)
[2]神經(jīng)細胞凋亡在腦發(fā)育和神經(jīng)退行性疾病中的作用[J]. 鄧錦波,牛艷麗,皇甫超申.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2010(08)



本文編號：2900229