目的:探討組蛋白去乙酰化酶6在炭黑顆粒誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用。方法:體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）,以細(xì)胞空白為對照組,分別用12.5、25、50、100μg/ml濃度的炭黑顆粒（Printex90）染毒細(xì)胞12、24、36、48 h后,采用Cell Counting Kit-8法（CCK-8）檢測細(xì)胞活力確定染毒時間。采用HDAC6siRNA預(yù)處理16HBE細(xì)胞,將實驗分為六組,細(xì)胞空白對照組、25μg/ml炭黑顆粒組、50μg/ml炭黑顆粒組、HDAC6 siRNA干擾空白組、25μg/ml炭黑顆粒+HDAC6 siRNA干擾組、50μg/ml炭黑顆粒+HDAC6 siRNA干擾組,染毒24 h后,收集染毒細(xì)胞和上清液,采用RT-PCR檢測HDAC6基因mRNA相對表達(dá)水平,WB檢測細(xì)胞內(nèi)HDAC6、纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運蛋白IFT88和自噬體蛋白LC3-Ⅱ等蛋白表達(dá)水平,ELISA檢測細(xì)胞上清液中IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1和IL-17A等炎性細(xì)胞因子的釋放量。結(jié)果:（1）在染毒各個時間點,炭黑顆粒染毒16HBE細(xì)胞后可導(dǎo)致細(xì)胞活力明顯下降,隨... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 炭黑顆粒對人支氣管上皮細(xì)胞HDAC6、自噬水平及炎癥反應(yīng)的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 實驗方法
        2.1.5 統(tǒng)計學(xué)分析方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.l 不同濃度和時間的炭黑顆粒對16HBE細(xì)胞存活率的影響
        2.2.2 炭黑顆粒染毒對16HBE細(xì)胞內(nèi)HDAC6mRNA表達(dá)的影響
        2.2.3 炭黑顆粒染毒對16HBE細(xì)胞內(nèi)HDAC6蛋白表達(dá)的影響
        2.2.4 炭黑顆粒染毒對16HBE細(xì)胞內(nèi)IFT88蛋白表達(dá)的影響
        2.2.5 炭黑顆粒染毒對16HBE內(nèi)細(xì)胞自噬體蛋白LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)的影響
        2.2.6 炭黑顆粒染毒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞表達(dá)炎性細(xì)胞因子的水平
    2.3 討論
第3章 HDAC6在炭黑顆粒致人支氣管上皮細(xì)胞自噬及炎癥反應(yīng)中的調(diào)控作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑配制
        3.1.3 實驗方法
        3.1.4 統(tǒng)計學(xué)分析方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 HDAC6siRNA對炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放HDAC6mRNA表達(dá)的影響
        3.2.2 HDAC6siRNA對炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放HDAC6蛋白表達(dá)的影響
        3.2.3 HDAC6siRNA對炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放IFT88蛋白表達(dá)的影響
        3.2.4 HDAC6siRNA對炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)的影響
        3.2.5 HDAC6siRNA對炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放各因子水平的影響
    3.3 討論
第4章 結(jié)論
第5章 結(jié)語與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述：纖毛異常在呼吸道疾病發(fā)生過程中的作用
    參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項目


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組蛋白去乙酰化酶6及其選擇性抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 劉婷,亓云鵬,宋云龍.  藥學(xué)進(jìn)展. 2016(11)
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[7]衣藻、纖毛與“纖毛相關(guān)疾病”[J]. 潘俊敏.  中國科學(xué)(C輯:生命科學(xué)). 2008(05)

碩士論文
[1]28天吸入染毒納米級炭黑氣溶膠致小鼠肺組織損傷及細(xì)胞凋亡損傷機制研究[D]. 楊墨.山西醫(yī)科大學(xué) 2017
[2]PM2.5對人支氣管上皮細(xì)胞毒性作用的初步研究[D]. 丁曉潔.南京醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]HDAC6 mRNA在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D]. 張峰.泰山醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號：2895238