本文關(guān)鍵詞：納米碳黑與重金屬聯(lián)合染毒對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的聯(lián)合毒性作用模式與機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：空氣顆粒物(Particulate Matter, PM)是危害我國(guó)居民健康的主要環(huán)境因素之一,其健康效應(yīng)及潛在毒性機(jī)制越來(lái)越受到人們關(guān)注。研究表明,不同地區(qū)、不同季節(jié)的PM組分差異較大,往往造成毒理學(xué)研究結(jié)果的可比性較低,難以充分了解PM的毒性效應(yīng)及潛在機(jī)制。目前,對(duì)于PM毒性效應(yīng)研究多是針對(duì)PM整體或針對(duì)其單一組分(如金屬或有機(jī)成分等),很少考慮主要組分間的聯(lián)合毒性作用。而選擇PM中代表性組分進(jìn)行聯(lián)合毒性的研究,對(duì)于闡明PM的毒性作用特征、比較不同顆粒物的毒性差異和開(kāi)展PM健康危害評(píng)估具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。因此,本研究通過(guò)對(duì)PM中代表性組分納米碳黑(NPCB)和重金屬(Pb/Cr/Cd)對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的聯(lián)合毒性效應(yīng)研究,旨在闡明PM主成分的聯(lián)合毒性作用模式,為PM的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：本課題第一部分主要探討了NPCB和重金屬(Pb/Cr/Cd)對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的聯(lián)合毒性作用模式,主要指標(biāo)包括基本細(xì)胞毒性、氧化損傷、周期和凋亡。采用細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(CCK-8)和乳酸脫氫酶試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)檢測(cè)納米碳黑(NPCB)和重金屬(Pb/Cr/Cd)聯(lián)合染毒24h對(duì)BEAS-2B細(xì)胞存活率和LDH漏出率的影響；采用DCFH-DA探針對(duì)NPCB和重金屬(Pb/Cr/Cd)聯(lián)合染毒3h后BEAS-2B的ROS水平進(jìn)行檢測(cè),采用總抗氧化能力試劑盒和SOD活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)NPCB和重金屬(Pb/Cr/Cd)聯(lián)合染毒24h后的細(xì)胞抗氧化能力,采用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)聯(lián)合染毒24h的細(xì)胞DNA損傷程度,采用流式細(xì)胞術(shù)(PI染色)檢測(cè)聯(lián)合染毒24h的細(xì)胞周期改變,采用Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)NPCB和重金屬(Pb/Cr/Cd)聯(lián)合染毒24h的細(xì)胞凋亡率。本課題第二部分對(duì)DNA損傷修復(fù)通路在NPCB與重金屬聯(lián)合染毒致DNA損傷中的作用機(jī)制進(jìn)行了初步研究。采用Western Blot檢測(cè)NPCB與三種重金屬聯(lián)合染毒對(duì)細(xì)胞DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白ATM、p-p53/p53和yH2AX表達(dá)的影響。結(jié)果與討論：基本細(xì)胞毒性的研究結(jié)果顯示,NPCB與重金屬(Pb/Cr/Cd)聯(lián)合染毒在細(xì)胞存活率和LDH漏出方面存在聯(lián)合作用,但聯(lián)合作用模式隨金屬不同、劑量不同以及評(píng)價(jià)指標(biāo)不同而不同。低劑量Pb與NPCB聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞存活率無(wú)交互作用,對(duì)細(xì)胞LDH漏出率表現(xiàn)為拮抗作用,高劑量Pb與NPCB聯(lián)合染毒對(duì)細(xì)胞存活率表現(xiàn)為協(xié)同作用,對(duì)細(xì)胞LDH漏出率則無(wú)明顯交互作用；Cd、Cr與NPCB聯(lián)合染毒在細(xì)胞存活率方面均表現(xiàn)為協(xié)同作用,低劑量Cd和Cr與NPCB對(duì)細(xì)胞LDH漏出率不存在聯(lián)合作用,高劑量時(shí)均表現(xiàn)為協(xié)同作用。ROS檢測(cè)結(jié)果顯示聯(lián)合染毒明顯促進(jìn)了ROS的生成；細(xì)胞總抗氧化能力和SOD活性檢測(cè)結(jié)果顯示,NPCB與三種重金屬聯(lián)合染毒在細(xì)胞總抗氧化能力和SOD活性方面存在聯(lián)合作用,Pb和Cr與NPCB聯(lián)合作用對(duì)總抗氧化能力表現(xiàn)為協(xié)同作用,Cd與NPCB聯(lián)合作用在總抗氧化能力上無(wú)明顯聯(lián)合作用；Cd和Cr與NPCB聯(lián)合作用對(duì)SOD表現(xiàn)為協(xié)同作用,Pb與NPCB聯(lián)合作用在SOD上無(wú)明顯聯(lián)合作用；單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示,三種重金屬與NPCB聯(lián)合染毒均明顯增強(qiáng)了細(xì)胞DNA損傷程度,方差分析結(jié)果顯示聯(lián)合作用模式為協(xié)同作用；在細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡方面,三種重金屬與NPCB均無(wú)明顯聯(lián)合作用。Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組和金屬單獨(dú)作用組相比,三種重金屬與NPCB聯(lián)合作用對(duì)這三種蛋白的表達(dá)均產(chǎn)生了不同程度的影響,提不ATM-p53-H2AX這條DNA損傷修復(fù)通路很可能在NPCB與重金屬的聯(lián)合染毒中發(fā)揮重要作用,然而其具體機(jī)制還需研究證實(shí)。結(jié)論：NPCB與重金屬對(duì)BEAS-2B細(xì)胞存在聯(lián)合毒性作用,可以通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生大量ROS、降低細(xì)胞抗氧化防御能力引起細(xì)胞氧化損傷,尤其是DNA氧化損傷。聯(lián)合作用模式分析結(jié)果顯示,不同金屬與NPCB的聯(lián)合作用模式隨金屬不同、劑量不同以及評(píng)價(jià)指標(biāo)不同而不同。此外,DNA損傷修復(fù)通路可能在聯(lián)合染毒引起的細(xì)胞DNA損傷中發(fā)揮重要作用,具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實(shí)。
【關(guān)鍵詞】：納米碳黑 重金屬 鉛 鉻 鎘 聯(lián)合毒性
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-16
• 第一部分 NPCB與重金屬Pb/Cd/Cr聯(lián)合染毒對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的聯(lián)合毒性作用模式研究16-58
• 材料與方法16-33
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 1.1 細(xì)胞系16
• 1.2 主要試劑16-17
• 1.3 特殊耗材17
• 1.4 主要儀器17-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-31
• 2.1 納米粒度分析儀測(cè)NPCB粒度分布18
• 2.2 透射電鏡(TEM)檢測(cè)NPCB表征18
• 2.3 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)18-19
• 2.4 染毒液配制與染毒劑量分組19-20
• 2.5 CCK-8法測(cè)細(xì)胞存活率20
• 2.6 HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)20-22
• 2.7 LDH法測(cè)乳酸脫氫酶漏出率22
• 2.8 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)檢測(cè)22-23
• 2.9 細(xì)胞總抗氧化能力檢測(cè)23-24
• 2.10 細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)24-26
• 2.11 單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷26-29
• 2.12 PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期29-30
• 2.12.1 實(shí)驗(yàn)原理29-30
• 2.12.2 實(shí)驗(yàn)步驟30
• 2.13 Annexin Ⅴ-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡30-31
• 2.13.1 實(shí)驗(yàn)原理30-31
• 2.13.2 實(shí)驗(yàn)步驟31
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31-33
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-53
• 1 NPCB分散液的篩選結(jié)果33-35
• 1.1 不同超聲時(shí)間及分散介質(zhì)對(duì)NPCB粒徑分布的影響33
• 1.2 不同分散液粒徑分布結(jié)果33-34
• 1.3 透射電鏡觀察結(jié)果34-35
• 2 NPCB與重金屬單獨(dú)及聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞存活率的影響35-38
• 2.1 NPCB、PbAc、CdCl_2、K_2Cr_2O_4單獨(dú)染毒24h對(duì)細(xì)胞存活率的影響35-36
• 2.2 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞存活率的影響36-38
• 3 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響38-39
• 4 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞LDH漏出的影響39-41
• 5 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒3h對(duì)細(xì)胞ROS生成的影響41-42
• 6 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞總抗氧化能力的影響42-44
• 7 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞SOD活性的影響44-45
• 8 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞DNA損傷的影響45-48
• 9 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞周期的影響48-51
• 10 NPCB與重金屬聯(lián)合染毒24h對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響51-53
• 討論53-57
• 小結(jié)57-58
• 第二部分 DNA損傷修復(fù)通路在NPCB與重金屬聯(lián)合染毒致DNA損傷中的作用機(jī)制研究58-72
• 材料與方法58-65
• 1 實(shí)驗(yàn)材料58-59
• 1.1 細(xì)胞系58
• 1.2 主要試劑及特殊耗材58-59
• 1.3 主要儀器59
• 2 實(shí)驗(yàn)方法59-64
• 2.1 蛋白的提取與定量(BCA法)59-60
• 2.2 Western Blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)60-64
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析64-65
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果65-68
• 1 NPCB與PbAc聯(lián)合染毒對(duì)細(xì)胞DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響65-66
• 2 NPCB與Cdcl_2聯(lián)合染毒對(duì)細(xì)胞DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響66-67
• 3 NPCB與K_2Cr_2O_4聯(lián)合染毒對(duì)細(xì)胞DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響67-68
• 討論68-71
• 小結(jié)71-72
• 結(jié)論72-73
• 參考文獻(xiàn)73-79
• 英文縮略詞表79-80
• 綜述80-93
• 參考文獻(xiàn)87-93
• 致謝93-95
• 附件 論文發(fā)表情況95-105

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 趙曼;DNA損傷修復(fù)通路在細(xì)胞應(yīng)對(duì)銀納米顆粒刺激中作用的研究[D];湖南大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：納米碳黑與重金屬聯(lián)合染毒對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的聯(lián)合毒性作用模式與機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：283863