發(fā)布時間：2017-04-02 16:05

  本文關鍵詞：不同pH值酸性氧化電位水對多重耐藥菌及生物被膜殺滅作用的應用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、觀察不同pH值EOW對臨床分離的MRSA與MDR-PA的殺滅效果。2、以硅膠膜為載體,建立體外細菌生物被膜模型,明確體外生物被膜形成時間。3、觀察不同pH值EOW對臨床分離的MDR-PA與MRSA生物被膜殺滅效果。方法:1、收集臨床分離的MDR-PA和MRSA各十株,制備合適濃度的菌懸液備用。根據(jù)不同pH值,將EOW分為三組,pH3.0、pH在4.0-5.0之間和pH在6.0-7.0之間,對照組為苯扎溴銨組和生理鹽水組。將制備好的菌懸液加入到以上不同的處理組,采用懸液殺菌實驗,監(jiān)測不同pH值EOW作用1 min、3 min和5 min對MDR-PA和MRSA的殺滅效果。通過活菌計數(shù),比較各組殺菌率。2、建立生物被膜體外模型,將臨床收集的MDR-PA和MRSA制成合適濃度的菌懸液備用。將硅膠膜進行高壓蒸汽滅菌放入到24孔板中,加入菌懸液和培養(yǎng)液,培養(yǎng)1 d和3 d,用銀染法和掃描電鏡觀察被膜形成情況。3、將制備好的生物被膜片加入到三組不同pH值的EOW中,分別作用5 min、10 min、20 min后,觀察不同pH值EOW對MDR-PA和MRSA生物被膜的殺菌效果。用平板計數(shù)法進行活菌計數(shù),計算殺菌率;并用掃描電鏡觀察作用前后各組被膜形態(tài)的變化;熒光顯微鏡觀察作用前后被膜表面死菌量的變化,評估殺菌效果。結果:1、通過懸液殺菌實驗,三組不同pH值EOW作用1 min,對MDR-PA的殺菌率分別為98.51%、99.53%、99.74%,作用3 min和5 min,殺菌率均達100%,三組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。而苯扎溴銨組對MDR-PA作用1 min、3 min、5 min殺菌率分別為,48.71%、70.75%、84.51%,與三組EOW組差異明顯,有統(tǒng)計學意義(P0.05);三組不同pH值EOW和苯扎溴銨對MRSA作用1 min、3 min、5 min殺菌率均為100%,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、培養(yǎng)1 d,銀染法發(fā)現(xiàn)載體表面有散在的黑色斑點,掃描電鏡顯示硅膠膜表面有散在的菌落聚集,表明生物被膜未形成;培養(yǎng)3 d,銀染法發(fā)現(xiàn)載體表面有片狀黑色絮狀物形成,掃描電鏡顯示載體表面已經(jīng)形成片狀的菌落聚集,表明生物被膜已經(jīng)形成。3、生物被膜殺菌結果顯示,三組不同pH值EOW對MDR-PA生物被膜,作用5 min和10 min殺菌率均達99%以上,作用20 min均達100%,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);對MRSA生物被膜作用5 min殺菌率均達99%以上,作用10 min和20min殺菌率均達99.99%以上,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、掃描電鏡在作用不同時間觀察被膜形態(tài)變化,作用5min,細菌開始變皺,形態(tài)發(fā)生輕微變化,作用10 min,細菌皺折明顯,個別細菌破裂,作用20 min發(fā)現(xiàn)大量細菌破裂。熒光染色結果顯示,與對照組相比,作用5 min、10 min、20 min,死菌數(shù)量明顯增多,且差異不明顯,這與活菌計數(shù)一致。結論:1、三組不同pH值EOW對MDR-PA殺菌效果相同且均優(yōu)于苯扎溴銨,對MRSA的殺菌效果與苯扎溴銨相同,但苯扎溴銨殺菌譜窄,推薦使用EOW。2、以硅膠膜為載體,培養(yǎng)3 d可以形成細菌生物被膜。3、三組不同pH值EOW對MDR-PA和MRSA生物被膜殺菌效果一致,而偏中性氧化電位水,無腐蝕性且能穩(wěn)定有效氯,保證殺菌效果,推薦將NEW用于臨床耐藥菌感染或已形成生物被膜的創(chuàng)面、傷口等。
【關鍵詞】：pH 酸性氧化電位水 多重耐藥菌 細菌生物被膜 殺滅作用
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R187
【目錄】：

• 縮略語表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-25
• 1 酸性氧化電位水的分類與制備14-15
• 2 酸性氧化電位水的殺菌機制15-16
• 3 酸性氧化電位水的應用范圍16-21
• 4 酸性氧化電位水的優(yōu)缺點21-23
• 5 偏中性氧化電位水的現(xiàn)狀23-24
• 6 不同pH值酸性氧化電位水的展望24-25
• 實驗一 不同pH值酸性氧化電位水對多重耐藥菌體外滅菌活性的分析25-37
• 1 材料25-26
• 1.1 實驗菌株25-26
• 1.2 主要儀器26
• 1.3 主要試劑26
• 2 方法26-30
• 2.1 實驗分組26
• 2.2 酸性氧化電位水的制備26-27
• 2.3 菌懸液的制備27
• 2.4 中和劑實驗27-29
• 2.5 懸液殺菌實驗29-30
• 2.6 觀察指標30
• 2.7 統(tǒng)計分析30
• 3 結果30-33
• 3.1 不同pH值酸性氧化電位水的理化性質30
• 3.2 殺菌試驗結果30-33
• 4 討論33-37
• 4.1 不同pH值酸性氧化電位水理化性質的比較34
• 4.2 不同pH值酸性氧化電位水對多重耐藥菌的殺滅作用34-35
• 4.3 苯扎溴銨的臨床應用與局限性35
• 4.4 不同pH值酸性氧化電位水的臨床應用35-36
• 4.5 展望36-37
• 實驗二 多重耐藥菌體外生物被膜模型的建立37-43
• 1 材料37-38
• 1.1 實驗菌株37
• 1.2 主要儀器37
• 1.3 主要試劑37-38
• 2 方法38-39
• 2.1 制備菌懸液38
• 2.2 體外生物被膜模型的建立38
• 2.3 銀染法觀察被膜形成情況38
• 2.4 掃描電鏡觀察被膜形態(tài)38-39
• 3 結果39
• 3.1 銀染法鑒定39
• 3.2 掃描電鏡觀察被膜形成情況39
• 4 討論39-43
• 4.1 體外生物被膜的培養(yǎng)時間40
• 4.2 體外生物被膜載體的選擇40
• 4.3 生物被膜的危害40-41
• 4.4 生物被膜的防治措施41-43
• 實驗三 不同pH值酸性氧化電位水對多重耐藥菌的生物被膜體外滅菌活性的分析43-53
• 1 材料43-44
• 1.1 實驗菌株43
• 1.2 主要儀器43-44
• 1.3 主要試劑44
• 2 方法44-46
• 2.1 實驗分組44
• 2.2 酸性氧化電位水的制備44
• 2.3 體外生物被膜的建立44-45
• 2.4 銀染法鑒定45
• 2.5 平板法菌落計數(shù)45
• 2.6 掃描電鏡觀察生物被膜形態(tài)45
• 2.7 熒光顯微鏡觀察45
• 2.8 統(tǒng)計分析45-46
• 3 結果46-50
• 3.1 不同pH值酸性氧化電位水的理化性質46
• 3.2 銀染法對生物被膜進行鑒定46
• 3.3 殺菌試驗結果46-49
• 3.4 掃描電子顯微鏡觀察生物被膜形態(tài)49
• 3.5 熒光顯微鏡觀察結果49-50
• 3.5.1 多重耐藥銅綠假單胞菌生物被膜49-50
• 3.5.2 MRSA生物被膜50
• 4 討論50-53
• 4.1 生物被膜耐藥機制51
• 4.2 不同pH的酸性氧化電位水對多重耐藥菌生物被膜的殺滅作用51-52
• 4.3 酸性氧化電位水對生物被膜的殺菌機制52
• 4.4 酸性氧化電位水在生物被膜感染中的應用52-53
• 小結53-55
• 參考文獻55-63
• 個人簡歷和研究成果63-64
• 致謝64-65

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