本文關(guān)鍵詞：北京市水產(chǎn)品污染及腹瀉病例副溶血性弧菌關(guān)聯(lián)性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景2013年全國報(bào)告的微生物因素所致食源性疾病暴發(fā)事件中主要由沙門氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌及其腸毒素等引起,分別占患病人數(shù)的26.5%、22.8%和12.0%。2013年全國食源性疾病病例監(jiān)測,1335家哨點(diǎn)醫(yī)院和1371個(gè)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)共分離、檢測87439份糞便標(biāo)本,其中沙門氏菌、副溶血性弧菌、致瀉大腸埃希氏菌的平均檢出率分別為2.83%、1.62%、0.97%。2013年北京市食源性疾病主動(dòng)監(jiān)測結(jié)果表明：哨點(diǎn)醫(yī)院共采集腹瀉病例標(biāo)本5617份,檢出食源性致病菌陽性菌株954株,其中副溶血性弧菌檢出最多,372株,占38.99%。故由副溶血性弧菌導(dǎo)致的食物中毒將是北京今后幾年內(nèi)威脅消費(fèi)者健康的主要食品安全事件。通常水產(chǎn)品副溶血性弧菌分離株致病性較弱,而腹瀉病例分離株致病性較強(qiáng),與水產(chǎn)品樣本分離株毒力基因型差別較大,二者之間關(guān)聯(lián)性研究較少。本文對2014年北京夏季市售水產(chǎn)品污染副溶血性弧菌與食源性感染病例的副溶血性弧菌進(jìn)行血清型、毒力基因型、耐藥譜、分子分型的研究比較,對北京市水產(chǎn)品污染及腹瀉病例副溶血性弧菌關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析。目的了解北京地區(qū)市售水產(chǎn)品的副溶血性弧菌污染水平以及哨點(diǎn)醫(yī)院食源性感染病例的副溶血性弧菌感染情況；通過對不同水產(chǎn)品(海水產(chǎn)品、淡水產(chǎn)品)中副溶血性弧菌的血清型、毒力基因型、耐藥譜和分子分型的研究,構(gòu)建水產(chǎn)品中副溶血性弧菌食品微生物風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫；基于副溶血性弧菌分子分型技術(shù),揭示水產(chǎn)品中副溶血性弧菌污染與病例感染的關(guān)聯(lián)性,為北京地區(qū)食源性疾病暴發(fā)的致病病原分析提供溯源,為評估食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測的目的與意義提供技術(shù)支持。方法1.選擇北京地區(qū)三個(gè)大型農(nóng)貿(mào)市場：新發(fā)地農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場、岳各莊農(nóng)副產(chǎn)品批發(fā)市場中心和京深海鮮批發(fā)市場,采集不同種類的淡水產(chǎn)品和海水產(chǎn)品,采用MPN方法對樣品中副溶血性弧菌進(jìn)行定量檢測,獲得各類水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的污染率及污染量數(shù)據(jù)。2.選擇北京豐臺區(qū)中醫(yī)藥大學(xué)附屬東方醫(yī)院、北京豐臺醫(yī)院、中國航天科工集團(tuán)七三一醫(yī)院作為監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院,以嘔吐或腹瀉等消化道癥狀為主訴的就診病例作為監(jiān)測樣本。采集上述患者的糞便標(biāo)本進(jìn)行副溶血性弧菌的檢測,獲得食源性感染病例的副溶血性弧菌感染水平。3.采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法對分離得出的水產(chǎn)品株和臨床株副溶血性弧菌進(jìn)行毒力基因t1h、t1h、trh的檢測。4.采用玻片凝集的方法對分離得出的水產(chǎn)品株和臨床株副溶血性弧菌進(jìn)行血清學(xué)分型。5.參照美國臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)對分離得出的水產(chǎn)品株和臨床株副溶血性弧菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。6.采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)方法對分離得出的水產(chǎn)品株和臨床株副溶血性弧菌進(jìn)行分子分型的研究,采用Bionumerics分析軟件對DNA指紋圖譜進(jìn)行聚類分析,從基因的水平量化不同菌株之間的親緣關(guān)系。結(jié)果1.副溶血性弧菌污染率及污染量研究結(jié)果顯示,2014年7-9月份實(shí)際共采集水產(chǎn)品樣品164份,其中80份樣品中分離到副溶血性弧菌,總污染率為48.78%；淡水產(chǎn)品污染率為38.78%,海水產(chǎn)品污染率為53.04%。淡水產(chǎn)品樣品中副溶血性弧菌平均菌量濃度為66.63MPN/g,海水產(chǎn)品樣品中副溶血性弧菌平均菌量濃度為36.54MPN/g。80份陽性樣品中,有14份菌量濃度210MPN/g。不同種類水產(chǎn)品中,貝類、蝦類的污染率高于魚類和蟹類；不同月份間,污染率未見明顯差別。2.三家哨點(diǎn)醫(yī)院2014年7月末至8月末的腹瀉臨床病例中分離出21株副溶血性弧菌。其中,8月份因嘔吐或腹瀉等消化道癥狀就診的患者33名,其中17名患者糞便樣本分離出副溶血性弧菌,副溶血性弧菌感染率為51.52%。3.PCR毒力基因檢測結(jié)果顯示,80株水產(chǎn)品來源和21株腹瀉病例來源的副溶血性弧菌tlh基因全部陽性,trh基因全部陰性。21株腹瀉病例來源的副溶血性弧菌,20株tdh毒力基因陽性,tdh毒力基因攜帶率為95.24%；80株水產(chǎn)品來源的副溶血性弧菌,只有1株tdh毒力基因陽性,tdh毒力基因攜帶率為1.25%。4.21株臨床病例來源的副溶血性弧菌,除1株不能分型,其余20株中最主要血清型為03：K6型,占總數(shù)的61.90%(13/21)；其次為04：K8型,占總數(shù)的28.57%(6/21)；還有1株屬于02群,K抗原未知。80株副溶血性弧菌0抗原血清分型率高,達(dá)到97.5%,分屬于9個(gè)不同的0群,包括01、02、03、04、05、06、08、010、011。主要血清型集中在02、01、05群,這三種血清型占水產(chǎn)品菌株數(shù)的61.25%,02群為最主要血清型,占總數(shù)的35.00%。水產(chǎn)品中副溶血性弧菌K抗原分型率低,能完全分型的菌株占總數(shù)的37.50%(30/80),其中以02：K28最多,占完全分型菌株數(shù)的43.33%(13/30),為發(fā)現(xiàn)03：K6型臨床流行株。出現(xiàn)3株新菌型,血清型為01：K33、05：K33、011：K34。5.藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,21株臨床來源的副溶血性弧菌只對青霉素類的氨芐西林出現(xiàn)耐藥和中介,耐藥率為28.57%(6/21),中介率為57.14%(12/21),對其余11種抗生素全部敏感。80株水產(chǎn)品分離株中,有50株菌對至少一種抗生素耐藥,總體耐藥率為62.50%；10株菌出現(xiàn)雙重耐藥,雙重耐藥率為12.50%。其中,對氨芐西林的耐藥及中介菌株最多,耐藥率達(dá)45.00%(36/80),中介率為39.68%；其次是慶大霉素,耐藥率25.00%(20/80)；四環(huán)素、環(huán)丙沙星、萘啶酸、甲氧芐啶/磺胺甲VA唑耐藥率均為1.25%(1/80)；多粘菌素B有5.00%(4/80)的中介菌株,但未出現(xiàn)耐藥株。水產(chǎn)品分離株對頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氯霉素、美羅培南均100%敏感。不同類型水產(chǎn)品中,淡水產(chǎn)品分離株耐藥率為52.63%,海水產(chǎn)品分離株耐藥率為65.57%,均以氨芐西林和慶大霉素耐藥率最高,總體耐藥情況無明顯差異,但是雙重耐藥情況絕大多數(shù)出現(xiàn)在海水產(chǎn)品分離株中。6.副溶血性弧菌PFGE分子分型結(jié)果顯示,101株菌經(jīng)限制性內(nèi)切酶sfi Ⅰ酶切后顯示出良好的分型能力,分型率為96.04%(97/101),共產(chǎn)生92種帶型,每株菌條帶數(shù)在12-22條之間。聚類結(jié)果顯示,腹瀉病例來源的副溶血性弧菌遺傳相似度在47.3%-100%之間,可分為4個(gè)群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),相同血清型之間相似度高,有緊密的親緣關(guān)系；水產(chǎn)品來源的分離株遺傳相似度在48.3%-97.6%之間,淡水產(chǎn)品分離株和海水產(chǎn)品分離株之間只有少數(shù)相似度高,不同類型水產(chǎn)品分離株之間最高相似度為97.1%,樣本來自相同時(shí)間、相同地點(diǎn)；水產(chǎn)品來源和腹瀉病例來源的副溶血性弧菌遺傳相似度在48.3%-100%之間,存在3個(gè)較明顯的克隆群,群內(nèi)相似度88.7%,包含6株水產(chǎn)品分離株和11株臨床分離株,水產(chǎn)品分離株和臨床分離株最高遺傳相似度達(dá)到100%,不同來源的分離株之間存在緊密的親緣關(guān)系。結(jié)論1.北京地區(qū)市售水產(chǎn)品貝類、蝦類副溶血性弧菌污染率高于其他類水產(chǎn)品,淡水產(chǎn)品和海水產(chǎn)品間存在交叉污染的可能性大。2.北京食源性感染病例中副溶血性弧菌感染率高,不同性別間感染率未見差異。3.80株水產(chǎn)品來源的副溶血性弧菌只有1株菌檢出tdh基因,trh基因均未檢出,但同期哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉病例糞便樣本中分離的21株副溶血性弧菌毒力基因型絕大多數(shù)為tdh(+)/trh(一),占95.24%(20/21)。表明水產(chǎn)品副溶血性弧菌分離株致病性較弱,腹瀉病例分離株致病性較強(qiáng),與水產(chǎn)品樣本分離株毒力基因型差別較大。4.03：K6和04：K8血清型副溶血性弧菌是導(dǎo)致北京地區(qū)副溶血性弧菌感染的優(yōu)勢菌株。水產(chǎn)品來源的副溶血性弧菌血清完全分型率低,主要血清型為02群,發(fā)現(xiàn)3株新菌型,其中2株未經(jīng)報(bào)道過。水產(chǎn)品株的02：KUT型和02：K3型具有引起食源性疾病的潛在風(fēng)險(xiǎn)。5.哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉病例來源的副溶血性弧菌對多種抗生素敏感。水產(chǎn)品來源的副溶血性弧菌耐藥情況受水產(chǎn)品原產(chǎn)地影響,情況復(fù)雜,淡水產(chǎn)品和海水產(chǎn)品分離株耐藥情況無明顯差異。北京地區(qū)尚未發(fā)現(xiàn)多重耐藥株,但是海水產(chǎn)品中貝類和蝦類產(chǎn)品出現(xiàn)了雙重耐藥株。6.哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉病例來源的副溶血性弧菌PFGE帶型集中,所有的03：K6型臨床株帶型相似度高,親緣關(guān)系緊密,提示病人可能具有相同的感染源。水產(chǎn)品來源的副溶血性弧菌帶型較分散,絕大對數(shù)淡水產(chǎn)品分離株和海水產(chǎn)品分離株間相似度不高,表明導(dǎo)致淡水產(chǎn)品副溶血性弧菌污染的主要原因并非交叉污染,提示淡水產(chǎn)品和海水產(chǎn)品存在不同的污染源。不同來源的分離株遺傳相似度88.7%的有17株,包含11株腹瀉病例分離株和6株水產(chǎn)品分離株,最高遺傳相似度達(dá)100%,表明超過半數(shù)的臨床分離株都與水產(chǎn)品分離株親緣關(guān)系密切,提示水產(chǎn)品是導(dǎo)致北京地區(qū)夏季副溶血性弧菌食源性感染疾病的高風(fēng)險(xiǎn)食品。
【關(guān)鍵詞】：副溶血性弧菌 臨床病例 水產(chǎn)品 毒力基因 血清分型 藥敏試驗(yàn) 脈沖場凝膠電泳
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• ABSTRACT9-14
• 縮略詞表14-16
• 前言16-20
• 第一章 副溶血性弧菌市售水產(chǎn)品污染情況和哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉病例感染情況20-39
• 第一節(jié)、副溶血性弧菌分離20-31
• 第二節(jié)、副溶血性弧菌生化鑒定31-39
• 第二章 不同來源的副溶血性弧菌毒力基因型和血清型研究39-51
• 第一節(jié)、副溶血性弧菌的毒力基因檢測39-45
• 第二節(jié)、副溶血性弧菌血清分型45-51
• 第三章 不同來源的副溶血性弧菌的耐藥分布研究51-63
• 1 材料51-52
• 2 方法52-56
• 3 結(jié)果56-61
• 4 討論61-62
• 5 結(jié)論62-63
• 第四章 不同來源的副溶血性弧菌分子分型研究63-80
• 1 材料63-64
• 2 方法64-68
• 3 結(jié)果68-77
• 4 討論77-78
• 5 結(jié)論78-80
• 全文總結(jié)和展望80-82
• 附錄82-85
• 致謝85-86
• 發(fā)表的文章86-87
• 參考文獻(xiàn)87-94
• 綜述94-101
• 參考文獻(xiàn)100-101

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1 徐曉可;吳清平;張菊梅;楊小鵑;周艷紅;;水產(chǎn)品中副溶血性弧菌特異性二重PCR檢測方法的研究[J];食品與機(jī)械;2008年03期

2 沈玄藝;章丹陽;楊元斌;宋啟發(fā);徐景野;;甬滬兩地海產(chǎn)品中副溶血性弧菌攜帶與分型[J];中國農(nóng)村衛(wèi)生事業(yè)管理;2012年12期

3 丁珊珊;楊振泉;李寶利;潘志明;焦新安;;檸檬酸和溫度聯(lián)合處理對海水魚中副溶血性弧菌的殺滅作用[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2013年02期

4 陳瑞英;魯建章;蘇意誠;劉承初;;食品中副溶血性弧菌的危害分析、檢測與預(yù)防控制[J];食品科學(xué);2007年01期

5 王璐華;寧喜斌;;副溶血性弧菌的溫度預(yù)測模型[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2009年02期

6 盤寶進(jìn);汪文龍;羅兆飛;劉軍義;陳立標(biāo);何成偉;;牦蠣食品中副溶性弧菌的分離與鑒定[J];現(xiàn)代食品科技;2009年05期

7 高圍n，

本文編號：279524