本文關(guān)鍵詞：蚯蚓提取物干預(yù)矽塵誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：塵肺病是由于長期吸入生產(chǎn)性粉塵引起的以肺組織不可逆性進(jìn)行性纖維化為主的全身性疾病。當(dāng)前塵肺病仍是我國影響面最廣泛、最嚴(yán)重的職業(yè)病。我國每年新診斷職業(yè)病中85%以上為塵肺病,塵肺病中絕大多數(shù)屬于煤工塵肺和矽肺,占塵肺病的90%以上。煤工塵肺包括煤肺、矽肺和煤矽肺,其發(fā)病機(jī)制與矽肺基本相同,均與煤塵/矽塵中游離二氧化硅含量密切相關(guān)。目前大容量肺灌洗術(shù)對清除肺內(nèi)粉塵很有效,適合早期病人,但是患者不易接受,難以推廣�；颊弑容^容易接受藥物治療,但針對塵肺病肺纖維化的特效藥物很少。我國已經(jīng)診斷的塵肺病人已超過70萬,而且每年新增1.5萬左右的新病例,這類疾病的治療是現(xiàn)階段亟待解決的問題。蚯蚓也稱地龍,為常見的一種陸生環(huán)節(jié)動物,生活在土壤中。其體內(nèi)含有豐富蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)及脂肪酸。蚯蚓是我國重要的中藥材之一,最早的中藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》中收載的67種動物藥中就有蚯蚓,用于治療多種疾病。1995年國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)了蚯蚓提取物的生產(chǎn),在治療心腦血管疾病上得到了非常廣泛的應(yīng)用。蚯蚓提取物中主要的功效性成分為蚓激酶和纖溶酶。動物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察均證明,蚯蚓提取物有著很多藥理學(xué)功能,例如纖溶,抗凝,抗炎以及抗氧化等。理論上這些功能是能夠抑制矽塵誘導(dǎo)的肺部早期炎癥反應(yīng)及后期的纖維化,目前未見相關(guān)報道。因此,我們構(gòu)建矽塵誘導(dǎo)的肺纖維化動物模型,用蚯蚓提取物早期干預(yù)和治療矽肺,通過觀察病理學(xué)、肺纖維化標(biāo)志物及μCT等判定其干預(yù)和治療效果,為開發(fā)有效的預(yù)防/治療矽肺肺纖維化藥物提供科學(xué)依據(jù),也為擴(kuò)大蚯蚓提取物的治療領(lǐng)域提供新的線索。目的:通過建立矽塵誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化模型,設(shè)立蚯蚓提取物預(yù)防、早期治療和纖維化成熟期治療三種實(shí)驗(yàn)方案,來探討蚯蚓提取物是否能預(yù)防/治療矽塵誘導(dǎo)的肺纖維化,為開發(fā)有效的預(yù)防/治療矽肺病藥物提供科學(xué)依據(jù)。方法:(1)設(shè)計蚯蚓提取物預(yù)防、早期治療和纖維化成熟期治療矽肺三種實(shí)驗(yàn)方案;①預(yù)防方案:小鼠隨機(jī)分為4組,對照組、矽塵組、蚯蚓提取物低劑量組和高劑量組。高、低劑量組分別腹腔給予純化蚯蚓提取物(酶活性單位分別為24U/g和240U/g),每天1次,共5天。然后經(jīng)氣管一次性滴注Si O2粉塵懸液,第2天繼續(xù)腹腔給予蚯蚓提取物,對照組和矽塵組給予生理鹽水,連續(xù)給藥至不同時間終點(diǎn)(7天、14天、28天);②纖維化早期治療方案:分組同前,另外加入吡非尼酮治療組。除對照組外,其余各組均行氣管一次性滴注Si O2粉塵懸液,對照組氣管滴注生理鹽水;第4周開始給藥治療,治療5周觀察療效。③纖維化成熟期治療方案:分組同前,矽塵處理第5周開始給藥治療,治療4周觀察療效。(2)通過小鼠BALF細(xì)胞計數(shù)、病理切片HE染色、纖維化評分以及肺臟μCT來觀察Si O2粉塵誘導(dǎo)小鼠矽肺發(fā)生發(fā)展的動態(tài)變化過程;(3)通過Masson染色、免疫組化和WB等實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測膠原纖維、α-SMA、E-cad、TGF-β1、Smad2等纖維化標(biāo)志物的動態(tài)表達(dá)情況;應(yīng)用ICP-MS檢測小鼠血清中硅含量變化趨勢。結(jié)果1蚯蚓提取物預(yù)防矽塵誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化(1)BALF細(xì)胞計數(shù):BALF中細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞數(shù)量變化趨勢基本一致,矽塵能顯著增加肺泡內(nèi)上述細(xì)胞數(shù)量,但隨著處理時間的增加細(xì)胞數(shù)呈下降趨勢,蚯蚓提取物在一定程度上能抑制矽塵導(dǎo)致的炎癥細(xì)胞滲出,其BALF中細(xì)胞數(shù)量高于對照組而低于矽塵組。矽塵處理初期,蚯蚓提取物能增加BALF中淋巴細(xì)胞的數(shù)量,以高劑量組BALF中淋巴細(xì)胞數(shù)量最多,隨時間逐漸降低,在28天淋巴細(xì)胞數(shù)量低于矽塵組,高于對照組。同樣說明蚯蚓提取物能抑制矽塵誘導(dǎo)的肺泡內(nèi)炎癥細(xì)胞滲出。(2)病理切片HE染色顯示及纖維化評分:染塵后7天、14天、28天分別處理小鼠,與肺纖維化發(fā)生發(fā)展過程較為典型的矽塵組相比,蚯蚓提取物處理組高、低劑量組變化趨勢基本一致,肺泡炎癥及肺纖維化程度均較模型組明顯減輕,干預(yù)7天組肺組織炎細(xì)胞浸潤區(qū)域較模型組明顯減少。干預(yù)14天組肺組織結(jié)構(gòu)較模型組完整,成纖維細(xì)胞增殖減輕,細(xì)胞聚集范圍減小,病變程度較同期模型組輕。干預(yù)28天組雖出現(xiàn)細(xì)胞性結(jié)節(jié),但大小及數(shù)量均較同期模型組少。纖維化評分從量化指標(biāo)上進(jìn)一步證實(shí)了蚯蚓提取物能明顯抑制矽塵誘導(dǎo)的纖維化發(fā)生發(fā)展。(3)μCT:處理28天后,矽塵組小鼠充氣肺容積立體像素值明顯低于對照組,高、低劑量蚯蚓提取物治療組小鼠充氣肺容積立體像素值略高于矽塵組,尤其是低劑量組與矽塵組比較有統(tǒng)計學(xué)意義。提示矽塵導(dǎo)致肺內(nèi)含氣量減少可部分被蚯蚓提取物抑制。(4)纖維化標(biāo)志物:Masson染色顯示矽塵組膠原沉積明顯增多,高、低劑量蚯蚓提取物治療組膠原沉積較少;免疫組化結(jié)果顯示矽塵組的α-SMA表達(dá)水平明顯增加,高、低劑量蚯蚓提取物處理組α-SMA表達(dá)水平明顯降低,接近對照組,而E-cad表達(dá)水平呈現(xiàn)相反的變化趨勢。纖維化信號通路(TGF-β)重要分子TGF-β1和Smad2在矽塵組表達(dá)明顯上調(diào),而高、低劑量蚯蚓提取物處理組則明顯下調(diào)。提示蚯蚓提取物能夠抑制矽塵誘導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)的沉積、成纖維細(xì)胞的活化及上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化,其機(jī)制可能是通過影響TGF-β信號通路實(shí)現(xiàn)的。(5)血清硅含量:矽塵處理7天及14天后,與對照組相比,矽塵組和高、低劑量蚯蚓提取物治療組血清硅含量均增加;至28天后,矽塵組和高、低劑量蚯蚓提取物治療組血清硅含量明顯增加,且高、低劑量蚯蚓提取物治療組血清硅含量顯著高于對照組。提示蚯蚓提取物能增加硅吸收入血,從而減少了肺內(nèi)硅的含量。2蚯蚓提取物治療矽塵誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化(1)纖維化早期治療效果:染塵后第4周開始治療,對照組10只小鼠均未發(fā)生纖維化性病變,矽塵組纖維化嚴(yán)重程度評分均數(shù)為3.0,分布范圍評分均數(shù)為2.3;蚯蚓提取物治療組和吡非尼酮治療組病變嚴(yán)重性及分布范圍均明顯減輕,與矽塵組有統(tǒng)計學(xué)差異,提示蚯蚓提取物作為治療性用藥的效果良好。(2)纖維化成熟期治療效果:染塵后第5周開始治療,對照組5只小鼠均未發(fā)生纖維化性病變,矽塵組纖維化嚴(yán)重程度評分均數(shù)為2.8,分布范圍評分均數(shù)為2.6;蚯蚓提取物治療后病變嚴(yán)重程度與矽塵組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),僅高劑量治療組病變分布范圍明顯較少,且有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),提示蚯蚓提取物治療效果主要是減少了纖維化病變分布范圍。μCT分析顯示與矽塵組相比,高低劑量組肺容積立體像素值增加,但無統(tǒng)計學(xué)差異,提示蚯蚓提取物治療成熟期肺纖維化時,能部分增加肺容積,但幅度有限。結(jié)論:(1)小鼠肺纖維化的預(yù)防模型結(jié)果提示蚯蚓提取物在矽肺的發(fā)生發(fā)展的炎癥階段及纖維化階段均發(fā)揮抑制作用,且低劑量的給藥效果優(yōu)于高劑量給藥。(2)纖維化早期治療模型綜合來看,蚯蚓提取物和吡非尼酮均能有效抑制纖維化發(fā)展,且蚯蚓提取物治療效果不比吡非尼酮差。(3)肺纖維化成熟期用蚯蚓提取物治療有一定的治療效果,但比早期治療效果差,且需要較高的劑量。
【關(guān)鍵詞】：矽塵 肺纖維化 蚯蚓提取物 吡非尼酮
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R135.2
【目錄】：

• 縮略語4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-27
• 結(jié)果27-44
• 討論44-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 綜述57-75
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 碩士期間發(fā)表論文75-76
• 致謝76

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1 何道偉,周菲;蚯蚓提取物抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];長江大學(xué)學(xué)報(自科版);2005年09期

2 呂軍;謝建云;劉曉勇;葛麗華;陳溯;;蚯蚓提取物用于小型豬牙蓋髓的實(shí)驗(yàn)研究[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2006年03期

3 閆萍;牛勃;張悅紅;張建林;王惠珍;劉德文;;蚯蚓提取物中蛋白質(zhì)含量測定方法的研究[J];中國生化藥物雜志;2007年01期

4 張復(fù)夏;郭寶珠;王惠云;蔡光宗;;蚯蚓提取物殺精作用及其有效成份的初步研究[J];陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1988年02期

5 李予蓉;張紹章;王克為;;蚯蚓提取物中的透析物對小鼠移植瘤的作用[J];中國腫瘤臨床;1991年03期

6 張紹章,姚素臣,孫淑芬,李予蓉;蚯蚓提取物對小鼠肝中熒光產(chǎn)物和血中CAT,GSH-px,SOD含量的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1992年01期

7 邵承斌;蚯蚓提取物（912）抗癌作用的研究進(jìn)展[J];渝州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);1994年02期

8 邵鳳民，朱長連，程銀楨，朱清，，張小玲，楚天舒;蚯蚓提取物治療慢性腎小球腎炎的研究[J];河南醫(yī)學(xué)研究;1996年02期

9 邵鳳民,王小陽,張小玲,邢清和,朱長連,程銀楨,張明軒;蚯蚓提取物治療腎實(shí)質(zhì)性高血壓的研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2001年02期

10 胡云龍,徐梅,張雙全,黃文華,亢壽海,王俏先;蚯蚓提取物對小鼠腫瘤動物模型的研究[J];生物技術(shù);2002年06期

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1 王婷;蚯蚓提取物干預(yù)矽塵誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

2 周億金;蚯蚓提取物抗氧化作用的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 程果;蚯蚓提取物鎮(zhèn)痛有效成分分離純化及鎮(zhèn)痛作用的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

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本文編號：279303