本文關(guān)鍵詞：食源性克羅諾桿菌（Cronobacter spp.）生物膜的抑制及毒力差異關(guān)鍵因子發(fā)掘，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：克羅諾桿菌作為重要的食源性致病菌,食用被污染的相關(guān)食品可引起新生嬰幼兒腦膜炎、敗血癥以及小腸結(jié)腸炎等嚴(yán)重疾病。本文在對速凍食品和食用菌兩類食品中的克羅諾桿菌進(jìn)行污染調(diào)查的基礎(chǔ)上,分離和鑒定克羅諾桿菌31株,并開展菌株抗生素敏感試驗(yàn)、抗?jié)B透壓及抗干燥能力的測定。基于目前克羅諾桿菌感染過程中相關(guān)的毒力因子仍尚不明確,本研究在分離菌株中開展動物病理實(shí)驗(yàn)研究,發(fā)現(xiàn)克羅諾桿菌菌株間毒力存在較大差異,分別選取毒力強(qiáng)弱菌株各一株(鑒定為阪崎克羅諾桿菌)開展乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)及病理組織切片分析。隨后采用蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)(2-D)開展毒力差異菌株的全菌蛋白質(zhì)和膜蛋白質(zhì)圖譜的構(gòu)建,并結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫鑒定毒力差異菌株差異表達(dá)蛋白質(zhì),發(fā)現(xiàn)一些參與阪崎克羅諾桿菌毒力相關(guān)的潛在蛋白質(zhì),為闡明阪崎克羅諾桿菌致病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。細(xì)菌為應(yīng)對環(huán)境壓力通過形成生物膜而粘附于食品生產(chǎn)設(shè)備及環(huán)境表面,是食品被細(xì)菌持續(xù)污染的重要途徑。本文開展不同的D/L型氨基酸對克羅諾桿菌生物膜形成的抑制研究,我們發(fā)現(xiàn)D型色氨酸對生物膜建成具有較高的抑制效果,并在此基礎(chǔ)上開展阪崎克羅諾桿菌分離株的浮游態(tài)與生物膜態(tài)差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究,首次從蛋白質(zhì)組學(xué)水平揭示與生物膜形成發(fā)展相關(guān)的因子,為闡明生物膜形成機(jī)理提供重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：克羅諾桿菌 污染調(diào)查 生物膜 致病因子 差異蛋白質(zhì)組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.3
【目錄】：

• 致謝7-8
• 摘要8-9
• ABSTRACT9-15
• 第一章 緒論15-27
• 1.1 克羅諾桿菌的研究現(xiàn)狀15-24
• 1.1.1 克羅諾桿菌的生物學(xué)特性15-18
• 1.1.2 克羅諾桿菌在食品及環(huán)境中的污染分布18-19
• 1.1.3 克羅諾桿菌生物膜形成影響因素及其分子機(jī)制19-21
• 1.1.4 克羅諾桿菌的毒力因子及致病機(jī)制21-23
• 1.1.5 克羅諾桿菌功能蛋白質(zhì)組學(xué)23-24
• 1.2 本課題的研究背景、意義及主要內(nèi)容24-27
• 1.2.1 選題研究背景、意義24
• 1.2.2 本課題研究的主要內(nèi)容24-25
• 1.2.3 技術(shù)路線圖25
• 1.2.4 項(xiàng)目資助25-27
• 第二章 合肥地區(qū)冷凍食品和食用菌中克羅諾桿菌的污染調(diào)查及其特征研究27-39
• 2.1 試驗(yàn)材料與儀器27-28
• 2.1.1 材料與試劑27
• 2.1.2 儀器與設(shè)備27-28
• 2.2 調(diào)查方案28
• 2.2.1 采樣時間、地點(diǎn)及樣品分布情況28
• 2.2.2 樣品預(yù)處理28
• 2.3 檢測方法28-30
• 2.3.1 檢測流程28-29
• 2.3.2 操作步驟29-30
• 2.5 篩選菌株的生物學(xué)特性30-31
• 2.5.1 滲透壓耐受實(shí)驗(yàn)30
• 2.5.2 干燥耐受實(shí)驗(yàn)30
• 2.5.3 藥敏實(shí)驗(yàn)30-31
• 2.6 結(jié)果與分析31-38
• 2.6.1 總體污染情況及鑒定情況31-34
• 2.6.2 生物學(xué)特性34-38
• 2.7 本章討論38-39
• 第三章 右旋氨基酸對阪崎克羅諾桿菌生物膜發(fā)展的抑制作用研究39-51
• 3.1 試驗(yàn)材料與儀器39-40
• 3.1.1 材料與試劑39
• 3.1.2 儀器與設(shè)備39-40
• 3.2 方法40-41
• 3.2.1 克羅諾桿菌分離株生物膜形成能力的測定40
• 3.2.2 不同濃度的D/L型氨基酸對克羅諾桿菌分離株生物膜形成的影響40
• 3.2.3 不同濃度D型色氨酸對克羅諾桿菌分離株生長的影響40-41
• 3.2.4 D型色氨酸對克羅諾桿菌分離株生物膜形成及發(fā)展的影響41
• 3.3 結(jié)果與分析41-49
• 3.4 本章討論49-51
• 第四章 阪崎克羅諾桿菌在生物膜和浮游狀態(tài)下的蛋白質(zhì)表達(dá)差異研究51-69
• 4.1 菌株及培養(yǎng)條件51
• 4.2 試驗(yàn)材料與儀器51-53
• 4.2.1 材料與試劑51-52
• 4.2.2 儀器與設(shè)備52-53
• 4.3 主要試劑的配制53-54
• 4.4 方法54-56
• 4.4.1 全菌蛋白的提取制備及總蛋白的定量54
• 4.4.2 向電泳實(shí)驗(yàn)流程54-56
• 4.5 結(jié)果與分析56-67
• 4.5.1 2-DE圖像分析56-57
• 4.5.2 關(guān)鍵差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的質(zhì)譜分析及生物信息學(xué)檢索57-67
• 4.6 本章討論67-69
• 第五章 基于蛋白質(zhì)組學(xué)阪崎克羅諾桿菌毒力相關(guān)因子研究69-107
• 5.1 阪崎克羅諾桿菌病理學(xué)研究69-74
• 5.1.1 菌株及實(shí)驗(yàn)動物69
• 5.1.2 試驗(yàn)材料與儀器69-70
• 5.1.3 方法70-71
• 5.1.4 結(jié)果與分析71-73
• 5.1.5 本節(jié)討論73-74
• 5.2 克羅諾桿菌強(qiáng)毒株和弱毒株全菌蛋白的蛋白質(zhì)表達(dá)差異74-92
• 5.2.1 菌株及培養(yǎng)條件74
• 5.2.2 試驗(yàn)材料與儀器74-76
• 5.2.3 主要試劑的配制76-77
• 5.2.4 方法77-80
• 5.2.5 結(jié)果與分析80-90
• 5.2.6 本節(jié)討論90-92
• 5.3 克羅諾桿菌強(qiáng)毒株和弱毒株膜蛋白的差異表達(dá)研究92-107
• 5.3.1 菌株及培養(yǎng)條件92
• 5.3.2 試驗(yàn)材料與儀器92-93
• 5.3.3 主要試劑的配制93-94
• 5.3.4 方法94-97
• 5.3.5 結(jié)果與分析97-105
• 5.3.6 本節(jié)討論105-107
• 第六章 結(jié)論與展望107-111
• 6.1 主要結(jié)論107-108
• 6.2 創(chuàng)新之處108
• 6.3 展望108-111
• 參考文獻(xiàn)111-124
• 攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動及成果情況124

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