【摘要】：富含膳食多酚的食物對改善心血管疾病、糖尿病、腫瘤、衰老等多種慢性疾病有很好的預(yù)防及輔助治療的效果,但由于膳食多酚復(fù)雜的存在體系以及體內(nèi)靶點不明的特點,對于膳食多酚健康效益及作用機(jī)制的研究和評價方法體系的建立來說,是一個巨大的挑戰(zhàn)。本文旨在開發(fā)一種精確快速的評價方式,來量化評價膳食多酚的健康效益,主要通過UPLC-MS/MS檢測手段,精準(zhǔn)分析氧化應(yīng)激狀態(tài)下的體外紅細(xì)胞中氧-還輔酶的濃度和比例,提出整合尼克酰胺二核苷酸比例法概念(簡稱IPDR),IPDR與NAD~+/NADH比值呈正相關(guān)、與NADP~+/NADPH比值呈負(fù)相關(guān),以此為數(shù)學(xué)模型推算IPDR值,實現(xiàn)多酚健康效益的定量評價。該方法有望進(jìn)一步應(yīng)用到對藥食兩用植物進(jìn)行健康效益評價及有效成分篩選,為功能食品的開發(fā)提供了新的研究思路和評價方法。主要的研究工作如下:1.利用UPLC-MS/MS的技術(shù)建立了快速精確的檢測細(xì)胞內(nèi)尼克酰胺氧-還輔酶的定量方法。該方法采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式,對NAD~+,NADH,NADP~+,NADPH的檢測靈敏度達(dá)到了50-100 fmol級別,分析每個樣品只需要5 min,可以實現(xiàn)兩對輔酶同時快速檢測。并且該檢測方法的RSD小于5%,回收率為87%-95%,檢測方法的線性范圍5-25000 nM。2.探究了體外兔紅細(xì)胞過氧化氫及高糖添加誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激模型中紅細(xì)胞溶血、脂質(zhì)過氧化等指標(biāo),發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞溶血和脂質(zhì)過氧化與過氧化氫及葡萄糖處理濃度和處理時間呈正相關(guān),最后確定了過氧化氫處理濃度為250μM、處理時間2 h和葡萄糖添加濃度為150 mM、處理時間24 h、48 h、72 h作為體外紅細(xì)胞氧化應(yīng)激細(xì)胞模型。3.選擇上述兩種紅細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,添加8種典型多酚(槲皮素QU、槲皮苷QI、金絲桃苷HY、表兒茶素ECE、蘆丁RU、兒茶素CE、矢車菊素CY、矢車菊素苷CYG)對損傷模型進(jìn)行保護(hù),檢測紅細(xì)胞溶血、脂質(zhì)過氧化、及輔酶濃度等指標(biāo),推算IPDR值并驗證該指標(biāo)與多酚對紅細(xì)胞的綜合保護(hù)作用的相互關(guān)系。結(jié)果表明8種膳食多酚在兩種氧化應(yīng)激細(xì)胞模型中對溶血及脂質(zhì)過氧化均有明顯的保護(hù)作用,但多酚分子結(jié)構(gòu)與溶血保護(hù)作用之間沒有明顯的規(guī)律。過氧化氫模型引起細(xì)胞的IPDR值大幅上升,說明急性氧化應(yīng)激模型不適合健康效益評價,而在高糖模型中的IPDR值與脂質(zhì)過氧化保護(hù)的變化趨勢相似,順序由大到小依次是QI、QU、HY、ECE、RU、CE、CY、CYG,說明高糖模型更能模擬體內(nèi)氧化應(yīng)激的狀態(tài),利用高糖添加下IPDR值可以更合理的反映這些膳食多酚的健康效益,因而確定了IPDR值評價多酚健康效益的主要實驗條件為:150 mM高糖添到體外培養(yǎng)的兔紅細(xì)胞,體外無菌孵育24 h-48 h。4.探討了IPDR法的機(jī)理。通過膳食多酚與紅細(xì)胞膜的親和力佐證多酚綜合抗氧化的健康效益。利用改量的福林酚法,分析了上述8種膳食多酚與紅細(xì)胞膜結(jié)合率。結(jié)果發(fā)現(xiàn),相同濃度下膳食多酚的結(jié)合力由高到低排列順序為:QI、QU、HY、CY、ECE、CE、RU、CYG,該順序和用IPDR模型對膳食多酚保護(hù)作用的評價表現(xiàn)一致,進(jìn)一步說明了本研究建立的膳食多酚健康效益評價模型的科學(xué)性和合理性。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R151
【圖文】：

1. 緒 論產(chǎn)物概述于古希臘語πολ ，是指許多個苯酚單位一詞最早可以追溯到 1894，距今 124 年溫·海斯藍(lán)和同事[3]。多酚是一類含有特定酚都是來源于天然動植物和微生物[6]，酚認(rèn)識是從單寧開始的，上世紀(jì) 20 年的結(jié)構(gòu)差異將單寧分成了兩大類：水解單使用，單寧的典型結(jié)構(gòu)如圖 1-1 所示。

這些化合物的快速氧化就會產(chǎn)生強烈的變暗的汁液。而汁在其早期具有輕微殺菌作用，是由于天然產(chǎn)生的一種單寧酸的多酚類物作用而產(chǎn)生的醌類物質(zhì)。在此過程中溶液會有一定的抑菌作用[47]。3 抗腫瘤膳食多酚對腫瘤的發(fā)生以及對體外培養(yǎng)癌細(xì)胞生長的抑制已經(jīng)得到認(rèn)可[48, ra R. Saunders 和 Eric Verdin 調(diào)查發(fā)現(xiàn) SIRT1 的酶活性可以被由植物多酚激活的 SIRT1 蛋白會通過細(xì)胞信號途徑激活熱休克蛋白因子 HSF1 使其對信號減弱，HSF1 對信號壓力的抵抗力增強也可能有助于癌癥的發(fā)展，幫助癌細(xì)力如圖 1-4。不同來源的人類癌癥細(xì)胞株對 HSF1 功能的依賴性更大，其維存活的能力比非轉(zhuǎn)化型的細(xì)胞要高。所以多酚可以通過調(diào)節(jié) SIRT1 的酶活發(fā)揮抗癌作用[50]。美國科學(xué)家 Fang MZ 等人證實茶多酚 EGCG 可以抑制 D轉(zhuǎn)移酶來控制癌細(xì)胞的惡性增長，這一現(xiàn)象在人類結(jié)腸癌 HT-29 細(xì)胞、食E 150 細(xì)胞和前列腺癌 PC3 細(xì)胞中也證實了。

科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論谷胱甘肽的還原，抗壞血酸濃度的穩(wěn)定，鐵硫H、NADP+、NADPH 在細(xì)胞代謝中的地位和NADH系列輔酶是細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝和能量代+和 NADH 涉及到機(jī)體 700 多個氧化還原的反酶[70]，NAD+和 NADH 不僅在三大物質(zhì)代謝中起點[71]。在生物細(xì)胞中 NAD+通過接受糖酵解和生成還原態(tài)的 NADH 如圖 1-5 所示。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 陳亞紅;細(xì)胞內(nèi)NAD水平分析及多酶氧化體系抑制效應(yīng)的研究[D];武漢大學(xué);2004年

本文編號：2768973