【摘要】：目的:通過觀察DEHP暴露對青春期大鼠甲狀腺相關(guān)激素水平的影響,分析下丘腦-垂體-甲狀腺軸調(diào)控甲狀腺激素分泌基因和蛋白表達的關(guān)系,探討DEHP對大鼠內(nèi)分泌系統(tǒng)的毒性作用和機制,為人類甲狀腺相關(guān)疾病的預(yù)防與治療提供科學依據(jù)。方法:選擇清潔級健康21日齡wistar大鼠80只,體重(55±5)g。隨機分為4組,即對照組(玉米油)、低劑量組(5 mg/kg/d,1/6000 LD50)、中劑量組(50mg/kg/d,1/600 LD50)、高劑量組(500 mg/kg/d,1/60 LD50)。每組20只,雌雄各半。適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后,每日清晨灌胃1次,連續(xù)染毒4周。每日稱重,記錄攝食和飲水量。采用HE染色法觀察下丘腦、垂體、甲狀腺組織形態(tài);采用ELISA法測定下丘腦TRH水平;采用放射免疫分析法測定血清中FT3、FT4、T3、T4、TSH水平;采用實時熒光定量PCR法測定下丘腦-垂體-甲狀腺軸相關(guān)基因m RNA的表達;采用免疫組織化學法和Western Blot法觀察和測定下丘腦-垂體-甲狀腺軸相關(guān)蛋白的定位及表達。結(jié)果:1.DEHP對青春期大鼠的一般毒性(1)染毒前三周,各組大鼠體重差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),染毒第四周,低劑量組大鼠體重明顯高于對照組(P0.05),中、高劑量組大鼠體重明顯低于低劑量組(P0.05)。。(2)染毒組大鼠攝食飲水量明顯高于對照組(P0.05)。2.DEHP對青春期大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸組織的影響(1)DEHP染毒后,各組大鼠垂體和甲狀腺臟器系數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)各組大鼠下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)細胞、神經(jīng)元細胞以及神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)正常。神經(jīng)元胞體呈多角形,胞核大而圓,居中,核仁大、深染,胞質(zhì)中充滿深紫色小塊或顆粒狀尼氏體;神經(jīng)膠質(zhì)細胞胞體、胞核均較大;也可見少突膠質(zhì)細胞,胞體小,呈圓或卵圓形。各組無明顯差異。(3)各組大鼠垂體鏡下均可見嗜酸性細胞、嗜堿性細胞、嫌色細胞和毛細血管。各組無明顯改變。(4)各組甲狀腺組織內(nèi)為大量甲狀腺濾泡,腔內(nèi)膠狀物染為紅色。濾泡間有少量的結(jié)締組織和豐富的毛細血管。低、中劑量組甲狀腺組織與對照組比較沒有明顯差別;高劑量組甲狀腺濾泡外形尚規(guī)則但體積變小,腔內(nèi)膠質(zhì)密度下降,濾泡上皮形態(tài)無異常。3.DEHP對青春期大鼠甲狀腺相關(guān)激素水平的影響(1)DEHP染毒后,高劑量組大鼠下丘腦組織中TRH水平明顯高于對照組和低劑量組(P0.05)。(2)大鼠血清中TSH含量隨染毒劑量的增加而升高,但是各組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)大鼠血清中T4、T3、FT4和FT3水平隨染毒劑量的增加而降低,高劑量組大鼠血清中上述激素水平明顯低于對照組(P0.05)。4.青春期大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸相關(guān)基因m RNA表達情況(1)DEHP染毒后,高劑量組大鼠下丘腦組織中TRH m RNA表達水平明顯高于對照組和低劑量組(P0.05)。(2)高劑量組大鼠垂體組織中TRHR m RNA表達水平明顯高于對照組(P0.05);中劑量組大鼠垂體組織中TRHR m RNA表達水平明顯高于對照組(P0.05)。(3)各組大鼠垂體TSH m RNA表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)高劑量組大鼠甲狀腺組織中TSHR m RNA表達水平明顯低于對照組和低劑量組(P0.05)。5.青春期大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸相關(guān)蛋白表達情況(1)DEHP染毒組大鼠下丘腦組織中TRH免疫組化量化結(jié)果顯示,高劑量組MOD明顯高于對照組和中劑量組(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,高劑量組大鼠下丘腦TRH蛋白表達明顯高于對照組和中劑量組(P0.05),低劑量組大鼠蛋白表達明顯高于對照組和中劑量組(P0.05)。(2)DEHP染毒組大鼠垂體組織中TRHR免疫組化量化結(jié)果顯示,高劑量組MOD明顯高于對照組和低劑量組(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,高劑量組大鼠下丘腦TRHR蛋白表達明顯高于對照組和中劑量組(P0.05)。(3)Western Blot結(jié)果顯示,各組大鼠垂體TSH蛋白表達水平差異沒有統(tǒng)計學意義。(4)DEHP染毒組大鼠垂體組織中TSHR免疫組化量化結(jié)果顯示,高劑量組MOD明顯低于對照組和低劑量組(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,高劑量組大鼠甲狀腺TSHR蛋白表達明顯低于對照組和低劑量組(P0.05)。中劑量組大鼠甲狀腺TSHR蛋白表達明顯低于對照組和低劑量組(P0.05)。結(jié)論:1.DEHP灌胃染毒可干擾青春期大鼠攝食和飲水量及體重增長情況,對大鼠生長發(fā)育產(chǎn)生影響。2.DEHP暴露后,青春期大鼠垂體和甲狀腺組織臟器系數(shù)未見異常,但DEHP可對甲狀腺產(chǎn)生組織形態(tài)學影響,3.青春期大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸內(nèi)分泌調(diào)節(jié)受到DEHP干擾,下丘腦TRH激素水平升高,血清T4、T3、FT4和FT3激素水平隨染毒劑量的升高而降低,存在劑量-反應(yīng)關(guān)系。4.DEHP暴露可不同程度影響青春期大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸TRH、TRHR、TSH和TSHR m RNA的表達和蛋白的合成,破壞青春期大鼠內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),影響激素調(diào)節(jié)。5.DEHP具有內(nèi)分泌毒性作用,可通過干擾青春期大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸的調(diào)節(jié)作用,影響甲狀腺相關(guān)激素及其受體的合成和分泌,并對甲狀腺組織產(chǎn)生毒性作用。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2751742